酶免疫细胞化学染色操作指南2
2、加3% H2O2，细胞片20ul/孔，培养板100ul/孔，使充分覆盖住细胞。3、室温10分钟后，甩掉 H2O2，用PBS轻轻淋洗2分钟。用滤纸吸干细胞周围水份，96孔在滤水纸上扣干，但注意保持细胞湿润。三、封闭细胞片用5-10%正常山羊血清（20ml/孔），细胞板用2-5%BSA（PBS配制）100ul/孔，置37℃孵育30分钟后甩掉封闭液，不洗。四、免疫化学染色1、分别加一抗和所有对照一抗，细胞法10-20ul/孔，细胞板50ul/孔，使充分覆盖细胞。37℃1小时或4℃冰箱过夜；2、弃去一抗，如为细胞涂片用PBST轻轻简单淋洗1次后，浸于100 mL含PBST洗杯，漂洗（最好在慢速摇床上）3-5分钟，转入第二杯PBS（100 ml），如上法漂洗3-5分钟。擦干细胞片周围水分，96孔板则倒掉一抗后，每孔加满PBST在摇床上摇洗3-5分钟后倒掉，在滤纸上扣干，但保持细胞湿润，反复3-4次；3、加SP试剂（SP法，即放......阅读全文
免疫酶染色试验_细胞免疫酶染色法
细胞免疫酶染色法（以检测血清中 EB 病毒 IgA 抗体为例说明）实验方法原理免疫酶染色试验 (immunoenzymatic staining test, IEST) 是用酶（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）标记已知抗体或抗原，与相应抗原或抗体结合，形成酶标记抗体－抗原复合物，复合物中的酶在遇到相
免疫酶染色试验_细胞免疫酶染色法
细胞免疫酶染色法（以检测血清中 EB 病毒 IgA 抗体为例说明）实验方法原理免疫酶染色试验 (immunoenzymatic staining test, IEST) 是用酶（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）标记已知抗体或抗原，与相应抗原或抗体结合，形成酶标记抗体－抗原复合物，复合物中的酶在遇到相
细胞免疫化学：免疫酶标技术
1） 直接法1．标本固定。2．PBS洗涤2×3分钟。3．1％ H2O2（或1％ H2O2 甲醇）抑制内源性过氧化物，室温10～20分钟。4．正常血清（1：10）孵育，室温20分钟。5．滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。6．PBS洗涤3×3分钟。7．DAB＋H2O2显色5～10分钟，镜下控制染色
免疫酶细胞化学实验技术
免疫酶细胞化学免疫酶细胞化学是免疫细胞化学（Immunocytochemistry,ICC）中最常用的方法之一，它是在抗原抗体特异反应存在的前提条件下，借助于酶细胞化学的手段，检测某种物质（抗原/抗体）在组织细胞内存在部位的一门新技术：即预先将抗体与酶连结，再使其与组织内特异抗原反应，经细胞化学染色
免疫酶细胞化学实验技术4
三、ICC在细胞功能研究中的应用 形态学研究目的之一是揭示组织细胞结构特征及其功能意义。利用ICC显示给与细胞增殖标记物，是组织细胞学研究中形态和功能相结合的重要手段之一。目前常用的细胞增殖标记物有4种，Brdu (5—bromo—2--deoxyuridine), DNA polymerase
免疫酶细胞化学实验技术3
一、对照实验 1．吸收实验 应用尚无文献报告的抗血清/自己制备的抗血清进行ICC染色时，需用相应的抗原吸收抗血清后，再孵育标本，判断结果的可信性（结果应为阴性）。常用的吸收实验分固相吸收和液相吸收两种（见本书第一章 ），对于不能形成沉淀，难以用离心沉降法分离的一些小分子多肽类抗原，以固相吸收为佳
免疫酶细胞化学实验技术2
（四）染色原理及步骤 1．基本原理 酶标抗体与荧光色素标记抗体的染色相同，亦分直接法和间接法。直接法是将酶直接标记在每一抗体上，间接法是将酶标记在第二抗体上，检测组织细胞内的特定抗原物质。间接法所用的第一抗体是对组织细胞内某种抗原的特异性抗体（80%～90%的抗血清系由家兔制得，而绝大数单克隆
人胰岛β细胞酶联免疫分析（ELISA）
人胰岛β细胞酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中胰岛β细胞的含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人胰岛β细胞水平。用纯化的人胰岛β细胞抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛β细
酶免疫细胞化学染色操作指南1
一、材料和试剂1、玻片：须用免疫组化专用玻片，或用2%多聚赖氨酸包被处理玻片。2、5-10%正常山羊血清封闭液，用PBS配。3、3%牛血清白蛋白（BSA），用PBS配。4、0.01M pH7.4 PBS5、1% BSA-PBS（含0.05% Tween20）6、AEC底物（1）底物缓冲液（20X）
