【干货】小谈T载体
小谈T载体 目前市场上TA克隆的种类繁多,各大厂家都推出自己各具特色的TA克隆试剂盒。对于科研工作者来说,这些TA克隆试剂盒之间有何区别?又该如何选择适合自己的TA克隆? 今天,小编就带着这两个问题来和大家一起了解一下。 T载体的定义 T载体(T-Vector)是一种高效克隆 PCR 产物(TA克隆)的专用质粒载体,为线性化载体,无需酶切可直接与具有A末端的PCR产物连接,属于非定向克隆。 T载体的作用原理 大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都具有在PCR产 物的3’末端添加一个“A”的特性。因此,人们在线性化平末端载体的两端分别又人工加上一个额外的T碱基,从而可与PCR克隆产物的A末端互补配对,提高了PCR产物连接和克隆的效率。 T载体的制备 • 商业化T载体: 一般来说,商业化的T载体多是先使用平端限制性内切酶(如EcoRV)将克隆载体进行线性化,然后再单独加入dTTP和Taq酶72~75℃反应,......阅读全文
【干货】小谈T载体
小谈T载体 目前市场上TA克隆的种类繁多,各大厂家都推出自己各具特色的TA克隆试剂盒。对于科研工作者来说,这些TA克隆试剂盒之间有何区别?又该如何选择适合自己的TA克隆? 今天,小编就带着这两个问题来和大家一起了解一下。 T载体的定义 T载体(T-Vector)是一种高效克隆 PCR 产
T载体的制作和应用
Also see DNA Cloning§ Making TA Vector (Crawford Lab)T-vectors are linear-blunt-ended plasmids with a few dT's added on by Taq polymerase.
T载体的概念和应用
T载体是聚合酶链反应产物的克隆运载体,线性化后两侧3′端各多出一个脱氧胸苷酸(T)。由于PCR产物两侧3′端通常含单个脱氧腺苷酸(A),与T载体之间的A-T互补性可提高PCR产物克隆的效率。
EZT克隆载体介绍
EZ-T Simple载体环形图和多克隆位点区序列EZ-T载体环形图和多克隆位点区序列 EZ-T载体全序列信息1 CTGACGCGCC CTGTAGCGGC GCATTAAGCG CGGCGGGTGT GGTGGTTACG51 CGCAGCGTGA CCGCTACACT TGCCAGCGCC C
PCR产物的T载体克隆
(一)重组T质粒的构建一.原理外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组,这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的 DNA分子是在DNA连接酶的作用下,有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中,将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。DNA连接酶有两种:T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌
T载体克隆的DNA序列分析
实验目的: 了解常规DNA序列分析技术(Sanger双脱氧法)的原理及操作步骤。 实验原理: 在分子生物学研究中,DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等(1977)发明的双脱氧链末端终止法和Maxam和Gilbert(1977)发明的化学
常见的T载体及连接方法
T载体 是TA克隆载体的简称,就是利用载体的T末端和PCR产物的A末段连接而将目的基因克隆到载体中的方法。目前市场上常见的T载体 ,根据连接方法可以分成两种:方法1、以T4连接酶进行连接的方法,这种方法的载体 有P公司、T公司,可以说这两家公司将这两种方法发挥到了很高的水平,转化子比较多,阳性率也不
关于T载体克隆的显色反应介绍
LacZ基因是大肠杆菌乳糖操纵子中的一个基因,可以编码β—半乳糖核苷酶。β—半乳糖核苷酶是由4个亚基组成的四聚体,可催化乳糖的水解.用X-Gal为底物进行染色时,呈蓝色。 一些特定的质粒(比如pUC/pBS等),常带有β—半乳糖核苷酶的调控序列和β—半乳糖核苷酶N端146个氨基酸(α肽段)的编
克隆化的PCR产物连入T载体
由 Taq DNA 聚合酶 PCR 扩增产生的带 3' 突出端为 A 碱基的 DNA 片段能高效地克隆至 T 载体上,这种 T 载体有与 A 碱基互补的未配对 3' T 碱基(Holton and Graham 1991; Marchuk et al. 1991)。本实验来源「分子克
克隆化的PCR产物连入T载体
实验方法原理 由 Taq DNA 聚合酶 PCR 扩增产生的带 3' 突出端为 A 碱基的 DNA 片段能高效地克隆至 T 载体上,这种 T 载体有与 A 碱基互补的未配对 3' T 碱基(Holton and Graha
关于T载体克隆的基本信息介绍
重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下,有Mg2 、ATP存在的连接缓冲系统中,将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。 DNA连接酶有两种:T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能,而且T4噬菌体DNA连接酶
克隆化的PCR产物连入T载体
实验方法原理 由 Taq DNA 聚合酶 PCR 扩增产生的带 3' 突出端为 A 碱基的 DNA 片段能高效地克隆至 T 载体上,这种 T 载体有与 A 碱基互补的未配对 3' T 碱基(Holton and Graham 1991; Marchuk et al. 1991
pGEM®T载体的基本信息和质粒图谱
pGEM®-T载体载体基本信息载体名称pGEM®-T载体抗性Ampicillin载体长度3000 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Promega拷贝数High copy number5'引物M13 fwd3'引物M13 revpGEM®-T载体质粒图谱
pGEM®T-Easy载体的基本信息和质粒图谱
pGEM®-T Easy载体载体基本信息载体名称pGEM®-T Easy载体抗性Ampicillin载体长度3015 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Promega拷贝数High copy number5'引物M13 fwd3'引物M13 revpGEM
