兔肝RNA的制备及测定实验原理和操作步骤
实验原理细胞内大部份RNA均与蛋白质结合在一起,并且多以核蛋白的形式存在。因此,分离制备RNA 时,首先遇到的是必须使RNA与蛋白解离,并除去蛋白质。由于RNA的种类来源和存在形式不同,所用的制备方法各异,一般常用的方法有,盐酸胍法,去污剂法和苯酚法。其中,以苯酚法使用较为广泛。产品纯度高,适合小规模生产。动物组织中以肝脏器官RNA含量较为丰富。经组织匀浆用苯酚处理并离心后RNA溶于上层被酚饱和的水相中,DNA和蛋白质则留在酚层中,向水层中加入乙醇后,RNA即以白色絮状沉淀析出。此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方法提取的的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA;其工艺简单,所提取的核酸均为变性RNA,只能用作制备核苷酸原料。本实验就是将兔肝组织,在酚与十二烷基硫酸钠的存在下,RNA与蛋白质分离使蛋白质变性凝固。RNA溶解在水相中,用乙醇使RNA从水相中沉淀,达到分离。 RNA含量的测定,除了可用紫外吸......阅读全文
兔的外形及解剖实验(二)
三、消化系统 处死实验动物:将兔置于解剖盘内或实验室的地面上,在耳缘静脉处插入针头,注射进10mL空气,几分钟内兔即可死亡。注意从耳缘静脉的远端开始注射。也可以用乙醚熏或断颈法处死活兔。 解剖:取断颈处死的兔,仰置于解剖盘中。用线绳固定四肢,用棉花蘸清水润湿腹部正中线的毛,然后自生殖器开口稍前方处,
兔感染试验的注意事项
不合宜人群: 没有 检查前禁忌:注意正常的生活饮食习惯,注意个人卫生。禁止进行不洁性交。 检查时要求:积极配合医生
兔密螺旋体病的介绍
兔密螺旋体病,又称兔梅毒病,是兔的一种慢性传染病,也称性螺旋病、螺旋体病。以外生殖器、颜面、肛门等皮肤及黏膜发生炎症、结节和溃疡,患部淋巴结发炎为特征。
兔瘦素(leptin)酶联免疫分析
兔瘦素(leptin)酶联免疫分析检测范围:使用目的:本试剂盒用于测定兔血清、血浆及相关液体样本中瘦素(leptin)含量。实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔瘦素(leptin)。用纯化的兔瘦素(leptin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入瘦素( leptin)
兔密螺旋体病的病原
病原为兔密螺旋体,呈纤细的螺旋状构造,通常用姬姆莎或石炭酸复红染色,但着色力差,通常用暗视野显微镜检查,可见到旋转运动。主要存在于病兔的外生殖器官及其他病灶中,目前尚不能用人工培养基培养。螺旋体的致病力不强,一般只引起肉兔的局部病变而不累及全身。抵抗力也不强,有效的消毒药为1来苏儿,2%氢氧化钠
兔胶体金检测技术IGSS法
兔胶体金检测技术是用金属离子和金属蛋白复合物应用免疫组化原理检测组织内抗原抗体的技术,常用胶体金(铁、汞等)重金属离子。由于胶体金容易制成各种大小的颗粒且有很高的电子密度及分辨率,又不影响抗体的活性,因此既可用于免疫组化又适于免疫电镜技术。免疫金银法(IGSS)操作流程1、脱蜡至0.05mol/LT
美国发生兔出血症病毒疫情
据世界动物卫生组织(OIE)消息,12月12日,美国农业部动植物卫生检验局向OIE报告称, 美国发生兔出血症病毒疫情。 此次疫情发生于宾夕法尼亚州杰斐逊县的一处农场,疫情于12月7日得到确认。疫情源头未知。
兔密螺旋体病的诊断
病兔多为成年家兔,母兔受胎率低。临床检查无全身症状,仅在生殖器官等处有病变。有条件的兔场可作显微镜涂片检查兔密螺旋体。
兔膀胱平滑肌细胞培养
实验方法原理 运用显微手术器械在肉眼下仔细剔除膀胱黏膜层及浆膜层后,完整分离膀胱平滑肌层。然后以酶分离法获取兔膀胱平滑肌细胞,体外原代和传代培养分离细胞。在倒置显微镜下观察细胞形态及生长状况,同时进行细胞爬片H-E染色和透射电镜等形态学观察分析,并应用免疫荧光染色平滑肌特有的α-肌动蛋白进行细胞学鉴
兔多克隆抗血清的制备实验
