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HCC94(HCC941122)细胞复苏操作流程

1. 准备工作,开水浴锅,预热试剂,超净工作台紫外照射 30min,找到对应细胞在液氮罐中的位置2. 紫外照射后风机吹 10min 后,酒精擦拭台面,放入试剂和离心管,取 15ml 离心管,加入 9ml 培养液3. 在液氮罐中取出细胞,先拧松放液氮,再拧紧,将冻存管放入 PE 手套中,然后水浴融化后取出,1-2min4. 将冻存管喷酒精后放入超净台内,擦干管壁,用 1ml 头将细胞转移到已加培养液的离心管中5. 800-1000rpm 离心 5min,注意配平6. 将离心好的细胞弃上清,加入 5ml 完全培养基重悬,用移液管吹打 8-10 次, 避免产生气泡,将细胞悬液接种到 250px 培养皿中,补加 5ml 培养液7. 混匀,十字法或者 8 字法8......阅读全文

HCC 94 (HCC941122)细胞培养注意事项

HCC 94 (HCC941122)细胞。培养注意事项1.收到HCC 94 (HCC941122)细胞。后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现 象发生请及时和我们联系。2. 仔细阅读HCC 94 (HCC941122)细胞。说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基

HCC 94 (HCC941122)细胞培养操作

1)复苏细胞:将含有 1mLHCC 94 (HCC941122)细胞。悬液的冻存管在  37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL  培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(

DNA重组技术-2

 感受态细胞的制备(一)制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞  下述操作方案是由Hanahan(1983)提供的,所制备的大肠杆菌DHl、DH5和MM249感受态细胞培养物能使每微克超螺旋DNA以≥5x108转化菌落的频率进行转化,其他大多数大肠杆菌菌株的最高转化率大约只有前述菌株的1/10

异显示技术(DD)实验

D D 由 Liang和 Pardee在 1992年首次提出。至今有大约1700篇 与 DD相关的文章发表,可见其影响巨大。许多与神经变性和凋亡相关的基因也通过DD 的方法得以鉴定。 .DD的原理基于对cDNA分子进行随机扩增和随后按大小进行的分离。

四环素作为可诱导基因表达的调控物实验

下面的方案分成 3 个阶段:用 pTet-tTAk 稳定转染成纤维细胞,稳定转染可诱导表达 tTA 的 NIH-3T3 细胞,分析转染细胞中的蛋白表达。稳定转染细胞系表达反式激活因子和靶基因分为两个阶段。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验

简述基因治疗的最新临床研究进展

  基因疗法以其“一次给药,终身受益”的优势越来越受到医疗市场的青睐。截至目前,欧洲药品管理局(EMA)、美国食品药品管理局(FDA)及中国国家食品药品监督管理总局(NMPA)等机构至少已批准13种基因治疗产品上市,同时还有2500多项细胞和基因治疗正在进行临床试验。2019年8月,国际顶级期刊《新

CELLine生物反应器工作原理及特点

Wheaton的CELLine生物反应器采用细胞室与培养基室半透膜分离培养技术,突破了传统细胞培养的空气,营养物质,代谢抑制因子对细胞生长的制约。最大程度的模拟了细胞在有机体的生长环境。实现了高密度细胞培养,高浓度产物表达的培养目的。CELLine二室技术示意图CELLine 生物反应器是如果工作的

方案8 用 FRET 法分析体内蛋白质的相互作用实验

实验材料a-GFP 抗体编码 CFP 和 YFP 的 DNA酵母细胞株系试剂、试剂盒分子生物学试剂合成的完全液体培养基酵母操作试剂编码目标内源蛋白的 DNA 片段仪器、耗材滤光镜装置图像分析软件显微镜设备分子生物学和酵母操作用的标准设备实验步骤一、实验设计因为体内 FRET 实验的复杂性,要获得有效

