RDPCR观察长春新碱诱导肿瘤细胞凋亡时基因表达的变化(1)
【原理】 限制性显示PCR技术(RestrictionDisplayPCR,RD-PCR)技术的思路是在获得反转录的cDNA之后,进行Sau3AI酶切?Sau3AI识别位点是四个碱基,理论上计算平均每256个碱基有一个识别位点,然后在酶切片段的两端加上通用接头?接头由15bp和21bp长的两条互补寡核苷酸单链逐步退火形成,接头的一端为4个碱基的粘性端GATC,恰好与选用的Sau3AI的酶切位点互补,另一端为2个碱基的粘性端CA,可以减少片段自身间的串联?酶切片段加上接头之后,用与接头序列配套的限制性引物进行扩增?此时设计的限制性引物是在通用引物的GATC端分别加上一个碱基A?T?C?G(以下简称A?T?C?G),可以使扩增产物有序归类?将引物A?T?C?G两两组合,共10组,以接头与cDNA酶切片段的连接物为模板,进行限制性分组PCR反应,各组产物在8%的变性聚丙烯酰胺凝胶中平行电泳?经EB染色......阅读全文
外源基因的诱导表达
1．目的了解外源基因在原核细胞中表达的特点和方法。2．原理外源基因克隆在含有lac启动子的表达系统中。先让宿主菌生长，lac I产生的阻遏蛋白与lac操纵基因结合抑制下游的外源基因转录。向培养基中加入诱导物IPTG（异丙基硫代-b-D-半乳糖），解除抑制使外源基因大量表达。表达的蛋白可经SDS-
细胞凋亡的观察生化检验
细胞凋亡的观察：1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。2、丫啶橙（AO）染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。3、台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、
细胞凋亡的观察生化检验
细胞凋亡的观察： 1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。 2、丫啶橙（AO）染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。 3、台盼蓝染色：如果细胞膜
细胞凋亡的观察生化检验
细胞凋亡的观察：1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。2、丫啶橙（AO）染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。3、台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、
细胞凋亡及其检测技术1
细胞凋亡又称程序性细胞死亡（PCD）,是细胞衰老自然死亡的主要方式之一，在机体中承担着重要的调控作用。它不仅在维持细胞群体数量的稳定、胚胎发育和免疫系统的克隆选择方面，而且在肿瘤发生、发展、抗肿瘤药物的治疗等方面具有十分重要的作用。细胞凋亡是由基因编程控制的细胞主动参与的自杀过程没事一种生理性调节机
细胞凋亡的形态学观察
细胞凋亡（apoptosis）的命名主要是根据某些单个细胞死亡时细胞碎裂如花瓣或树叶散落般的形态学特征。目前对细胞凋亡的认识正不断得到深化，检测凋亡细胞的方法也逐渐增多，但形态改变仍是确定细胞凋亡的最可靠的方法。一、光学显微镜观察凋亡细胞的主要特征为核染色质致密深染，形成致密质块，有时可碎裂。在HE
细胞凋亡的形态学观察
细胞凋亡（apoptosis）的命名主要是根据某些单个细胞死亡时细胞碎裂如花瓣或树叶散落般的形态学特征。目前对细胞凋亡的认识正不断得到深化，检测凋亡细胞的方法也逐渐增多，但形态改变仍是确定细胞凋亡的最可靠的方法。一、光学显微镜观察凋亡细胞的主要特征为核染色质致密深染，形成致密质块，有时可碎裂。在HE
细胞凋亡综述1
细胞程序性死亡是正常生理现象，多发生于胚胎发育和维持组织自身平衡。Kerr et al.最早发现有两种细胞死亡：坏死（Necrosis）和凋亡（Apoptosis）。Apoptosis，希腊文意思是树叶从树上“凋落”，这里是指凋亡，是细胞主动参与自身死亡的过程。凋亡程序有一些特殊形态学特征，包括
细胞凋亡的形态学变化
