聚合酶链反应[PCR]实验原理和操作步骤(1)
【实验原理】聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）即PCR技术是美国Cetus公司人类遗传研究所的科学家K.B.Mullis于1983年发明的一种体外扩增特定基因或DNA序列的方法。PCR具有很高的特异性、灵敏度，在分子生物学、基因工程研究、某些疾病的诊断以及临床标本中病原体检测等方面具有极为重要的应用价值。双链DNA分子在接近沸点的温度下解链，形成两条单链DNA分子（变性），与待扩增片段两端互补的寡核苷酸（引物）分别与两条单链DNA分子两侧的序列特异性结合（退火、复性），在适宜的条件下，DNA聚合聚利用反应混合物中的4种脱氧核苷酸（dNTP），在引物的引导下，按5’-----3’的方向合成互补链，即引物的延伸。这种热变性、复性、延伸的过程就是一个PCR循环。随着循环的进行，前一个循环的产物又可以作为下一个循环的模板，使产物的数量按2n方式增长。从理论上讲，经过25-30个循环后DNA可扩增10......阅读全文
Southern－Blotting实验原理、操作步骤和注意事项1
对于大的基因组，DNA酶切图谱凭肉眼是分辨不开的（EB染色），因为大小不等的分子呈现弥散分布，只有借助灵敏的放射性同位素（或其他化学发光物质），将靶DNA在凝胶上（膜上）的带型通过特定的探针与之杂交，转换成X光片上直观的带型，才能进行相关分析。另外如果需要鉴定或寻找与已知DNA同源的 DNA片段
蛋白质的性质实验原理和操作步骤1
【目的和要求】1. 学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法及其原理。2. 了解蛋白质的两性解离性质。初步学会测定蛋白质等电点的方法。3. 加深对蛋白质胶体分子稳定因素的认识，了解蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及其相互关系。【实验原理】（一） 蛋白质及氨基酸的呈色反应蛋白质所含有的某些氨基酸具有特殊
聚合酶链反应原理介绍
PCR是体外酶促合成特异DNA片段的新方法，主要由高温变性、 低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成：即在高温（95℃）下，待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板；而后在低温（37～55℃）情况下，两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合，形成部分双链；在Taq酶的最
RtPCR实验准备及与操作步骤1
一、实验器具与材料：1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP 管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖）1个125m
RTPCR原理与实验操作步骤3
八、PCR产物电泳先将1-10μl左右PCR产物，加已点在纸上的溴酸兰，反复吸打混匀后进行电泳，一般电流为10mA，电源100V，电泳30分钟，紫外灯下观察，满意的结果扫描打印。九、几个注意点：1、逆转录的关键步骤是立即冰水浴？2、Rt时，先打开PCR预热30分钟。3、RNA抽提前，打开离心机预冷。
RTPCR原理与实验操作步骤2
二、实验器具的处理与准备1、塑料制品：（包括枪头、EP管、匀浆管等）先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中，将塑料制品逐个浸泡其中，其中小枪头需要吸管打入DEPC水，过夜，然后高压，再烤干备用，实验前将枪头等放入吸头台，再高压一次（EP管）2、玻璃制品：泡酸过夜，冲洗干净，蒙锡纸烤干备用（DEPC水泡）
聚合酶链反应设备（PCR）主要市场和主要品牌
预计到2026年底，全球PCR市场的市值将达到约70亿美元，在预测期内以高个位数的复合年增长率增长。（另一种预计是2024年达到115亿美元，在预测期内以复合年增长率6.2％的市场增长率增长。）PCR在整个分子诊断市场，占64%研发支出的增加、药物基因组学的发展、疾病自我诊断作为预防手段的趋势的增加
PCR扩增的原理和操作步骤－有哪些
PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 PCR是一种体外DNA 扩增技术，是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合反应，将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火—
反向聚合酶链反应的原理和应用特点
中文名称反向聚合酶链反应英文名称inverse PCR;iPCR定 义用于扩增已知序列的DNA旁侧未知序列的方法。即先用在已知DNA序列上没有识别位点的限制内切酶，切出包含已知DNA、而两端带有未知序列的区段，将切出的DNA区段环化，然后再按已知的DNA序列设计一对引物进行扩增。应用学科细胞生物学
随机聚合酶链反应的原理和应用特点
中文名称随机聚合酶链反应英文名称random PCR定 义采用许多序列不相同的(部分随机或全部随机序列)、短的(约10个核苷酸)引物所进行的聚合酶链反应。由于在模板DNA多个不同位置上扩增，所形成的产物长度各异，电泳图谱独特，可用于识别核酸的多态性、研究基因组的物理图谱及分析生物的进化等。应用学科
实时聚合酶链反应的原理和应用特点
中文名称实时聚合酶链反应英文名称real-time PCR定 义一种定量测定样品中特定DNA序列的聚合酶链反应。即使用标记(最常用是荧光标记)的PCR引物，因而能够通过荧光监测到每一次PCR循环后扩增所得DNA产物的量，从连续监控下获得的反应动力学曲线，可推导得样品中被扩增模板DNA的原初含量。应
PCRSSP分析实验原理和步骤
PCR 序列特异性引物（sequence specific primer,SSP）分析法是使用能够特异识别特定等位基因的引物通过PCR 扩增检测序列多态性的方法，也称作等位基因特异性引物PCR 法。本实验是应用PCR-SSP 法检测MN 基因型。 [实验原理] 根据决定某等位基因的碱基性质，
PCRSSP分析实验原理和步骤
PCR 序列特异性引物（sequence specific primer,SSP）分析法是使用能够特异识别特定等位基因的引物通过PCR扩增检测序列多态性的方法，也称作等位基因特异性引物PCR 法。本实验是应用PCR-SSP 法检测MN 基因型。[实验原理]根据决定某等位基因的碱基性质，设计3′端第一
