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一、等电聚焦 1. 从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液(I)(不含DTT,不含Bio-Lyte)一小管(1ml/管),置室温溶解。 2. 在小管中加入0.01g DTT, Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml,充分混匀。 3. 从小管中取出400ml水化上样缓冲液,加入100ml样品,充分混匀。 4. 从冰箱中取-20℃冷冻保存的IPG预制胶条(17cm pH 4-7),室温中放置10分钟。 5. 沿着聚焦盘或水化盘中槽的边缘至左而右线性加入样品。在槽两端各1cm左右不要加样,中间的样品液一定要连贯。注意:不要产生气泡。否则影响到胶条中蛋白质的分布。 6. 当所有的蛋白质样品都已经加入到聚焦盘或水化盘中后,用镊子轻轻的去除预制IPG胶条上的保护层。 7. 分清胶条的正负极,轻轻地将IPG胶条胶面朝下置于聚焦盘或水化盘中样品溶液上,使得胶条的正极(标有+)......阅读全文

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  一、等电聚焦   1. 从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液(I)(不含DTT,不含Bio-Lyte)一小管(1ml/管),置室温溶解。   2. 在小管中加入0.01g DTT, Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml,充分混匀。   3. 从小管中取出400ml水化上

双向电泳操作步骤——双向电泳操作步骤

实验方法原理双向电泳(two-dimensional electrophoresis)是等电聚焦电泳和SDS-PAGE的组合,即先进行等电聚焦电泳(按照pI分离),然后再进行SDS-PAGE(按照分子大小),经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。实验材料细胞样品试剂、试剂盒ddH2O溴酚蓝指示剂

双向电泳操作步骤

  一、等电聚焦   1. 从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液(I)(不含DTT,不含Bio-Lyte)一小管(1ml/管),置室温溶解。   2. 在小管中加入0.01g DTT, Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml,充分混匀。   3. 从小管中取出400ml水化上样缓冲

双向电泳操作步骤

双向电泳操作步骤 第一向凝胶 第二向凝胶 组织来源的蛋白质样品的溶解和制备             实验方法原理 双向电泳(two-dimensiona

双向电泳操作步骤

实验材料 细胞样品试剂、试剂盒 ddH2O溴酚蓝指示剂矿物油丙烯酰胺乙醇MilliQ 水饱和正丁醇SDS琼脂糖仪器、耗材 样品水化盘冰箱厚滤纸摇床电泳槽电泳仪镊子二向电泳制冷仪手套实验步骤 1.  样品制备。2.  第一向等电聚焦。3.  第二向SDS电泳。4.  凝胶的染色。5.  凝胶扫描和分析

双向电泳操作步骤

水化上样( 被动上样)1. 从冰箱中取出 IPG 胶条,室温放置 10min。2. 沿水化盘槽的边缘从左向右线性加入样品,槽两端各 1cm 左右不加样,中间的样品液一定要连贯。注意:不要产生气泡,否则会影响胶条中蛋白质的分布。3. 用镊子轻轻撕去 IPG 胶条上的保护层。注意:碱性端较脆弱,应小心操

双向电泳完整操作步骤

(一)第一向等电聚焦1. 从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液(I)(不含DTT,不含Bio-Lyte)一小管(1ml/管),置室温溶解。2. 在小管中加入0.01g DTT, Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml,充分混匀。3. 从小管中取出400ml水化上样缓冲液,加入100ml样

双向电泳完整操作步骤

(一)第一向等电聚焦1. 从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液(I)(不含DTT,不含Bio-Lyte)一小管(1ml/管),置室温溶解。2. 在小管中加入0.01g DTT, Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml,充分混匀。3. 从小管中取出400ml水化上样缓冲液,加入100ml样

双向电泳的操作步骤

第一向等电聚焦⒈ 从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液(I)(不含DTT,不含IPG buffer)一小管(1ml/管),置室温溶解。⒉ 在小管中加入0.01g DTT, 0.5% 对应胶条pH范围的IPG buffer,充分混匀。⒊ 从小管中取出400微升水化上样缓冲液,加入100微升样品(

双向电泳的操作步骤

第一向等电聚焦⒈ 从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液(I)(不含DTT,不含IPG buffer)一小管(1ml/管),置室温溶解。⒉ 在小管中加入0.01g DTT, 0.5% 对应胶条pH范围的IPG buffer,充分混匀。⒊ 从小管中取出400微升水化上样缓冲液,加入100微升样品(

