兔多克隆抗血清的制备实验
实验材料 抗原试剂、试剂盒 PBS乙醇仪器、耗材 注射针头注射器培养箱实验步骤 1. 取2 ml 的弗氏完全佐剂加到2 ml 的溶于PBS的纯化抗原中,使之乳化。用3 ml 注射器抽取此乳化液,接上22G注射针头,排出注射器中的气泡。 2. 将兔子敢在固定架上,用一只手抓住兔的颈背部毛皮,另一只手托住兔的后腿及臀部,将兔束紧固定以使后肢不能伸张,用70%乙醇对所要注射的区域进行清洁消毒,在后肢大腿肌肉内进针约1 cm 深,毎条大腿肌肉内最多注射0.5 ml 乳化液。 3. 四周后,用1 mg 的混溶干弗氏不完全佐剂的抗原乳化液(1:1)对兔进行肌肉内加强免疫注射,操作步骤同1和2,初次加强免疫后2周再次进行加強免疫注射。4. 第二次加强免疫注射10天后,从兔的耳缘静脉处放血。(1)先将兔固定在固定架上(固定紧),使其耳朵伸出,用70%乙醇洗洁消毒一侧耳朵。(2)......阅读全文
兔多克隆抗血清的制备实验
实验材料 抗原试剂、试剂盒 PBS乙醇仪器、耗材 注射针头注射器培养箱实验步骤 1. 取2 ml 的弗氏完全佐剂加到2 ml 的溶于PBS的纯化抗原中,使之乳化。用3 ml 注射器抽取此乳化液,接上22G注射针头,排出注射器中的气泡。 2. 将兔子敢在固定架上,用一只手抓住兔的颈背部毛皮,另一只
兔多克隆抗血清的制备实验——耳动脉放血
实验材料抗原试剂、试剂盒PBS乙醇仪器、耗材注射针头注射器培养箱实验步骤1. 准备用于放血的家兔(见基本方案) 2. 将靠近家兔头部的半只耳朵托在梅指和食指上,用中指和无名指弯曲剩余的半只耳朵使之下垂,以便使血液随重力下流,用一个18G注射用针头(不带注射器)沿着兔耳中动脉进针,针尖指向兔耳根部
兔多克隆抗血清的制备实验——皮内注射免疫法
实验材料抗原试剂、试剂盒PBS乙醇仪器、耗材注射针头注射器培养箱实验步骤1. 按基本方案中步骤1制备免疫兔用的抗原。 2. 牢牢地抓住兔子,剃除其背毛,用70%乙酵消毒其暴露的皮肤。用拇指和食指将需要免疫注射的区域的皮肤张开,用3 ml 注射器带24G注射针头以相对皮肤30。的角度进针(针尖的斜
兔多克隆抗血清的制备实验——肌肉内注射免疫法
实验材料抗原试剂、试剂盒PBS乙醇仪器、耗材注射针头注射器培养箱实验步骤1. 取2 ml 的弗氏完全佐剂加到2 ml 的溶于PBS的纯化抗原中,使之乳化。用3 ml 注射器抽取此乳化液,接上22G注射针头,排出注射器中的气泡。 2. 将兔子敢在固定架上,用一只手抓住兔的颈背部毛皮,另一只手托住兔
兔多克隆抗血清的制备实验——皮下组织注射免疫法
实验材料抗原试剂、试剂盒PBS乙醇仪器、耗材注射针头注射器培养箱实验步骤1. 准备用于注射家兔的抗原,并准备用于皮下注射免疫的家兔(方法同皮内注射)。2. 将家兔背部皮肤捏出,以远离其下的肌肉,用24G注射针头全程穿剌,进入皮下,小心勿刺入肌肉组织中,在4个不同的部位各注射0.5 ml 抗原。
多克隆抗血清的制备
材 料(带 V 项 目 见 附 录 1)家兔、大鼠、小鼠或合适品系的仓鼠弗 氏 完 全 佐 剂(CFA; Sigma)含 1〜2 mg/m l 纯化蛋白抗原的 PBS 溶液:吸取其中 10〜20 Mg,在考马斯亮蓝染色的 SDS-聚丙烯酰胺凝胶上分析未见有污染的条带VPBS弗 氏 不 完 全 佐 剂
多克隆抗血清的制备1
首要的问题是需要制备多克隆抗体还是单克隆抗体。多克隆抗体的优势在于可在多种不同生物种系中制备,花费精力较少。另外 ,多克隆抗体特别适用于分析变性蛋白质以及免疫沉淀法和免疫印迹法。作者:J.E.科利跟等,译者:曹雪涛等,本实验来自「精编免疫学实验指南」—使用弗氏佐剂制备多克隆抗体的免疫接种法实验步骤材
【卡梅德生物】兔多抗制备|兔多克隆抗体制备|兔抗体
多克隆抗体是指由多种免疫细胞产生的针对特定抗原的抗体群体。与单克隆抗体相比,多克隆抗体可以识别抗原的多个表位,因此在某些应用中更为有效。兔是制备多克隆抗体的常用动物模型,因其体型适中、免疫反应良好且抗体产量高。 兔多抗(Polyclonal antibodies)是一种多克隆抗体,由多个B细胞
抗血清的制备