实验材料 抗原试剂、试剂盒 PBS乙醇仪器、耗材 注射针头注射器培养箱实验步骤 1. 取2 ml 的弗氏完全佐剂加到2 ml 的溶于PBS的纯化抗原中,使之乳化。用3 ml 注射器抽取此乳化液,接上22G注射针头,排出注射器中的气泡。 2. 将兔子敢在固定架上,用一只手抓住兔的颈背部毛皮,另一只
兔密螺旋体病的诊断
病兔多为成年家兔,母兔受胎率低。临床检查无全身症状,仅在生殖器官等处有病变。有条件的兔场可作显微镜涂片检查兔密螺旋体。
兔肾素(Renin)ELISA试剂盒
兔肾素(Renin)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗兔 Renin 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 Renin与单抗结合,加入生物素化的抗兔Renin,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Str
兔密螺旋体病的治疗
初期可肌肉注射青霉素,成年兔2万单位3只,每天5次,连用3天。新胂凡钠明(九一四),每千克体重232毫克,用注射用水或生理盐水配成(溶液,耳静脉注射,隔两周重复一次。注意现配现用,否则分解有毒。同时应用青霉素,效果更好。患部用硼酸水或高锰酸钾溶液或肥皂水洗涤后,再涂擦青霉素软膏或碘甘油;或者涂青
兔出血症病毒结构研究取得进展
在科技部、国家自然科学基金委员会和中科院的资助下,中科院生物物理所孙飞研究组与其合作者在兔出血症病毒结构及其表位抗原研究中取得重大突破,该成果近日在线发表于国际病原学杂志《公共科学图书馆―病原体》(PLOS Pathogens)。 兔出血症(RHD)是一种急性、致死传染病,家兔在感染后
免疫学实验兔感染试验介绍
兔感染试验介绍: 兔感染试验(RIT)是检测梅毒螺旋体最敏感可靠的方法,RIT能证实活的梅毒螺旋体存在。 兔感染试验正常值: 体内菌群的种类和比例正常,人体处于动态平衡健康状态。 兔感染试验临床意义: 异常结果: ①一期梅毒。即硬下疳 ,潜伏期2-4周,外生殖器部位
RNA提取时RNA降解原因
1 ) 新鲜细胞: 裂解液的量不足,使得裂解不充分。 2 ) 新鲜组织: 某些含有内源性核酸酶的样品,很难避免RNA酶的降解,建议采用的方法为在液氮条件下将组织研碎,并且,匀浆时采用更多的裂解液。 3 ) 冷冻样品: 样品取材后应该迅速置于液氮中冷冻存放,然后转移到-70℃冰箱存
RNA干扰技术(RNA-interference,RNAi)
1995年,康乃尔大学的Su Guo博士在试图阻断秀丽新小杆线虫(C. elegans)中的par-1基因时,发现了一个意想不到的现象。她们本是利用反义RNA技术特异性地阻断上述基因的表达,而同时在对照实验中给线虫注射正义RNA(sense RNA)以期观察到基因表达的增强。但得到的结果
RNA干涉(RNA-Interference,RNAi)(2)
早期的 RNAi 技术可用在研究与胚胎发育相关基因的功能上,但是由于细胞分裂造成 dsRNA 的稀释,使得这种方法在研究成体的基因功能时有一定的局限性。为弥补早期 RNAi 技术的不足,Tavernarakis 等将 RNAi 技术做了一些改进及更动,将目的基因之标的序列以反向重复的方式,由
RNA干涉(RNA-Interference,RNAi)(1)
基因沉默(gene silencing)是生物体内特定基因由于种种原因不表达的遗传现象。一方面,基因沉默是生物遗传操作创造新的遗传修饰生物(genetically modified organisms)的障碍,另一方面,它又是植物抵抗外来核酸入侵(如病毒)的一种反应,为植物抗病毒的遗传育
RNA提取心得(组织RNA提取和培养细胞的RNA提取)
一.组织RNA提取 1.最好新鲜组织,这样RNA提取的效果比较好,这是肯定的。 2. 如果不是新鲜的(最好在半年之内,-80℃或者液氮中冻存的)组织,注意不要反复冻融,从冰冻状态拿到0-4℃,注意不要拿到常温,待组织解冻后,用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织,称重后,放到预冷的匀浆器中,然后
