用辣根过氧化物酶标记的试剂进行间接检测

实验概要间接法是用未标记的一抗和标记有辣根过氧化物酶(HRP)的二级试剂,经过简单孵育后,进行酶促反应。将抗体直接加入细胞中就可以使一抗与细胞上的抗原结合,在加入不同抗体或同一抗体不同稀释度的溶液时,注意不要发生交叉污染,每一张盖玻片或样品管只能用于某一抗体溶液。抗体能够与相应抗原发生特异性结合,而未结合的抗体通过洗涤被去除,然后加入HRP标记的二级试剂,再经过洗涤后HRP酶促反应将在抗原—抗体结合的部位产生棕色沉淀。实验原理HRP标记的二级试剂通常用于低分辨率的研究,它可快速检测抗原的存在及位置。其主要优点为敏感性高、仅需光学显微镜即可观察等。用于标记二级试剂的酶及其底物有数十种。考虑到价格,建议使用HRP及DAB来进行细胞染色。经过较长时间的孵育,HRP酶促反应作用强且呈线性变化。在多数可选底物中,DAB是最常用于HRP标记的试剂,而且也最为敏感。反应产物为深褐色,亦不溶于水和乙醇中。在底物溶液中加入钴、镍等金属盐可提高此法......阅读全文

Elisa是什么意思

Elisa技术(enzyme-linkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附测定)ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)

Elisa是什么意思

Elisa技术(enzyme-linkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附测定)ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)

免疫荧光技术(immunofluorescence-technique)1

免疫荧光技术(immunofluorescence technique)是一种以荧光物作为标记物的免疫分析技术,荧光物质分子在特定条件下吸收激发光的能量后,分子呈激发态而极不稳定,其迅速回到基态时,可以电磁辐射形式释放出所有的光能,发射出波长较照射光长的荧光。用荧光素与已知的抗体(或抗原,较少用

用[32P]磷酸标记细胞实验

标记单层培养细胞 标记悬浮培养的HeLa细胞             实验材料 HeLa 细胞

用[32P]磷酸标记细胞实验

标记单层培养细胞标记悬浮培养的HeLa细胞实验材料HeLa 细胞                                                          试剂、试剂盒FCS                                                  

用[32P]磷酸标记细胞实验

实验材料 HeLa 细胞试剂、试剂盒 FCS磷酸盐仪器、耗材 无磷酸培养基实验步骤 1. 在含 10% FCS 的培养基中单层培养 HeLa 细胞至铺满 50% 左右。2. 倒掉完全培养基,加入新鲜的无磷酸培养基,培养 3~4 小时以耗尽胞内的磷酸储备。3. 换新鲜的无磷酸培养基,并加 32P 磷酸

间接火焰原子吸收法测定样本铝含量的试剂选择

试剂①铝标准贮备液:准确称取预先磨细并在硅胶干燥器中放置3 d以上的 KAI(SO4)2·12H2O(AR)1.759 g,用0.5%H2SO4溶液溶解,并定容至100 ml,此溶液含铝1.000 mg/ml。②铝标准使用液:临用前,用0.05%H2SO4溶液将铝标准贮备液逐级稀释,使成为含铝10

零残留活性剂、零絮凝纳米球在免疫检测试剂中的应用

现代免疫检测的工作原理       免疫检测是目前医疗卫生和生物科学研究领域常用的诊断方法。免疫检测的核心步骤为抗原-抗体间特异性的复合反应,通过复合反应产生检测信号,实现对溶液中抗体或抗原性的定量。由于抗体分子能够识别非常有限的分子种类,因此免疫检测能够获得极高的准确性。         酶标抗体