一、目的:1、了解抗血清制备的基本过程:2、掌握抗血清的收集和保存方法。二、原理:抗血清为含有某一类具有特异免疫功能的抗体分子的血清,一般为动物被人工注射某类抗原后制备的动物血清。高效价的抗血清用于研究工作以及疾病的诊断和治疗。一种抗原能否引起抗体生成反应,一方面取决于抗原分子表面有无抗原决定簇(A
抗血清的制备
1、动物的选择羊、马、鸡、猴、豚鼠,都是常用的免疫动物,在实验中,选择动物时应考虑抗原与动物的种属关系、抗原性质与动物种类、免疫血清的需要量、免疫血清的要求以及动物个体等因素。免疫用动物应选适龄、健壮.最好为雄性。最常用的实验动物是家兔,一般选择选择年龄在6个月以上当年繁殖的♂性,体重2 ~3公斤,
制备克隆实验
试剂、试剂盒 ATP-巯基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶连接缓冲液T4DNA 连接酶平末端插入物克隆载体培养基仪器、耗材 FALCON 2059 多聚丙烯试管37°C 恒温箱 水浴箱实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂ATP(10 mmol/L)β-巯基乙醇(可选择)IPTG(100 mm
制备克隆实验
试剂、试剂盒 ATP -巯基乙醇 IPTG X-gal 平末端限制酶 连接缓冲液 T4DNA 连接酶 平末
制备克隆实验
试剂、试剂盒ATP-巯基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶连接缓冲液T4DNA 连接酶平末端插入物克隆载体培养基仪器、耗材FALCON 2059 多聚丙烯试管37°C 恒温箱水浴箱实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂ATP(10 mmol/L)β-巯基乙醇(可选择)IPTG(100 mmol/L
抗血清制备的原理
抗血清为含有某一类具有特异免疫功能的抗体分子的血清,一般为动物被人工注射某类抗原后制备的动物血清。高效价的抗血清用于研究工作以及疾病的诊断和治疗。一种抗原能否引起抗体生成反应,一方面取决于抗原分子表面有无抗原决定簇(Antigenic determinant),另一方面取决于机体的免疫状态,当具备以
抗血清的制备(一)
一、目的: 1、了解抗血清制备的基本过程: 2、掌握抗血清的收集和保存方法。 二、原理: 抗血清为含有某一类具有特异免疫功能的抗体分子的血清,一般为动物被人工注射某类抗原后制备的动物血清。高效价的抗血清用于研究工作以及疾病的诊断和治疗。 一种抗原能否引起抗体生成反应,一
抗血清的制备(二)
3、免疫途径,剂量和免疫周期 抗原注射途径可根据不同抗原及试验要求,选用皮内、皮下、肌肉、静脉或淋巴结内等不同途径注入抗原进行免疫。一般常采用背部、足掌、淋巴结周围、耳后等处皮内或皮下多点注射。初次免疫与第二次免疫的间隔时间多为2~4周。常规免疫方案为抗原加CFA皮下多点注射进行基础免疫;再以
我国完成世界首例转基因克隆兔实验
上海14日消息 我国完成的世界首例转基因克隆兔到今天已存活3个月。日前在上海通过分子生物学鉴定,结果显示,实验兔含有外源的绿色荧光蛋白基因,证明其为转基因克隆兔。 左为克隆兔,右为代孕兔。来源:科技日报 据悉,研究人员在上海市新华医院经过将近一年的努力,攻克了兔体细胞基因转染、转基因细胞系
抗血清的制备方法和过程
1、动物的选择羊、马、鸡、猴、豚鼠,都是常用的免疫动物,在实验中,选择动物时应考虑抗原与动物的种属关系、抗原性质与动物种类、免疫血清的需要量、免疫血清的要求以及动物个体等因素。免疫用动物应选适龄、健壮.最好为雄性。最常用的实验动物是家兔,一般选择选择年龄在6个月以上当年繁殖的♂性,体重2 ~3公斤,
抗血清制备法生化检验
抗血清制备法:抗血清指含有抗体的血清。传统的抗血清制备方法是将某种抗原通过多次注入动物,数十天后或数月后,采集动物血,立即分离出血清。此抗血清在保存或应用前必须作效价和特异性鉴定及纯化。(一)免疫动物的选择免疫动物的选择基本要求:1.抗原与免疫动物的种属差异越远越好。2.动物必须适龄、健壮、无感染、
单克隆抗体的制备实验