酶免疫细胞化学染色操作指南2
2、加3% H2O2，细胞片20ul/孔，培养板100ul/孔，使充分覆盖住细胞。3、室温10分钟后，甩掉 H2O2，用PBS轻轻淋洗2分钟。用滤纸吸干细胞周围水份，96孔在滤水纸上扣干，但注意保持细胞湿润。三、封闭细胞片用5-10%正常山羊血清（20ml/孔），细胞板用2-5%BSA（PBS配制）
细胞免疫细胞免疫
几乎所有的细胞表面都有MHC-I,CD8+T细胞能识别细胞表面的MHCI+抗原复合物，识别后进行攻击。 根据功能不同T细胞可分为三类，其表面均有相应的受体，具有抗原特异性：细胞毒性T细胞（Cytotoxic T cells，Tc）、辅助性T细胞(helper T cells,TH）、抑制性T细
异相酶免疫试验和均相酶免疫试验
Ag为待测抗原，AgAb-E为结合标记物，Ab-E为游离标记物。若抗原-抗体反应影响标记物中酶的活性,如酶活性消失，即结合标记物(AgAb-E)无酶活性，游离标记物(Ab-E)有酶活性； (1) 检测时不需分离结合标记物(AgAb-E)和游离标记物(Ab-E),检测体系中标记物酶活性(Ab-E
大鼠心脏纤维原细胞（HCF)酶联免疫分析
大鼠心脏纤维原细胞（HCF)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆，细胞上清及相关液体样本中心脏纤维原细胞（HCF)的含量。实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠心脏纤维原细胞（HCF)水平。用纯化的大鼠心脏纤维原细胞（HCF
人细胞色素C（CytC）酶联免疫分析（ELISA）
人细胞色素C（CytC）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中细胞色素C（CytC）的含量。实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人细胞色素C（CytC）的水平。用纯化的人细胞色素C（CytC）抗体包
关于Th细胞检测的酶联免疫点法介绍
Schauer等对胞内细胞因子的测定作出综合评价，标本来源包括末梢血单个核细胞、肿瘤细胞、组织细胞等，检测方法常用免疫组化法，主要为碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶（APAAP）技术[6] 和测定mRNA的荧光原位杂交技术（FISH），此外还有显微荧光法，将单个细胞用多聚甲醛固定，皂素渗透后，行间接免疫荧
人中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）酶联免疫分析（ELISA
人中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）的含量。实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）水平。用纯化的人中性粒细胞弹性蛋
免疫酶染色试验——斑点免疫酶染色法
斑点免疫酶染色法 (dot-ELISA)实验 （以检测轮状病毒抗原为例说明）实验方法原理该技术是进行 ELISA 测定时，借用了免疫印迹技术的某些原理和方法，利用硝酸纤维素膜为固相载体，使抗原抗体反应在膜上进行，结合在硝酸纤维素膜上的酶抗体结合物通过将底物分解成不溶性的产物而沉积，在硝酸纤维素膜上形
酶免疫技术酶与底物
酶结合物是酶与抗原或者抗体、半抗原在交联剂作用下联结的产物,是 ELISA 成败的关键试剂。它不仅具有抗原抗体的特异性反应,还具有酶促反应的特性,最终产生生物放大的特性。酶免疫反应中,最常用的酶是辣根过氧化物酶,HRP的催化反应需要底物过氧化氢(H2O2)和供氢体(DH2)。供氢体多为无色的还原型染
免疫细胞的免疫细胞种类
T淋巴细胞即胸腺依赖淋巴细胞（thymus dependent lymphocyte）。亦可简称T细胞。来源于骨髓的多能干细胞（胚胎期则来源于卵黄囊和肝）。目前认为，在人体胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干细胞或前T细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。成熟的T细
人白细胞酯酶酶联免疫分析试剂盒使用说明