双向电泳完整的操作步骤

(一)第一向等电聚焦 1. 从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液(I)(不含DTT,不含Bio-Lyte)一小管(1ml/管),置室温溶解。 2. 在小管中加入0.01g DTT, Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml,充分混匀。 3. 从小管中取出400ml水化上样缓冲液,加入100

双向电泳原理及操作步骤

实验概要本文介绍了双向电泳原理及操作步骤(第一向等电聚焦和第二向SDS-PAGE电泳)。实验原理二维聚丙烯酰胺凝胶电泳技术结合了等电聚焦技术(根据蛋白质等电点进行分离)以及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(根据蛋白质的大小进行分离)。这两项技术结合形成的二维电泳是分离分析蛋白质最有效的一种电泳手段。通

双向电泳完整的操作步骤

(一)第一向等电聚焦1.从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液(I)(不含DTT,不含Bio-Lyte)一小管(1ml/管),置室温溶解.2.在小管中加入0.01g DTT,Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml,充分混匀.3.从小管中取出400ml水化上样缓冲液,加入100ml样品,充分

双向电泳操作步骤及相关溶液配置

A. 实验过程一 实验原理:    2-DE的第一向电泳等电聚焦是基于等电点不同而将蛋白粗步分离,第二向SDS-PAGE是基于蛋白质分子量不同,而将一向分离后的蛋白进一步分离.这样就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息.二 实验步骤:1. 样品的溶解    取纯化后的晶体蛋白3.0mg,加入300ul

双向电泳操作步骤——第二向凝胶

实验材料蛋白质试剂、试剂盒丙烯酰胺TEMED磷酸过硫酸铵溴酚蓝NaOH仪器、耗材电泳仪垫片凝胶板尼龙筛子实验步骤1.  用垫片组装凝胶平板。夹层每边的垫片之上用夹子固定,并置于凝胶支架上。注意玻璃平板和垫片的平齐,收紧夹子以保证密封圈不发生泄漏。调整平板的水平和垂直,在平板间将放上凝胶识别标签,使之

双向电泳操作步骤——第一向凝胶

实验材料蛋白质试剂、试剂盒丙烯酰胺TEMED磷酸过硫酸铵溴酚蓝NaOH仪器、耗材电泳仪离心机实验步骤1.  在干净的1.5 mm 内径的凝胶柱管上作好标记以指示应灌制凝胶柱的髙度。用橡皮筋将凝胶柱管捆绑成束,在一水平面上垂直竖起管束,从其顶部向下推压,使各柱管的底部平齐。2.  用三、四层Paraf

双向电泳(twodimensional-electrophoresis)完整操作步骤

(一)第一向等电聚焦从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液(I)(不含DTT,不含Bio-Lyte)一小管(1ml/管),置室温溶解。2. 在小管中加入0.01g DTT, Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml,充分混匀。3. 从小管中取出400ml水化上样缓冲液,加入100ml样品,充

双向电泳(twodimensional-electrophoresis)操作步骤及相关溶液

实验相关试剂配制1.Bradford 工作液95%乙醇 25ml 先用乙醇溶解考马斯亮兰G250,溶解完后再加磷85%磷酸 52ml 酸,最后超纯水定容至500ml.过滤后置于棕色瓶考马斯亮兰G250 0.035g 外加油皮纸保存(Bradford不稳定,一周内有效)2.裂解液尿素 8M硫脲 2MC

仪器-»-光谱分析仪器-»-正文-Hunterlab分光光度计操作规程

  1. Purpose 目的:   本规程规定了Hunterlab分光光度计使用方法和注意事项、确保检测结果的准确性。   2. 操作方法   2.1 样品的制备:如果样品的DS值高于30DS时应将样品稀至30DS,同时调节PH为4.5。   2.2 将调好的样品在超声波水浴中除去气泡。

双向电泳操作步骤——组织来源的蛋白质样品的溶解和制备

实验材料蛋白质试剂、试剂盒SDS尿素仪器、耗材离心管转子实验步骤1.  称重后将样品加入Dounch匀浆器。每100 mg 组织加入1.5~2.0 ml SDS/或尿素/溶解缓冲液,用B号研棒冲击50次,然后以A号研棒冲击50次。2.  放置几分钟后,取一小份样品于200 ul 离心管100 000

