RNA抽提注意事项和经验指南4
经典抽提小技巧 1： Phenol 纯化：将等体积的 1:1 Phenol/Chloroform 加入，剧烈混允 1-2 分钟。高速离心 2 分钟。小心取上清 (80-90%)。决不能取到中间层。可以使用等体积的反应液加入 Phenol/Chloroform 中，同样再取出上清。将两次的上清混在一起用于核酸沉淀，可以提高得率。混允时不能太温和，也不要试图取出全部上清。2：70-80% 乙醇洗涤：洗涤时，一定要将核酸悬浮起来，才能保证残留的盐被洗去。同时，在倒掉乙醇后，立即高速离心数秒，再用移液器去除残留的乙醇。室温静置 5-10分钟后，溶解。特殊组织的抽提 纤维组织：心脏/骨骼肌等纤维组织抽提 RNA 关键在彻底破碎组织。这些组织细胞密度低，故单位重量的组织 RNA 的含量就少，最好用尽可能多的起始量。一定要在冷冻条件下将组织彻底磨碎。蛋白/脂肪含量高的组织：脑/植物脂肪含量高，PCI 抽提后，上清含白色絮状物。必须用氯......阅读全文
CTAB法抽提核酸
CTAB 法 ①取0. 2g 各中药材样品分别用液氮( Ⅰ) 、玻璃砂( Ⅱ) 、氧化铝( Ⅲ) 研磨。②加入56 ℃ 10 倍预热的缓冲液C 于56 ℃温育30 min , 离心, 取上清液加入等体积氯仿- 异戊醇(24∶1) 抽提(室温, 不能低于15 ℃, 否则CTAB 会沉淀) , 10 0
DNA抽提指南(TRIZOL)
按照RNA 分离操作方案在完全移去水样层后，匀浆中的DNA 存在于中间层和苯酚层中也可以被分离出来。在沉淀和多次洗脱后，DNA 溶解在8 mM NaOH中。用TRIZOL试剂从组织和培养细胞中完全回收的DNA 可以用来做样品中DNA 含量的测定。同时抽提的基因组DNA 可以用于对Northern a
蛋白抽提指南（TRIZOL）
在用酒精沉淀出DNA（DNA抽提中的步骤一）后剩余的苯酚—乙醇上清中可以抽提出蛋白。沉淀的蛋白可通过蛋白[质]印迹法对样品中某一特殊的蛋白质进行分析。试剂所需，但没有随同提供的物品：* 异丙醇* 0.3M盐酸胍(用95%酒精配制)* 无水乙醇* 1% SDS1.蛋白质的沉淀用异丙醇从苯酚—乙醇上清中
RTPCR实验方法大全(抽提RNA，RT，PCR)2
关于平台期和线性期的问题，实际上线性期是指数期，只不过碰巧2的冥和2的倍数是相同的。看上去任何一个时期都可以，实际上是不对的，因为牵涉到酶促动力学的问题，这个我也不懂，有一些专门的文章，好像，涉及到很多化学的东西。我们学医的，也没必要知道那些，但是其中主要是因为模板引物酶原料和buffer之间的关系
RTPCR实验方法大全(抽提RNA，RT，PCR)3
4. 配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC，在37℃处理12hr以上。然后用高压灭菌除去残留的DEPC。不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制，然后经 0.22μm滤膜过滤除菌。5. 操作人员戴一次性口罩、帽子、手套，实验过程中手套要勤换。6. 设置RNA操作专用实验室，所有器
RTPCR实验方法大全(抽提RNA，RT，PCR)4
3． 由于与反义RNA探针杂交的样品RNA仅为该RNA分子的部分片段，因此，部分降解的RNA样品仍可进行分析。4． 步骤较少，耗时短。与Northern杂交相比，省去了转膜和洗膜的过程。5． RNA-RNA杂交体稳定性高，无探针自身复性问题，无须封闭。6． 一个杂交体系中可同时进行多个探针杂交，无竞
RTPCR实验方法大全(抽提RNA，RT，PCR)1
RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温
RTPCR实验方法大全(抽提RNA，RT，PCR)6
可能问题出在标本的保存：一般四小时之内就应处理，分离出细胞说的是套式PCR,可以在你的第一次PCR两个引物内,再设计一对引物进行第二次PCR就行了如果你的第一次PCR刚好包括目的片段,那只好设计个更长的了第二次的引物设计要求可以低一点以50μl体系为例引物各1μl第一次PCR产物5μl二次PCR和巢
