RDPCR观察长春新碱诱导肿瘤细胞凋亡时基因表达的变化(1)
【原理】 限制性显示PCR技术(RestrictionDisplayPCR,RD-PCR)技术的思路是在获得反转录的cDNA之后,进行Sau3AI酶切?Sau3AI识别位点是四个碱基,理论上计算平均每256个碱基有一个识别位点,然后在酶切片段的两端加上通用接头?接头由15bp和21bp长的两条互补寡核苷酸单链逐步退火形成,接头的一端为4个碱基的粘性端GATC,恰好与选用的Sau3AI的酶切位点互补,另一端为2个碱基的粘性端CA,可以减少片段自身间的串联?酶切片段加上接头之后,用与接头序列配套的限制性引物进行扩增?此时设计的限制性引物是在通用引物的GATC端分别加上一个碱基A?T?C?G(以下简称A?T?C?G),可以使扩增产物有序归类?将引物A?T?C?G两两组合,共10组,以接头与cDNA酶切片段的连接物为模板,进行限制性分组PCR反应,各组产物在8%的变性聚丙烯酰胺凝胶中平行电泳?经EB染色......阅读全文
关于细胞凋亡的形态学变化
形态学观察细胞凋亡的变化是多阶段的，细胞凋亡往往涉及单个细胞，即便是一小部分细胞也是非同步发生的。首先出现的是细胞体积缩小，连接消失，与周围的细胞脱离，然后是细胞质密度增加，线粒体膜电位消失，通透性改变，释放细胞色素C到胞浆，核质浓缩，核膜核仁破碎，DNA降解成为约180bp-200bp片段；胞
细胞凋亡（apoptosis）的检测1
细胞凋亡（apoptosis）是一种由基因控制的细胞自主性死亡方式。其发生诱因及形态学特征均有别于坏死，与人类免疫系统的发生发展、神经组织发育、器官的形成、肿瘤的发生发展等诸多生物学现象之间有着密切联系，并且是免疫应答过程中免疫细胞的杀伤机制之一。细胞凋亡的检测技术已成为免疫学检测的一个重要内容。凋
大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(DR4)ELISA检测法
大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(DR-4)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和尿液、唾液生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 DR-4/TRAIL-R1 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 DR-4与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠DR-4，形成
基因表达量变化差值是什么
差值是△CT，即是相对于某个内参基因的相对表达量，而不是绝对表达量；在此基础上再进行比值，即△△CT，是（某两个处理之间的）差异表达倍数。
凋亡相关基因－Bax的表达产物的检测
操作： 1、 培养细胞（96孔板，每组3正常、3损伤、3损伤恢复） 2、 PBS洗，5min X 3次 (小心) 3、 甲醇固定10min 4、 PBS洗，5min X 3次 5、 加入封闭液（1:10） 25µl，37 ℃，30min，吸去上清液，滤纸吸干 6、 加一抗（1
细胞凋亡小体和梯状DNA的观察(2)
四、实验程序 1． 取样 1）直接撕取洋葱内表皮和刮取人口腔上皮细胞 2）烟草悬浮细胞的培养 烟草(Nicotiana tabacum)悬浮细胞在改良的MS液体培养基（内含MS基本培养基, KH2PO4 200 mg/L，2，4-D 1 ml/L，Gly 1.8 mg/L，VB1
邵峰：GSDME诱导细胞凋亡向细胞焦亡转变
对癌症患者施用的化学疗法会产生各种不良副作用，例如组织损伤、免疫力下降和体重减轻。降低这些副作用可以改善患者的生活质量，并且可能提高治疗成功率。 随着对化疗毒性深入了解，科学家最新聚焦 gasdermin，它是一种通常见于上皮细胞、造血细胞和许多其他具有免疫防御功能的组织中的蛋白质家族。已
细胞凋亡形态学检测与观察
hoechst33258染色，他们认为细胞发生凋亡时，染色质会固缩。 所以Hoechst染色时，细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。正常细胞核刺激后有致密浓染的凋亡细胞 AO-EB染色法：The image below shows human lymphoma cells treated wi