单克隆抗体的制备实验可以用于:(1)将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞杂交, 获得既能产生抗体, 又能无限增殖的杂种细胞,并以此生产抗体;(2)该技术是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体,对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。实验方法原理单克隆抗体技术(monoclo
单克隆抗体上清制备实验——大量制备
实验材料目的杂交瘤试剂、试剂盒完全 DMEM-10 培养液(含 5~10 mmol/L HEPES pH 7.2~7.4)仪器、耗材250 ml 无菌锥形离心管转瓶培养装置850 cm2 旋转培养瓶175 cm2 组织培养瓶实验步骤1. 重复基本方案 1 步骤 1,并按 1:10 分传到终体积为 1
单克隆抗体上清的制备实验
实验材料 杂交瘤试剂、试剂盒 完全培养基仪器、耗材 培养箱转子离心机实验步骤 1. 将杂文瘤置于一个盛有完全DMEM-10培养基的175 cm2组织培养瓶中,置37 ℃CO2培养箱中,直至生长旺盛适于分传。2. 按1:10的比例将细胞分传到一个新的175 cm2的培养瓶中,加入完全DMEM-10
单克隆抗体的腹水制备实验
实验材料 杂交瘤细胞试剂、试剂盒 完全DMEM-10HEPES丙酮酸钠PBS仪器、耗材 注射针头离心管转子离心机实验步骤 1. 用20G或22G的注射针,小鼠腹膜内注射降植烷,每只鼠0.5 ~ 1 ml,1周后接种细胞。 2. 在175 cm2培养瓶中加完全DMEM-10/HEPES/丙酮酸钠培
单克隆抗体的腹水制备实验
实验材料杂交瘤细胞试剂、试剂盒完全DMEM-10HEPES丙酮酸钠PBS仪器、耗材注射针头离心管转子离心机实验步骤1. 用20G或22G的注射针,小鼠腹膜内注射降植烷,每只鼠0.5 ~ 1 ml,1周后接种细胞。 2. 在175 cm2培养瓶中加完全DMEM-10/HEPES/丙酮酸钠培养液,进
单克隆抗体上清制备实验
实验方法原理 实验材料 目的杂交瘤试剂、试剂盒 完全 DMEM-10 培养液(含 5~10 mmol/L HEPES pH 7.2~7.4)仪器、耗材 50 ml 无菌锥形离心管175 cm2 组织培养瓶实验步骤 1. 将杂交瘤置于一个盛有完全 DMEM-10 培养基的 175 cm2 组织培养瓶中
单克隆抗体上清制备实验
与多克隆抗血清相比,采用单克隆抗体(MAb)的最主要的优势就是有可能得到大量的特异性单克隆抗体可供应用。MAb 制剂通常包括杂交瘤上清、由接种了杂交瘤的小鼠制备的腹水,以及纯化的 MAb。杂交瘤上清容易制备,特别是用于制备大量不同的 MAb , 但其中 MAb 的浓度则相对较低。为得到纯化的制剂,可
单克隆抗体腹水制备实验
实验方法原理 高滴度的单克隆抗体的制备可以通过在小鼠的腹腔内接种能产生 MAb 的杂交瘤细胞,从而产生腹水来获得。腹水可收集几次,经热灭活、滴定后储存。实验材料 裸鼠(6~8 周龄 无特定病原体/注射了鼠鼠杂交瘤细胞的同系宿主)目的杂交瘤试剂、试剂盒 完全DMEM-10培养液(含10mmol/L H
抗血清的制备的免疫程序有哪些?
1.免疫原的剂量:免疫原剂量过大或过小都可使动物产生免疫耐受,在一定剂量范围内,免疫原剂量越大,产生的抗体效价越高。2.免疫途径:有皮内、皮下、肌内、静脉、腹腔、淋巴结等途径。皮内或皮下免疫时一般采用多点注射。初次免疫一般选择皮内接种,加强免疫和颗粒性抗原一般选择静脉注射。宝贵抗原可选择淋巴结内微量
单克隆抗体与常规抗血清的性质比较
单克隆 抗体与常规抗血清的性质比较免疫球蛋白 性质 常规 血清抗体 单克隆
抗血清的制备免疫程序知识点
1.免疫原的剂量:免疫原剂量过大或过小都可使动物产生免疫耐受,在一定剂量范围内,免疫原剂量越大,产生的抗体效价越高。2.免疫途径:有皮内、皮下、肌内、静脉、腹腔、淋巴结等途径。皮内或皮下免疫时一般采用多点注射。初次免疫一般选择皮内接种,加强免疫和颗粒性抗原一般选择静脉注射。宝贵抗原可选择淋巴结内微量