RTPCR实验方法大全(抽提RNA，RT，PCR)5
室温下充分混匀，离心10000g×2min。取上层液置另一0.5 ml离心管中，加入100μl氯仿，混匀，离心10000g×2min。将上层液转移至另一0.5ml 离心管中，再加入3M NaAc 10μl、预冷无水乙醇250μl，混匀后，-20OC静置30min。4OC离心13500g×10
RNA－抽提中自备有机溶液的配制及保存问题
看了离心机的配平讨论帖，才决定发起该帖的。该帖的问题也比较简单，但人人都会遇到，所以帖之。实验者，5 成用心，3+ 成用脑，2- 成用手是也。假定你抽提 RNA 时使用到的有机试剂 - 氯仿、异丙醇、无水乙醇 - 都是国产的 (这是完全可以使用的)。我的问题是：你采取了什么措施来降低或者杜绝 RNa
罗氏FFPET组织样本抽提RNA试剂盒实验结果分析
High Pure FFPET RNA Isolation Kit基于离心柱法的抽提原理，在柱上直接进行高效DNase消化，在整合的实验流程中方便地去除残留DNA。图1：抽提获得宽泛的RNA片段范围，FFPET RNA抽提物片段长度范围在100-4000bp 使用3中不同的方法从乳腺癌组织的5um
全自动核酸抽提仪
全自动核酸抽提仪是一种用于基础医学、临床医学领域的分析仪器，于2016年10月25日启用。 技术指标 1.采用QIAGEN硅胶膜离心柱技术,2.针对多种生物样本（包括全血、血浆、血清、尿液、粪便、细胞和FFPE组织或新鲜组织等），可以实现对基因组DNA，病毒核酸，质粒DNA，microRNA
脂肪抽提仪操作须知
传统的脂肪提取器是由提取瓶、提取管、冷凝器三部分组成，利用的是溶剂回流和虹吸的原理。但是这一仪器有一弊端，各部分连接处容易漏气，且工作效率不高。今天小编要给大家介绍一下脂肪抽提仪，其根据索氏抽提原理，用重量测定方法来测定脂肪含量，常被用于食品、油密封圈受乙醚变形泄露的问题。脂肪抽提仪在给人们
核酸抽提经验及原理
1、核酸抽提原理 简单地讲，核酸抽提包含样品的裂解和纯化两大步骤。裂解是使样品中的核酸游离在裂解体系中的过程，纯化则是使核酸与裂解体系中的其它成分，如蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。 经典的裂解液几乎都含有去污剂 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等) 和盐
热浸提和索氏抽提的区别
粗脂肪含量是粮食、油料、饲料等产品标准中重要质量指标，是评价产品品质，组织生产的重要依据之一。 国内外测定粗脂肪含量方法有十余种之多，索氏抽提法是目前应用广泛测定方法，是公认的脂肪含量测定的经典方法。 经典索氏提取法原理：测定脂肪是将样品放在抽提筒内，以水浴蒸馏冷凝的Ether进行回流浸提，一般要十
麦胚抽提物的概念
中文名称麦胚抽提物英文名称wheat-germ extract定 义用于测定信使核糖核酸(mRNA)活性的一种体外翻译分析系统。系从小麦胚中制备的无细胞抽提物，须用RNA酶去除其中内源的mRNA。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
蛋白质的抽提实验
实验材料 转型菌株pQG11 M15 [pREP] 单一菌落试剂、试剂盒 LB amp kan液体培养基IPTGNa3PO4·12H2ONaClEDTATriton X-100液氮仪器、耗材 恒温震荡培养箱高速冷冻离心机离心管冰筒实验步骤 一、仪器用具恒温震荡培养箱37℃；高速冷冻离心机及离心管 （
蛋白质的抽提实验
实验方法原理 蛋白质在细菌中表现后，以反复的冷冻-解冻方法打破细胞，再用硫酸铵把蛋白质沉淀下来，此步骤可以去除大部份核酸、多醣、脂质等杂物。 实验材料 转
奶粉脂肪抽提仪操作步
脂肪是奶粉中重要的营养物质，也是直接反映奶粉质量的重要指标。近几年来，乳制品安全问题频频曝光，使得消费者对乳制品安全忧心忡忡。所以，高效快速地检测奶粉我品质，控制奶粉质量是解决问题的关键。 目前，奶粉脂肪含量测定方法大多为化学检测技术，这类方法虽然精度高，但耗时费力，操作过程相对复