PCRSSP分析实验原理和步骤
PCR 序列特异性引物（sequence specific primer,SSP）分析法是使用能够特异识别特定等位基因的引物通过PCR 扩增检测序列多态性的方法，也称作等位基因特异性引物PCR 法。本实验是应用PCR-SSP 法检测MN 基因型。[实验原理]根据决定某等位基因的碱基性质，设计3′端
聚合酶链反应克隆的原理
中文名称聚合酶链反应克隆英文名称PCR cloning定 义应用聚合酶链反应的技术获得DNA分子克隆的方法。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
蛋白质的性质实验原理和操作步骤12
2. 不可逆的沉淀反应在发生沉淀反应时，蛋白质的分子内部结构，空间构象遭到破坏，失去其天然蛋白质的性质，这时蛋白质已发生变性。变性后的蛋白质沉淀不能再溶解于原来的溶液中，这种沉淀反应称为不可逆沉淀反应。重金属盐、生物碱试剂、过酸、过碱、加热、震荡、超生波、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。重
DNA测序原理、仪器试剂和操作步骤1
DNA序列测定分手工测序和自动测序，手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪，其中310型是临床检测实验室中使用最
聚合酶链反应（PCR）－技术引物的最终评估
当我们经过初次筛选和二次筛选后得到的那对引物便可以用于合成,合成后我们经过 PCR扩增可以对引物进行最终的评估。一是PCR扩增的特异性和效率。经过PCR条件优化后能否获得特异性条带,即无目的条带之外的多余条带。另外,PCR产物的量是否足够,即无不出带和条带很弱的现象。二是以DNA为模板设计引物时,P
cDNA的合成实验原理和操作步骤
一、实验目的掌握植物cDNA合成的原理和方法二、实验原理反转录酶主要用于体外cDNA的合成。目前最常用的反转录酶(reverse transcriptase) 有SuperscriptII、M-MLV和AMV等。它们具有依赖于RNA或DNA的DNA聚合酶活性和RNaseH酶活性，可以以RNA分子
剪接重叠延伸聚合酶链反应的原理和应用特点
中文名称剪接重叠延伸聚合酶链反应英文名称splicing overlapping extension PCR;SOE-PCR定 义利用一系列聚合酶链反应，使产物两端彼此重叠，以便剪接成长片段，其间越过某段序列可使之缺失的PCR方法。一些基因工程抗体就是用此法制备的。应用学科生物化学与分子生物学（一
线虫unc22突变基因的克隆实验原理和操作步骤1
【实验原理】 外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA 连接酶的作用下，有Mg2+ 、ATP存在的连接缓冲系统中，将载体分子与外源DNA分子进行连接。Taq DNA聚合酶扩增的PCR产物，其DNA双链前后末端都有一
多重PCR反应中关键因素和实验步骤（1）
O. Henegariu, N.A. Heerema, S.R. Dlouhy, G.H. Vance and P.H. VogtIndiana University, Indianapoils, IN, USA and Heidelberg University, Heidelberg, Germ
Northern－blot实验操作步骤（1）
一、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳这一方法原于McMaster和Carmichael（1977）。含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳，因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H+梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率（Miller
逆转录聚合酶链反应（RTPCR，rtpcr）
实验方法原理逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR
逆转录聚合酶链反应（RTPCR，rtpcr）
实验方法原理 逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板
逆转录聚合酶链反应（RTPCR，rtpcr）
逆转录-聚合酶链反应 （Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）可以：(1）分析基因的转录产物；（2）获取目的基因；（3）合成cDNA探针；（4）构建RNA高效转录系统。实验方法原理逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Tran
逆转录聚合酶链反应（RTPCR，rtpcr）
实验方法原理 提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增，从而获得目的基因或检测基因表达。
聚合酶链反应的用途和特性
PCR反应扩增出了高的拷贝数，下一步检测就成了关键。荧光素（溴化乙锭，EB）染色凝胶电泳是最常用的检测手段。电泳法检测特异性是不太高的，因此引物两聚体等非特异性的杂交体很容易引起误判。但因为其简捷易行，成为了主流检测方法。近年来以荧光探针为代表的检测方法，有逐渐取代电泳法的趋势。
肿瘤细胞侵袭试验原理和实验步骤1
一、原理Matrigel 是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分，含有LN、IV型胶原、接触蛋白和肝素硫酸多糖，铺在无聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯滤膜上，能在DMEM培养基中重建形成膜结构，这种膜结构与天然基质膜结构极为相似。滤膜孔径一般为8um，而且膜孔都被Matrigel覆盖，细胞不能自由穿过，必须分泌
pcr扩增的原理和步骤
实验方法原理①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应做准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③