实验室试剂极谱用试剂的定义

极谱用(For polarography)试剂是指在用极谱法作定量分析和定性分析时所需要的试剂。

实验室试剂色谱用(For-chromatography)试剂的定义

色谱用(For chromatography)试剂是指用于气相色谱、液相色谱、气液色谱、薄层色谱、柱色谱等分析法中的试剂和材料,有固定液、担体、溶剂等。

全自动酶免疫分析仪的基本原理和测定模式

目前绝大部分全自动免疫分析仪所采用的测定原理是酶免疫试验,这些分析仪又可称为全自动酶免疫分析仪,这一类分析仪根据其所用试剂是否为专用,又可分为试剂“限定”和试剂“开放”两类,试剂开放的全自动酶免疫分析仪相对较少,如BIO-RAD公司的CODA和Per—sonal Lab等;而试剂限定的全自动酶免

动物免疫实验

实验概要将某种蛋白注射新西兰大耳兔产生免疫反应,通过ELISA检测免疫产生的抗体。实验原理将抗原吸附在固相载体表面,加入抗血清,抗体和抗原在载体表面形成抗原-抗体复合物,洗去未结合抗体,然后加入辣根过氧化物酶标记的二抗(抗体的抗体),二抗与抗体结合,洗去未结合二抗,加底物显色剂显色,在一定波长下测定

动物免疫实验

实验概要将某种蛋白注射新西兰大耳兔产生免疫反应,通过ELISA检测免疫产生的抗体。实验原理将抗原吸附在固相载体表面,加入抗血清,抗体和抗原在载体表面形成抗原-抗体复合物,洗去未结合抗体,然后加入辣根过氧化物酶标记的二抗(抗体的抗体),二抗与抗体结合,洗去未结合二抗,加底物显色剂显色,在一定波长下测定

应用非标记探针法进行基因分型(三)

高分辨率熔解 在高分辨率熔解仪器HR-1(爱荷华科技,盐湖城,犹他州)上进行分析,将LightCycle毛细管加入HR-1中,0.3℃/s加热。主要的实验中,RET外显子的扩增及非标记探针熔解数据从60℃到95℃采集。主要实验分析了每个外显子的扩增子及探针数据,除了外显子14。因为所有报道的外显子1

应用非标记探针法进行基因分型(五)

用相似的方法分析外显子11(表3;补充图2;补充表3;http://jmd.amjpathol.org),且所有外显子11的RET序列变化用扩增子高分辨率熔解分析进行检测(没有显示数据)。外显子11的主要实验用一个在致病密码子630和634上的野生型探针。检测的外显子11的8个序列变化均有一个等位基

应用非标记探针法进行基因分型(六)

外显子14:多重探针分析       主要实验的外显子14, 两个野生型的探针同时用于一个反应,用来检测所有已报道的外显子14的突变,同时消除密码子836(p.S836S)多态性(图4;a和b;表3;补充表5;http://jmd.amjpathol.org)。WT14A探针在65℃-76℃

应用非标记探针法进行基因分型(四)

外显子10和11:多重突变热点MEN2A和FMTC的主要突变位于外显子10(密码子609、611、618和620)和11(密码子630和634),且野生型半胱氨酸的密码子DNA序列“TGC”发生单核苷酸改变。外显子10和11报道的序列变化>40(表1)。RET10外显子的主要实验包括两个单独的实验和

应用非标记探针法进行基因分型(一)

RET原癌基因单个碱基的突变可以引发多发性内分泌腺瘤2型。RET突变传统的基因分型方法是外显子测序。一种闭管操作的基因分型方法已经成熟,此方法用的是一种饱和DNA染料,非标记探针及高分辨率熔解扩增子分析。此方法需要两个连续的聚合酶链式反应阶段,主要的和第二次实验。主要的实验共用7个反应和8个非标记探

应用非标记探针法进行基因分型(二)

材料和方法样品      此报道中用到的野生型RET基因的DNA基因组样品或有RET序列变化的样品在以前描述过。RET基因序列变化改变RET蛋白的功能引发MEN2综合症的是突变,然而RET序列改变不会引发MEN2综合症是多态。不能确定意义的稀有的或不会引起MEN2综合症的RET基因序列变化成为“序列

应用非标记探针法进行基因分型(七)