酵母抽提物的发展情况
最新数据表明, 近年来,中国的酵母抽提物年均需求增长率高于10%,而在美国和欧洲市场的增长速度大约在5%。目前全球酵母提取物的年生产规模在16万吨左右。 全球现状 20世纪初,YE产品率先在欧洲国家出现,60年代开始了工业化生产阶段,但直到90年代后,随着YE的优势发挥、应用领域扩大以及植物
WB生物样本总蛋白抽提
一、贴壁细胞蛋白提取A1..将水浴锅的温度调至100℃，等水浴锅达到100℃温度后，取出需要收样的细胞的培养皿或者孔板。2.将缓冲液（1Xloading buffer）置于100℃水浴锅中预热10min。（loding buffer： 是5Xloding buffer用纯水稀释到1Xlodingbu
酵母抽提物的基本介绍
酵母抽提物是以食品用酵母为主要原料,以酵母自身的酶或外加食品级酶的共同作用下,酶解自溶（可再经分离提取）后得到的产品,并富含氨基酸、肽、多肽等酵母细胞中的可溶性成分。根据需要可添加适量辅料进行调配,也可在生产后期增加美拉德反应工艺,属于食品配料。 酵母抽提物（又称酵母提取物、酵母味素）,英文名
质粒DNA的抽提与纯化
目的 ： 采用碱变性法，学习小规模制备质粒DNA的技术原理 ： 碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完
索氏抽提的具体介绍
从固体物质中萃取化合物的一种方法是，用溶剂将固体长期浸润而将所需要的物质浸出来，即长期浸出法。此法花费时间长．溶剂用量大、效率不高。在实验室多采用脂肪提取器(索氏提取器)来提取、脂肪提取器(如图所示)就是利用溶剂回流及虹吸原理，使固体物质连续不断地被纯溶剂萃取，既节约溶利萃取效率又高。萃取前先将固体
RNA抽提过程介绍
一，准备工作 1， 实验器具与材料: RNA 抽提 (1) 移液枪:1ml、200ul、10ul (2) 吸头:1ml、200ul、20ul (3) 吸头台:放置1ml吸头的一个，放置200ul和20ul的吸头一个 (4) EP管1.5ml、100ul (5)
核酸的抽提mRNA提取分离技巧
与rRNA 和tRNA 不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA 在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA 中分离mRNA dmonds等，1971;At Leder，1972）。在构建cDNA文库时， 必须经上述纯化步骤制备mRNA
沥青抽提仪的使用方法
一）准备工作 1、按T07722-93沥青混合料含量试验（离心分离法），在拌和厂从运料卡车取沥青混合料试样，施在金属盘中适当拌和，待温度降100℃以下时，用大烧杯取混合料试样质量1000g左右（M）（粗粒式沥青混合料用高限，细粒式用低限，中粒式用中限）准确至0.1g。 2、如从路上用钻机
脂肪抽提仪的完整测定方法
脂肪存在于很多物质，最常见的还是在我们的日常接触的食品中，比如：牛奶、肉类等，人体中的脂肪含量很大一部分是和我们每天摄入的食品密切相关的，作为一种营养物质，和蛋白质一样，存留在人体中含量过多过少都不行。饮食我们 可以控制，但食品中的脂肪含量是需要检测才能得出的，为了人类健康发展，如今，很多食
抽提质粒的基本原理
现在的质粒抽提一般是利用碱裂解法，是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异达到分离目的。高pH使质粒DNA和染色体DNA变性，同时沉淀蛋白质。再将pH值调至中性，质粒DNA较小，很容易复性成双链。而染色体DNA较大，不会复性，缠结成网状不溶物质，从而可以通过离心除去。
质粒抽提的原理及操作步骤
质粒抽提方法即去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。今天我们主要来了解一下质粒抽提原理和操作步骤。 ⒈质粒抽提原理 其中用到三种溶液以及硅酸纤维膜（超滤柱）。 溶液Ⅰ：50 mM葡萄糖 / 25 mMTris-HCl/ 10 mMEDTA，pH 8