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1.化学合成尽管化学合成是最贵的方法，但是却是最方便的――研究人员几乎不需要做什么工作。包括Ambion和Qiagen公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成si 。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3―4对si s 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。最适用于：已经找到最有效的si 的情况下，需要大量si 进行研究不适用于：筛选si 等长时间的研究，主要原因是价格因素2.体外转录通过体外转录的方法可以合成si s，这样的成本相对化学合成法而言比较低，是一种性价比高的筛选si s的好方法。更重要的是采用这种方法能够比化学合成法更快的得到si s。以Silencer si Construction Kit为例，一旦得到DNA Oligo模版（这个还是需要DNA合成的，不过DNA合成的成本就比较低了），只要24小时就......阅读全文
1.化学合成 尽管化学合成是最贵的方法，但是却是最方便的――研究人员几乎不需要做什么工作。包括Ambion和Qiagen公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成si 。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3―4对si s 的成本就更高
目前RNAi技术已经进入了生物科学研究的许多领域，成为了一种主要的生物学研究工具，发展得相当迅速，并受到了此次诺贝尔奖评审委员会的青睐，获得2006年诺贝尔奖医学/生理奖。然而这一才历经十个年头的技术依然对于许多研究人员来说还是很陌生的，以下是有关 i技术在哺乳动物细胞中应用的具体设计策略，主
5. si 表达框架si 表达框架(si expression cassettes，SECs)是一种由PCR得到的si 表达模版，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。这个方法最早是由Castanotto和其同事(5)采用，包括一个 pol III启动子，一段发夹结构si ，一个
Mammalian RNA InterferenceThomas TuschlLaboratory for RNA Molecular BiologyThe Rockefeller University, New York Excerpted from RNAi: A Guide To Gene S
3）于0℃以5000g离心10分钟沉淀RNA，弃上清，用含0.1mol/L 乙酸钠（pH5.2）的70％乙酸洗涤沉淀，用自动微量移液器尽可能将乙醇吸尽， 随后于室温放置几分钟，晾干沉淀。切勿抽干沉淀，因为干的核酸沉淀很难溶解。 4）每个直径为90mm的培养皿或每107细胞加 200μl 50mmo
WHENVIRUSESINFECTEUKARYOTICCELLS domly integrate into host genomes, double-stranded RNA (dsRNA) is frequently produced from the invading genes, eithe
1 .由长dsRNA引起的非特异性基因沉默 寻找哺乳动物细胞中存在RNAi的证据颇费了一番周折。 将较长的dsRNA（超过30个碱基对）转染几种特定脊髓动物细胞系统如小鼠的早期胚胎中，斑马鱼和中华仓鼠卵巢细胞中，能够诱发细胞内的RNAi现象，而在大部分脊髓动物的成体细胞中不存在类似于RNAi的机制
21.Homologous Chromosome：同源染色体一对染色体，分别来自父本和母本，染色体上有着相同的线性基因序列。 22.Recombinant Clone：重组克隆将不同来源的DNA片段合成在一个DNA分子中，这种技术称为重组，得到的分子为重组克隆。 23.Ribonucleic
实验概要 本实验介绍了从培养的单层哺乳动物细胞中分离RNA的实验程序，该程序同样适用于从悬浮培养的哺乳动物细胞中或从易于分散成单个细胞的哺乳动物组织中分离RNA。但不适用于从固体组织中提取RNA，因为用这种裂解细胞的方法（在SDS存在的条件下用蛋白酶K消化)去消化组织速度很慢，导致内源性RNA酶
哺乳动物细胞总ＲＮＡ的分离细胞的裂解提取步骤注意事项 这一从培养的单层哺乳动物细胞中分离RNA的实验程序系为Favaloro 等（1980）所介绍程序的改良。该程序同样适用于从悬浮培养的哺乳动物细胞中或从易于分散成单个细胞的哺乳动物组织中分离RNA。但不适用于从固体组织中提取RNA，因为用这种裂解