使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白细胞酯酶含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞酯酶水平。用纯化的人白细胞酯酶抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞酯酶，再与HRP标记的白细胞酯酶抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后
小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子酶联免疫分析
小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的含量。实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM
AEP酶对细胞免疫有着至关重要的贡献
冬酰胺酰基内肽酶（Asparaginyl endopeptidase，AEP）在诱导的调节性T细胞(iTreg)中表达；AEP敲除的Foxp3和Aep−/−的小鼠外周Treg细胞数量升高；AEP缺陷会增加移植物抗宿主病和黑素瘤中的Treg细胞的频率和数量；PD-1信号通过抑制AEP来维持Foxp
人抗胰岛细胞抗体(AICA)酶联免疫分析（ELISA）
人抗胰岛细胞抗体(AICA)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中抗胰岛细胞抗体(AICA)的含量。实验原理： 本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人抗胰岛细胞抗体(AICA)水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相
酶免疫技术中酶和酶作用底物
酶和酶作用底物（一）酶的要求： 一个酶蛋白分子每分钟可催化10 3 ～10 4 个底物分子转变成有色产物。用于标记的酶应符合：1.酶的活性要强，催化反应的转化率高，纯度高。2.酶催化底物后产生的产物易于判断或测量，方法简单易行、敏感和重复性好。3.作用专一性强 ，酶活性不受样品中其他成分的影响，受检
免疫酶标的原理
它以酶作为标记物，与抗体或抗原联结，与相应的抗原或抗体作用后，通过底物的显色反应作抗原抗体的定性和定量，亦可用于组织中抗原或抗体的定位研究，即酶免疫组织化学技术。 应用最多的免疫酶技术是酶联免疫吸附实验（ELISA），它是使抗原或抗体吸附于固相载体，使随后进行的抗原抗体反应均在载体表面进行，从
免疫酶技术介绍
免疫酶技术(immunoenzymatic technique)也叫酶免疫测定，是通过酶标记抗体或抗原来检测抗原或抗体的方法，其应用范围极广。显示方法是用酶的特殊底物来处理反应后的标本，通过酶催化底物的显色反应来测定抗原或抗体的存在，以酶标作定量或定性分析。标记酶有辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷
免疫酶标技术
1） 直接法1．标本固定。2．PBS洗涤2×3分钟。3．1％ H2O2（或1％ H2O2 甲醇）抑制内源性过氧化物，室温10～20分钟。4．正常血清（1：10）孵育，室温20分钟。5．滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。6．PBS洗涤3×3分钟。7．DAB＋H2O2显色5～10分钟，镜下控制染色
免疫酶技术介绍
免疫酶技术(immunoenzymatic technique)也叫酶免疫测定，是通过酶标记抗体或抗原来检测抗原或抗体的方法，其应用范围极广。显示方法是用酶的特殊底物来处理反应后的标本，通过酶催化底物的显色反应来测定抗原或抗体的存在，以酶标作定量或定性分析。标记酶有辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷
免疫酶染色试验
实验方法原理 免疫酶染色试验 (immunoenzymatic staining test, IEST) 是用酶（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）标记已知抗体或抗原，与相应抗原或抗体结合，形成酶标记抗体－抗原复合物，复合物中的酶在遇到相应的底物时，能催化底物产生颜色反应，根据有色产物的有无及其浓
酶免疫技术分类
酶免疫技术一般分成酶免疫组化技术和酶免疫测定两大类。酶免疫组化技术与荧光抗体技术相似，酶标记抗体与组织切片上的抗原起反应，然后与酶底物作用，形成有色沉淀物，可以在普通光学显微镜下观察。如酶作用的产物电子密度发生一定的改变，则可用电子显微镜观察，称为酶免疫电镜技术。 酶免疫测定根据抗原抗体反应后