PNAS:利用循环肿瘤细胞提高对肝癌的诊断和监测

  利用一种高级PCR技术分析循环肿瘤细胞或可大大提高对早期阶段癌症的诊断能力。在这篇发表在国际学术期刊PNAS上的文章中,来自麻省总医院癌症中心的研究人员详细描述了如何将他们开发的CTC-iChip技术与基于RNA的数字PCR技术结合在一起提高对肝细胞癌(HCC)病人血液中循环肿瘤细胞的检测。  

冻存细胞的复苏

冻存细胞的复苏可以用于:(1)在细胞的实验操作中,冻存的细胞要进行复苏,再培养传代。(2)持久地保留细胞系实验方法原理冻存细胞应在流水中快速融化并加入生长培养液。实验者应配戴护目镜和手套,因为曾浸没在液氮中的冻存管中可能漏人液氮,而当融化冻存液时冻存管中的气体温度上升可导致爆炸。实验材料冻存细胞试剂

质粒的转化及转化子的鉴定实验——热激法

质粒的转化是指将质粒或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。将连接产物转化到感受态细胞中,实现重组克隆的增殖,便于后续分子操作(1)用于基因的克隆增殖;(2)筛选目的细胞。实验方法原理热激法:大肠杆菌在0 ℃ CaCl2低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟

肿瘤细胞体外传代培养及保种

肿瘤细胞体外传代培养及保种可应用于:(1)研究癌变机理;(2)抗癌药检测;(3)癌分子生物学研究。实验方法原理肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置,是比较容易培养的细胞。癌细胞形态不规则,细胞界限清晰,对营养要求不高,在体外培养可无限制传代而不凋亡。体外培养的细胞一旦建立细胞系就需要进行一系列细胞生物

siRNA表达载体的构建

siRNA表达载体构建可应用于:(1)作为后基因组时代基因功能分析的有力工具;(2)基因组学、细胞信号传导通路分析;(3)药物靶点筛选、疾病治疗。实验方法原理多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种,操纵一段小的发夹RNA(short hairpin RN

专题:常用分子生物学实验方法

*章 基因克隆 1. 操作流程 收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体 连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴 定(酶切法或PCR)——>质粒抽

植物蛋白质组学和糖基化实验

实验材料链霉亲和素-过氧化物酶                                       &

表皮角质形成细胞模型构建实验

培养的表皮角质形成细胞可用作:(1)分化模型、器官型培养的理想组织构建物和细胞间相互作用的研究;(2)烧伤或外伤修复的移植物。实验方法原理用酶消化法将表皮与真皮分开,然后分离角质形成细胞,用无血清培养液培养或在生长停止的饲养层细胞上培养。 实验材料皮肤组织试剂、试剂盒热解素胰蛋白酶SKDM

体细胞杂交实验——单层全细胞融合实验

实验材料汇合至一定程度的受体细胞试剂、试剂盒受体细胞适合生存的培养基合适的选择性试剂含感兴趣染色体及合适遗传标记的供体细胞仪器、耗材10 cm 组织培养板25 cm 组织培养瓶倒置相差显微镜实验步骤基本方案 单层全细胞融合1.倘若不知道细胞的选择条件,通过以下方式来确定:将培养于 25 cm 培养瓶

真核表达文库的构建与筛选实验

类似方案 1、方案 2 描述了在真核表达载体上进行 cDNA 文库构建与筛选的方法, 流程分为以下两个阶段:1. 在真核表达载体上构建 cDNA 文库;2. 在真核表达载体上构建的 cDNA 文库的筛选。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)上册,作者:黄培堂。实验材料宿主细胞质粒或λ噬菌体表达载体

饶毅再再发文回复凌堃:不要帮倒忙

  发件人: Transmissome  日期: Sunday, January 24, 2021 at 6:17 PM  至: "Ling, Kun, Ph.D."  抄送: ——-////—-  主题: Re: 补充:给饶毅教授的回复  树欲静而风不止:答裴钢学生凌堃等—不要