综述：细胞凋亡（三）
细胞凋亡与医学 1．免疫学： 1）胸腺细胞成熟过程中的凋亡：胸腺细胞经过一系列的发育过程而成为各种类型的免疫活性细胞。在这一发展过程中，涉及了一系列的阳性细胞选择和阴性细胞选择过程。以形成CD4+的T淋巴细胞亚型及CD8+的T淋巴细胞亚型；同时，对识别自身抗原的T细胞克隆进行选择性地消除，其细胞
概述myc基因的产生及功能
C-myc基因的产物为62KD的磷酸化蛋白P62c-mgc，是由C-myc基因的外显子2和3共 同编码的由439个氨基酸组成的蛋白质，定位细胞核内，为核蛋白，依C-one编码产 物，功能分类，C-myc癌基因属核蛋白基因，具有转化细胞的能力，并具有与染色体 DNA结合的特性，在调节细胞生长、分化
肿瘤细胞诱导血管生成模型
肿瘤细胞诱导血管生成实验可以用于：把一定数量的肿瘤细胞移植到机体内，诱导宿主局部的血管生成。实验方法原理肿瘤血管生成是指肿瘤微环境诱导的在原有血管基础上生成以毛细血管为主的血管系统，并在肿瘤组织内建立血液循环的过程。肿瘤血管生成与肿瘤微环境密切相关，受多种促血管生成因子和（或）血管生成抑制因子的调节
活体动物体内生物发光和荧光成像技术基础原理与应用三
4．干细胞及免疫学用荧光素酶标记干细胞有以下几种方法：一种是标记组成性表达的基因，做成转基因动物，干细胞就被标记了，若干细胞移植到另外动物体内，可以用活体生物发光成像技术示踪干细胞在体内的增殖、分化及迁徙的过程；另外一种方法是用慢病毒直接标记干细胞后，移植到体内观测其增殖、分化及迁徙过程，研究其修复
诱导表达时IPTG加的时间太早有影响吗
有影响。加了之后，细菌提前表达，很多菌一开始表达自己就会很快死掉的。所以如果你加得太早，蛋白的利率就会很少。
如何诱导细胞凋亡，对抗致命的纤维化？
正常情况下，肌成纤维细胞（myofibroblasts）负责创伤愈合、纤维化形成。当它们完成修复损伤组织的工作之后，会启动凋亡程序“自我毁灭”（self-destruct）。但是，一旦它们不响应凋亡信号，反而过度活跃下去，最终会导致瘢痕的形成（由坚硬的结缔组织累积而成），进而阻碍器官正常运作。如
细胞凋亡的生物化学变化
1)DNA的片段化细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体的DNA降解，这是一个较普遍的现象。这种降解非常特异并有规律，所产生的不同长度的DNA片段约为180-200bp的整倍数，而这正好是缠绕组蛋白寡聚体的长度，提示染色体DNA恰好是在核小体与核小体的连接部位被切断，产生不同长度的寡聚核小体片段，实验证
细胞凋亡的生物化学变化
1)DNA的片段化细胞凋亡细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体的DNA降解，这是一个较普遍的现象。这种降解非常特异并有规律，所产生的不同长度的DNA片段约为180-200bp的整倍数，而这正好是缠绕组蛋白寡聚体的长度，提示染色体DNA恰好是在核小体与核小体的连接部位被切断，产生不同长度的寡聚核小体片段
关于细胞凋亡的生物学变化介绍
1)DNA的片段化 细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体的DNA降解，这是一个较普遍的现象。这种降解非常特异并有规律，所产生的不同长度的DNA片段约为180-200bp的整倍数，而这正好是缠绕组蛋白寡聚体的长度，提示染色体DNA恰好是在核小体与核小体的连接部位被切断，产生不同长度的寡聚核小体片段
细胞凋亡的生物化学变化
1)DNA的片段化细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体的DNA降解，这是一个较普遍的现象。这种降解非常特异并有规律，所产生的不同长度的DNA片段约为180-200bp的整倍数，而这正好是缠绕组蛋白寡聚体的长度，提示染色体DNA恰好是在核小体与核小体的连接部位被切断，产生不同长度的寡聚核小体片段，实验证
真核细胞表达系统1