一般来说,用特定突变探针产生1/3结果。首先,当突变序列与特定突变探针互补时,突变等位基因的熔解Tm要高于野生型(△Tm为-2℃至-5℃)。第二,当突变在相同位置但是与特定突变探针序列不互补时,突变等位基因被野生型等位基因相似的Tm值及稳定性所遮蔽(野生型等位基因Tm±0.5℃)。在这种情况下,没有

酶联免疫吸附法在食品检验中的应用

  摘要:酶联免疫吸附技术(ELISA)是将抗原抗体反应的高度特异性和酶的高效催化作用相结合的一种免疫分析方法,具有操作简便、快速、有效、特异性强等特点,能批量检测食品中的药物残留、病原微生物以及转基因食品等。本文主要阐述了酶联免疫吸附法在食品安全检测中的应用。   食品安全问题是全球关注的焦点,它

间接法检测抗人球蛋白实验

实验方法原理间接试验的目的是检查血清中存在游离的不完全抗体。先用Rh(D)阳性O型(或与被检查ABO同型)的正常人红细胞吸附血清中存在的游离不完全抗体(即称致敏)致敏红细胞经盐水洗涤后加入抗人球蛋白血清,如出现凝集即为抗人球蛋白间接试验阳性.试剂、试剂盒生理盐水实验步骤方法一:1. 取受检血青0.5

间接法检测抗人球蛋白实验

实验方法原理间接试验的目的是检查血清中存在游离的不完全抗体。先用Rh(D)阳性O型(或与被检查ABO同型)的正常人红细胞吸附血清中存在的游离不完全抗体(即称致敏)致敏红细胞经盐水洗涤后加入抗人球蛋白血清,如出现凝集即为抗人球蛋白间接试验阳性.试剂、试剂盒生理盐水实验步骤方法一:1. 取受检血青0.5

用PCR进行基因分型

与许多一次做数百块Southern blots的研究人员一样,我第一次用PCR做基因分型(genotyping)时觉得见效很快,不再需要等几天才能看到结果,不再需要DNA显微图像或者操作紫外线了。随着技术的不断进步,RCR使基因组学和转录组学发生了翻天覆地的变化,甚至随着免疫PCR的普及开始进军蛋白

AFP-ELISA检测试剂盒样本处理方法

样本处理及要求:费用血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存

用SpectraMax多功能微孔板读板机进行cAMP-HiRange检测(一)

简介在这篇应用文献中,我们展示了如何用SpectraMax®i3、SpectraMax®Paradigm®和SpectraMax®M5e多功能微孔板读板机进行可靠的、高通量的HTRF®检测,并具有完美的Z’因子和高重复性的EC50值。HTRF®是CisbioBioassays公司开发的一项检测生物分

用非同位素探针进行原位杂交和检测实验

实验方法原理 实验材料 载有样本的载玻片试剂、试剂盒 20〜150 ng非同位素标记的DNA探针去离子的甲酰胺l0 mg mL经超声处理的鲑精DNA主杂交混合液50% (V V)甲酰胺(未去离子)SSC pH 7.0生物素检测液或地高辛检测液或生物素 地高辛检测液0.1% (V V) Tr

用非同位素探针进行原位杂交和检测实验

荧光原位杂交 杂交信号的放大 地高辛标记探针的信号放大             实验方法原理 实验材料

用SpectraMax多功能微孔板读板机进行cAMP-HiRange检测(二)

Z’ 因子由阴性(无cAMP,无cAMP-d2)和阳性质控(无cAMP)计算得到2。利用SoftMax® Pro软件生成和分析数据,包含一些预设的HTRF实验模板以简化检测和分析。结果使用SoftMax Pro软件的4-参数曲线拟合如上所述进行数据分析和做图。依据表2的读板机参数设置获得最佳结果

血小板表面标记的检测方法

            实验方法原理 全血法荧光单标记可检测血小板 CD62p、CD63、CD42b、CD41、CD61 等指标。 实验材料 荧光标记抗体 全血