形态学观察细胞凋亡的变化是多阶段的，细胞凋亡往往涉及单个细胞，即便是一小部分细胞也是非同步发生的。首先出现的是细胞体积缩小，连接消失，与周围的细胞脱离，然后是细胞质密度增加，线粒体膜电位消失，通透性改变，释放细胞色素C到胞浆，核质浓缩，核膜核仁破碎，DNA降解成为约180bp-200bp片段；胞膜有
细胞凋亡的形态学变化
形态学观察细胞凋亡的变化是多阶段的，细胞凋亡往往涉及单个细胞，即便是一小部分细胞也是非同步发生的。首先出现的是细胞体积缩小，连接消失，与周围的细胞脱离，然后是细胞质密度增加，线粒体膜电位消失，通透性改变，释放细胞色素C到胞浆，核质浓缩，核膜核仁破碎，DNA降解成为约180bp-200bp片段；胞膜有
细胞凋亡的形态学变化
形态学观察细胞凋亡的变化是多阶段的，细胞凋亡往往涉及单个细胞，即便是一小部分细胞也是非同步发生的。首先出现的是细胞体积缩小，连接消失，与周围的细胞脱离，然后是细胞质密度增加，线粒体膜电位消失，通透性改变，释放细胞色素C到胞浆，核质浓缩，核膜核仁破碎，DNA降解成为约180bp-200bp片段；胞膜有
蓖麻毒素诱导细胞凋亡的作用机制
坏死和凋亡是细胞死亡的两种方式。在引起细胞凋亡的三大类因素中，毒素，抗癌药物是其中之一。以往认为化疗药物是通过引起靶细胞发生不可逆代谢障碍而杀死肿瘤细胞，近年来认为是通过改变生理环境而诱发细胞发生PCD而达到疗效。 1989年，Leek等报道：在蓖麻毒素中毒的肠道病理研究中利用免疫组织化学和电
近代物理所揭示高LET射线诱导肿瘤细胞凋亡分子机理
中国科学院近代物理研究所辐射医学室科研人员利用兰州重离子研究装置（HIRFL）提供的碳离子束，研究高线性能量传递（LET）射线诱导肿瘤细胞的凋亡分子机理获得新发现。 细胞凋亡是电离辐射所致细胞死亡的主要形式。p73是p53家族蛋白成员之一，在人类肿瘤细胞中很少发生缺失或突变，反而呈现出很高量的
生化与细胞所揭示新型抗肿瘤化合物诱导癌细胞凋亡机理
组蛋白乙酰基化是常见的表观遗传修饰。基因启动子区域的高水平组蛋白乙酰基化往往会促进该基因的表达。异常的组蛋白乙酰基化与各种病理过程紧密相关。HDAC是重要的组蛋白乙酰基化调控因子，它们在很多癌症组织中的表达过高。它们的抑制剂能有效地诱导不同组织来源的癌细胞凋亡，但在同样的浓度下，对正常细胞的毒性
基因的翻译表达1
1体外TNTRT7 转录/翻译系统表达重组基因体外翻译是研究基因表达、基因调控的一类重要技术，该技术可广泛用于基因表达量、启动序列等调控因子的确立，并结合PTT实验筛选天然突变或人工诱变的基因片段，还可用来进行蛋白和DNA结合方面的研究。早期的体外翻译研究大多是提取mRNA然后通过网织红细胞或麦胚系
放线菌素D诱导HL60细胞凋亡的观察实验_凝胶回收法
实验方法原理从琼脂糖凝胶电泳中回收纯化DNA 片段的试剂盒。试剂盒采用了独特的凝胶融解系统， 结合DNA 制备膜技术， 具有高效快速的特点。本试剂盒纯化DNA 片段纯度高，完整性好。可直接用于连接反应， PCR 扩增。实验材料DNA 片段试剂、试剂盒Biospin 胶回收试剂盒实验步骤1. 将含有
植物凋亡细胞的形态学观察
一、实验目的 1、掌握细胞凋亡的概念、生物学意义。 2、掌握细胞凋亡与细胞坏死的区别。 3、掌握诱导和观察细胞凋亡的方法。 二、实验原理 （一）概念 凋亡(apoptosis)一词来自希腊语，apo指分离，ptosis指落下。凋亡的原意是枯萎的树叶或花瓣自然
上海药物所在选择性诱导肿瘤细胞凋亡研究中取得进展
诱导细胞凋亡是一种有效的抗肿瘤策略。然而如何选择性地诱导肿瘤细胞凋亡，降低对正常细胞的损伤，对肿瘤研究者来说一直都是一项挑战。中科院上海药物研究所俞强课题组与龙亚秋课题组合作，于3月29日报道了一个可以选择性诱导肿瘤细胞发生凋亡的全新结构的小分子化合物NPP，并对其选择性抗肿瘤的分子机制进行了深
电子显微镜观察肿瘤细胞凋亡——电子显微镜观察法
实验材料肿瘤细胞悬液试剂、试剂盒戊二醛PBS溶液四氧化锇醋酸铀蒸馏水酒精树脂柠檬酸铅仪器、耗材离心机离心管冰箱烧杯洗瓶电子显微镜细胞凋亡与肿瘤发生的关系，其机制目前认为有以下几种可能性。1、基因水平上诱导凋亡基因如P53、bax、c-myc等失活以抑制凋亡基因过度表达。2、机体免疫反应诱导肿瘤细胞凋
细胞凋亡信号通路相关基因介绍AKT1