自上世纪70年代基因工程技术诞生以来，基因表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。并随着人类基因组计划实施的进行，在技术方法上得到了很大发展，时至今日已取得令人瞩目的成就 。随着人类基因组计划的完成，越来越多的基因被发现，其中多数基因功能不明。利用表达系统在哺乳动物细胞内表达目的基因是研究基
关于生育三烯酚诱导基因表达的介绍
生育三烯酚增强IKBKAP基因的表达可能是治疗家族性自主神经异常（FD）的一个有效途径。FD是一种神经变性遗传性疾病，主要是由于IKBKAP基因突变造成的，此基因编码IKAP（IКB kinase complex-associatedprotein）的表达。IKBKAP基因突变导致IKAP异常剪
目的基因在大肠杆菌中的诱导表达
[实验原理] 将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点：易于生长和控制；用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具
细胞凋亡的检测方法综述1
一、形态学检测（一）光学显微镜和倒置显微镜 1、未染色细胞凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。 2、染色细胞常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。
什么是细胞凋亡
apoptosis 细胞凋亡是指细胞在一定的生理或病理条件下，受内在遗传机制的控制自动结束生命的过程。而细胞程序性死亡（programmed cell death,PCD）是指生物在发育过程中对一定生理刺激的反应性死亡，它需要一定基因表达。凋亡是对细胞死亡过程中一系列固定模式的形态变化的描述，而P
Current－Biology:－凋亡细胞促进肿瘤生长
正常机体的细胞，保持着增值与凋亡的平衡。而肿瘤的发生正是由于这种平衡被打破，肿瘤细胞变成了永生的细胞。诱导肿瘤细胞凋亡一直被认为是治疗癌症的一个思路，但最新的研究表明，事情并没有那么简单。英国科研人员对淋巴瘤和黑色素瘤的研究发现，凋亡的细胞能促进肿瘤细胞的生长，肿瘤相关巨噬细胞（tumor-as
小鼠βactin基因的克隆表达（1）
动物组织RNA的提取实验目的：掌握由动物组织中提取总RNA的方法实验原理：Trizol试剂是一个包含酚、异硫氰酸胍和SDS的单相酸性溶液，其在裂解细胞的同时抑制RNase的活性，随后加入氯仿，酚会大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同，造成DNA分布在下层的氯仿酚溶液中，RNA
显微镜形态学观察细胞凋亡
实验方法原理细胞凋亡发生时会出现一定的形态学特征，如胞膜有小泡生成，细胞固缩，核质浓缩，染色质凝聚，DNA降解，胞膜最终形成许多凋亡小体，然后被邻近的巨噬细胞所吞噬。实验材料Hela细胞Jurkat细胞试剂、试剂盒蒸馏水盼蓝仪器、耗材光学显微镜倒置显微镜荧光显微镜共聚焦激光扫描显微镜透射电子显微镜实
显微镜形态学观察细胞凋亡
显微镜检测法 实验方法原理 细胞凋亡发生时会出现一定的形态学特征，如胞膜有小泡生成，细胞固缩，核质浓缩，染色质凝聚，DNA降解，胞膜最终形成许多凋亡小体，然后
显微镜形态学观察细胞凋亡
显微镜检测法 实验方法原理 细胞凋亡发生时会出现一定的形态学特征，如胞膜有小泡生成，细胞固缩，核质浓缩，染色质凝聚，DNA降解，胞膜最终形成许多凋亡小体，然后
研究揭示细胞衰老过程中基因表达模式及变化规律
细胞衰老是一种细胞生长停滞状态，与生物体衰老密切相关。研究表明，衰老细胞的异常堆积，会通过分泌细胞衰老相关分泌表型（SASP）导致机体慢性炎症，引发各种衰老相关疾病，如癌症、阿尔兹海默症等。因此，探究细胞衰老过程中调控机制，或可为生物体衰老和相关疾病提供新的干预视角。 细胞衰老过程是一个由多种
bcl2凋亡基因表达的检测原理和方法
（一）原理：细胞凋亡是一个受基因调控的主动过程，bcl-2是抑制细胞凋亡的原癌基因，正常细胞的激活和发育过程中都有表达，但在发育成熟的细胞中，其表达降低，在低分化或癌变的细胞中，bcl-2高表达与肿瘤的发生、发展相关，bcl-2过量表达常导致对化疗药物的耐药性而阻止细胞凋亡，影响治疗效果，一旦细胞发