实验分析仪器液质联用仪器操作步骤

一、开机与关机当实验室的温度和湿度符合开机条件下,冷启动仪器的顺序如下: 1、核对仪器的初始状态﹙1﹚核对液相色谱仪的色谱柱出口与进入质谱仪离子源的人口之间管线是否相连,如连上则将其脱开;﹙2﹚ 液相色谱仪的总电源开关,自动进样器电源开关﹙如已配置的话﹚是否处于关闭状态,如不是则将其关闭;﹙3﹚质谱

色谱分析仪器-»-正文-比较测色仪测量原理

   比较测色仪利用减色法原理设计的。它利用一系列的滤色片对白光加以吸收,通过滤色片后的光色与待测颜色进行比较测量。它是一种结构简单、使用方便的目视测色仪器。可以测固状、液状等物质的颜色。    把一视场中两部份的颜色视觉效应调节到相同或相等的方法叫做颜色匹配,比较测色仪就应用了这一原理。通过目

仪器-»-光谱分析仪器-»-正文-空心阴极灯不亮或特别亮

   首先,因为光电管的灵敏度是随着温度的改变而改变的,当温度升高时,光电管的灵敏度将降低,所以要注意温度影响,避免温度过高。其次,因为光电管的疲乏现象,光电管在较小光通量照射下,有较大灵敏度,当有较大光通量照射下,或是长时间曝光,光电管的灵敏度将显著下降,所以要注意避免强光或长时间的曝光。   

双向电泳操作步骤(第一向等电聚焦和第二向SDSPAGE...

双向电泳操作步骤(第一向等电聚焦和第二向SDS-PAGE电泳)(一)第一向等电聚焦1.从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液(I)(不含DTT,不含Bio-Lyte)一小管(1ml/管),置室温溶解。2.在小管中加入0.01g DTT,Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml,充分混匀。3.

噪音计操作步骤及操作步骤

  噪音计-操作步骤  1、打开噪音计携带箱,取出噪音计,套上传感器。  2、将噪音计置于A状态,检测电池,然后校准噪音计。  3、对照常见的环境声级大小表,调节仪器的测量量程。  4、测量:可以用快(测量声压级变化较大的环境的瞬时值)、慢(测量声压级变化不大的环境中的平均值)、脉冲(测量脉冲声源)

»-光谱分析仪器-»-正文-掌上型ATP快速荧光检测仪

  一、产品介绍   卫生部推荐卫生监督部门装备产品   1、ATP = 三磷酸腺酐的简称   2、生物荧光检测   它是一种自然发光反应   通过荧光素酶与 ATP进行反应,可检测人体细胞、细菌、霉菌、食物残渣   在15秒钟内得到反应结果   光照度通过专用设备进行测量,并以数字

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  技术参数:   1、测量范围:0~4mΩ (50A档) 0~2mΩ (100A档) 0~1.33mΩ (150A档) 0~1mΩ (200A档)   2、测试电流:DC50A、100A、150A、200A固定输出   3、测量精度:±(0.5% rd+2d)   4、连续工作时间:5s~

它仪器设备-»-正文

  近日,德国光谱电气技术有限公司发布首款基于新的模块化M4i平台的产品。新平台满足了很多客户对于增加数据流带宽和更高采样速率的要求。采集的数据可存储于4GByte板载缓冲区,并可以通过PCI Express x8 Gen2接口以超过每秒3GByte的速度读取数据。3/4长度的插卡与Gen1和Gen

国产分析仪器GC9890气相色谱仪操作步骤

开机进程    1、翻开氮气,氢气,空气开关    2、色谱仪侧面压力表应有指示(氮气压力表指针为3Kg,氢气压力表为1Kg,空气压力表为1.5 Kg)    3、色谱仪正面气路框压力表亦有指示(数值根据前面载气流量而定)    4、翻开气相色谱仪电路框侧面的电源开关(翻开时,开关灯应亮)    5

ELISA操作步骤

酶联免疫吸附实验材料,试剂,溶液1.酶标板,100μltip头,1ml Ep管,湿盒2.包被稀释液(0.05mol/L碳酸钠-碳酸氢钠buffer,pH 9.6)碳酸钠0.15g,碳酸氢钠0.29g,叠氮钠0.02g,加双蒸水至100ml,调至pH 9.63. 封闭液(5%小牛血清/PBS溶液)小牛