AKT1基因编码的是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可通过磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）依赖的机制被胞外信号激活，目前发现AKT家族有三个成员，分别为AKT1/PKBα、AKT2/PKBβ和AKT3/PKBγ。，AKT则是PI3K/AKT信号通路中核心因子，PI3Ks能特异性磷酸化磷脂酰肌醇（PI）的3位羟基
细胞凋亡信号通路相关基因介绍TOP1
这个基因编码一种DNA拓扑异构酶，这种酶在转录过程中控制和改变DNA的拓扑状态。这种酶催化单链DNA的瞬间断裂和重新结合，使单链DNA彼此穿过，从而改变DNA的拓扑结构。该基因定位于20号染色体，并具有位于1号和22号染色体上的假基因。This gene encodes a DNA topoisom
细胞凋亡信号通路相关基因介绍PRKAR1A
camp是一种重要的细胞功能信号分子。camp通过激活camp依赖性蛋白激酶发挥其作用，后者通过不同靶蛋白的磷酸化来传递信号。失活激酶全酶是由两个调节亚基和两个催化亚基组成的四聚体。camp导致失活的全酶分解成一个二聚体的调控亚基，与四个camp和两个游离的单体催化亚基结合。四种不同的调节亚基和三种
细胞凋亡信号通路相关基因介绍PDK1
丙酮酸脱氢酶（pdh）是一种催化丙酮酸氧化脱羧的线粒体多酶复合物，是哺乳动物体内调节碳水化合物燃料稳态的主要酶之一。酶活性由磷酸化/去磷酸化循环调节。丙酮酸脱氢酶激酶（pdk）磷酸化pdh导致失活。已发现该基因的多个选择性剪接转录变体。[由RefSeq提供，2013年6月]Pyruvate dehy
癌症新策略！靶向坏死性凋亡可诱导免疫系统杀死肿瘤
每天，人体内数十亿个细胞通过激活一种称为细胞凋亡（apoptosis）的细胞自杀程序，以一种有序的方式默默死亡。但是，其他的细胞，通常在它们遭受病毒感染时，会选择更混乱、更暴力的形式：坏死性凋亡（necroptosis），即利用免疫系统攻击并杀死身体自身的细胞。 近年来，生物学家已开始研究在癌
放线菌素D诱导HL60细胞凋亡的观察实验_凝胶电泳法
实验方法原理放线菌素D（actinomycin D）是抗肿瘤类抗生素，其主要作用是通过与DNA 结合，阻断依赖DNA 的mRNA 的合成，从而阻碍蛋白质合成，抑制瘤细胞分裂，引起细胞凋亡。细胞凋亡时，其核染色质的DNA 出现缺口甚至断裂，致使染色质凝聚、边缘化甚至呈现DNA 碎片。利用与DNA 结合
低温诱导蛋白表达时用多少度合适
IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导，不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点，做个一定范围的探索。
低温诱导蛋白表达时用多少度合适
IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导，不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点，做个一定范围的探索。
低温诱导蛋白表达时用多少度合适
IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导，不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点，做个一定范围的探索。
低温诱导蛋白表达时用多少度合适
IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导，不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点，做个一定范围的探索。
简述细胞凋亡的形态学变化
形态学观察细胞凋亡的变化是多阶段的，细胞凋亡往往涉及单个细胞，即便是一小部分细胞也是非同步发生的。首先出现的是细胞体积缩小，连接消失，与周围的细胞脱离，然后是细胞质密度增加，线粒体膜电位消失，通透性改变，释放细胞色素C到胞浆，核质浓缩，核膜核仁破碎，DNA降解成为约180bp-200bp片段；胞