pF1A-T7载体的基本信息和质粒图谱
pF1A T7载体载体基本信息载体名称pF1A T7载体抗性Ampicillin载体长度3455 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Promega拷贝数High copy numberpF1A T7载体质粒图谱
pF25A-ICE-T7载体的基本信息和质粒图谱
pF25A ICE T7载体载体基本信息载体名称pF25A ICE T7载体抗性Ampicillin载体长度3947 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Promega拷贝数High copy numberpF25A ICE T7载体质粒图谱
pF1K-T7载体的基本信息和质粒图谱
pF1K T7载体载体基本信息载体名称pF1K T7载体抗性Kanamycin载体长度3450 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Promega筛选标记Neomycin/G418(Geneticin)拷贝数High copy numberpF1K T7载体质粒图谱
pFN18A-HaloTag®-T7载体的基本信息和质粒图谱
pFN18A HaloTag® T7载体载体基本信息载体名称pFN18A HaloTag® T7载体抗性Ampicillin载体长度4377 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Promega拷贝数High copy numberpFN18A HaloTag® T7载体质粒
pF25K-ICE-T7载体的基本信息和质粒图谱
pF25K ICE T7载体载体基本信息载体名称pF25K ICE T7载体抗性Kanamycin载体长度3942 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Promega筛选标记Neomycin/G418(Geneticin)拷贝数High copy numberpF25K I
pFN18K-HaloTag®-T7载体的基本信息和质粒图谱
pFN18K HaloTag® T7载体载体基本信息载体名称pFN18K HaloTag® T7载体抗性Kanamycin载体长度4372 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Promega筛选标记Neomycin/G418(Geneticin)拷贝数High copy n
质粒载体的载体大小的介绍
大的质粒(大于15kb)不会很好转化而且DNA产量通常很低。在设计实验时要考虑到加入插入片段的最终载体大小,尽量用更小的载体。 兼容性 当多于一个质粒载体必须同时存在于同一个细菌细胞中,这两个质粒的复制子必须是兼容的。当他们不能稳定地共存时,则认为这两个质粒是不兼容的。 选择/检测插入片段
LITMUS39载体载体载体的基本信息和质粒图谱
LITMUS39载体载体基本信息载体名称LITMUS39载体抗性Ampicillin载体长度2817 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Evans PD, Cook SN, Riggs PD, Noren CJ.拷贝数High copy number5'引物M13
微载体
实验方法原理以高浓度接种细胞和微珠,然后按照要求进行稀释、搅拌和取样。实验材料起始培养物仪器、耗材生长培养基微载体搅拌培养瓶磁力搅拌器实验步骤1. 按照所需最终培养液量的 1/3,以 2~3 g/L 混悬微珠。2. 用胰蛋白酶消化和计数细胞,以正常接种浓度的 3~5 倍将细胞接种到微珠悬液中。3.
微载体
实验方法原理 以高浓度接种细胞和微珠,然后按照要求进行稀释、搅拌和取样。 实验材料 起始培养物
微载体
实验方法原理 以高浓度接种细胞和微珠,然后按照要求进行稀释、搅拌和取样。 实验材料 起始培养物
简述慢病毒载体的载体质粒
载体质粒上HIV-1的顺式序列通常包括两端的LTR、剪切位点及包装信号Ψ等。此外,研究表明,gag基因5′端的序列可提高载体RNA的包装效率;Rev蛋白需要与Rev反应元件(RRE)相作用,将未剪切的载体转录产物从细胞核转运到胞浆。因此,Naldini等在载体上保留了gag基因5′端350bp的
pFC20A-HaloTag®-T7-SP6载体的基本信息和质粒图谱
pFC20A HaloTag® T7 SP6载体载体基本信息载体名称pFC20A HaloTag® T7 SP6载体抗性Ampicillin载体长度4422 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Promega拷贝数High copy numberpFC20A HaloTag
pFC30A-His6HaloTag®-T7载体的基本信息和质粒图谱
pFC30A His6HaloTag® T7载体载体基本信息载体名称pFC30A His6HaloTag® T7载体抗性Ampicillin载体长度4312 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Promega拷贝数High copy numberpFC30A His6Hal
pFN19A-HaloTag®-T7-SP6载体的基本信息和质粒图谱
pFN19A HaloTag® T7 SP6载体载体基本信息载体名称pFN19A HaloTag® T7 SP6载体抗性Ampicillin载体长度4428 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Promega拷贝数High copy numberpFN19A HaloTag
pFN29A-His6HaloTag®-T7载体的基本信息和质粒图谱
pFN29A His6HaloTag® T7载体载体基本信息载体名称pFN29A His6HaloTag® T7载体抗性Ampicillin载体长度4398 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Promega拷贝数High copy numberpFN29A His6Hal