RNA干扰相关知识RNARITS)
RNA-induced initiation of transcriptional gene silencing(RITS):是一种组织染色质变型的复合物。RITS复合物也包含Dicer加工形成的siRNA和AGO蛋白质,通过结合到异染色质的基因池上来促使异染色质上基因的沉默。
RNA分离与分析实验_分离RNA
实验材料标记细胞试剂、试剂盒乙酸缓冲液仪器、耗材漩涡器实验步骤1. 收获标记细胞。2. 小心处置上清液,用含 0.3% SDS 的 10 mmol/L 乙酸缓冲液悬浮细胞沉淀,每 1 ml 压积细胞用 10 ml 缓冲液。3. 于室温用漩涡器振荡裂解细胞。4. 加等体积的水饱和酚,充分混匀,于 60
反义技术——RNA干扰(RNA-interference,RNAi)
最近由于RNA干扰(RNA interference,RNAi)的发现使反义领域的研究增多。这种自然发生的现象最早是在秀丽线虫中发现的(1),是序列特异性地使转录后的基因沉默的有力机制。由于最近两年在RNAi领域取得的进步,已经有许多这方面的综述发表(2-4)。RNA干扰是由长的双链 RNA
RNA干扰相关知识RNARISC
RNA-induced silencing complex(RISC):一种RNA-蛋白质复合物,通过与目标mRNA完全或者部分的互补配对来实施切割或者翻译抑制功能。SiRNA组装siRISC,miRNA组装miRISC。RISCs(无论siRISC还是miRISC)包括两种类型:切割型和不切割型。
兔感染试验的临床意义是什么
异常结果: ①一期梅毒。即硬下疳 ,潜伏期2-4周,外生殖器部位发生暗红色硬肿块 、浅溃疡 ,有软骨样硬度,周围淋巴结肿大。②二期梅毒。在一期梅毒 1-2 个月之后,全身皮肤、粘膜发生对称泛发皮疹、斑疹、丘疹、脓疱疹等。粘膜可发生粘膜斑、扁平湿疣,传染性强。③三期梅毒。发生在感染后2-3年乃至1
兔骨保护素(OPG)ELISA试剂盒
兔骨保护素(OPG)ELISA试剂盒 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗兔 OPG 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 OPG与单抗结合,加入生物素化的抗兔OPG,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,最后加终止
兔C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒
兔C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗兔 CRP 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 CRP与单抗结合,加入生物素化的抗兔CRP,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptav
博纳艾杰尔:虎跃龙腾,兔飞猛进!
天津博纳艾杰尔科技有限公司自2006年成功主标了国家科技部“十一五”科技支撑计划中“高性能色谱分离材料和色谱柱的研制”项目,从而成为塘沽区内第一家获得国家科技部"十一五"科技支撑计划立项的民营企业。该项目已经于2010年底完成,并顺利通过项目验收,博纳艾杰尔科技承担的“水体污染控制与治理科技重大
兔膀胱平滑肌细胞培养实验
酶分离法 实验方法原理 运用显微手术器械在肉眼下仔细剔除膀胱黏膜层及浆膜层后,完整分离膀胱平滑肌层。然后以酶分离法获取兔膀胱平滑肌细胞,体外原代和传代培养分离
临床化学检查方法介绍兔感染试验介绍
兔感染试验介绍: 兔感染试验(RIT)是检测梅毒螺旋体最敏感可靠的方法,RIT能证实活的梅毒螺旋体存在。兔感染试验正常值: 体内菌群的种类和比例正常,人体处于动态平衡健康状态。兔感染试验临床意义: 异常结果: ①一期梅毒。即硬下疳 ,潜伏期2-4周,外生殖器部位发生暗红色硬肿块 、浅溃疡 ,有