饶毅再再发文回复凌堃:不要帮倒忙

  发件人: Transmissome  日期: Sunday, January 24, 2021 at 6:17 PM  至: "Ling, Kun, Ph.D."  抄送: ——-////—-  主题: Re: 补充:给饶毅教授的回复  树欲静而风不止:答裴钢学生凌堃等—不要

电转化流程

电转化流程适用于(1)转基因(2)基因介导(3)基因修复。实验方法原理胞电转染(电转),也叫细胞电穿孔 (electroporation),是把外源大分子物质DNA、RNA、siRNA、蛋白质等以及一些小分子导入细胞膜内部的重要方法。 在瞬间强大电场的作用下,溶液中细胞的细胞膜具有了一定的

密度梯度细胞分离法

实验方法原理制备密度梯度液,通过密度梯度液离心细胞,收集各梯度组分,用培养基稀释,培养细胞。实验材料细胞样品试剂、试剂盒D-PBS0.25%胰蛋白酶仪器、耗材生长培养基生长培养基+20% Percoll25ml离心管注射器或梯度收集器24孔培养板折光仪或密度计低速离心机实验步骤通过下述方法之一制备密

人前列腺素E2(PGE2)ELISA试剂盒使用说明

产品编号:EH4233尺寸:48T/96T特异性:人范围:31.2-2000pg/ml灵敏度:<18.75pg/ml应用:用于定量检测血清,血浆,组织匀浆和其他生物体液中的PGE2。储存:4℃,6个月注意:仅供研究使用。 套件组件 Item Specif

2015年国家自然科学基金优秀青年科学基金资助名单

  分析测试百科网讯 近日,国家自然科学基金网站公布了2015年国家自然科学基金优秀青年科学基金获批项目,共400项,每项批准金额130万元。具体如下:2015年国家自然科学基金优秀青年科学基金获批项目序号项目名称项目负责人依托单

基本方案2 植入基因修正的细胞到新生的小鼠脑内

实验材料基因修正的细胞新生小鼠试剂、试剂盒乙醇抗菌素外科胶水仪器、耗材汉密尔顿注射器显微操作仪手术用具幼鼠脑图谱加热板实验步骤1.为移植开始培养基因修正的细胞,收获 80%~90% 的汇合度的细胞。手术时,当麻醉和准备动物的时候准备好悬浮细胞(支持方案)。手术期间,每 30~60 min 重悬细胞。

从瑞德西韦看特效药临床实验:III期和同情用药的区别

瑞德西韦英文名Remdesivir,网友们用中文拼音翻译成:人民的希望。不得不说译名太贴地气了!先看近期新闻,所有数据以官方为准!先回顾一下这个疫情相关药以及检测的历史流程,从12月初开始。1.20200123:美国专家:正与中国合作研发新型冠状病毒疫苗,一年后或上市(机构:贝勒医学院、德克萨斯大学

酿酒酵母培养条件实验_酵母培养物的储存

实验方法原理酵母在琼脂或液体培养基中的理想培养温度是30℃,培养皿平板应倒置放入塑料盒中,于孵箱或培养室内进行培养。当孵育时间超过2或3天时,塑料盒可防止平板上的琼脂干裂。当使用液体培养基培养时,要使用旋转式或往复式摇床,至少每分钟200转,以保证充分通气;进行大体积液体培养时使用锥形瓶,培养基为瓶

细胞划痕实验——划痕法

细胞划痕实验可应用于:(1)检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力;(2)研究细胞基质和细胞间相互作用对细胞迁移的影响。实验方法原理创伤愈合实验是一种简单、廉价的方法,也是最早发展起来的研究定向细胞在体外迁移的方法之一。该方法模拟了细胞在体内愈合过程中的迁移过程。基本步骤包括在细胞单层中创建一个“伤口”

细胞瞬时转染

细胞瞬时转染可用于(1)观察目的基因功能(2)表达蛋白在某种细胞中的功能(短时间即可进行观察,但效应会很快丢失)。实验方法原理通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术,将靶基因导入细胞,一般在转染后48小时左右,靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的,48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。

“动物细胞融合与单克隆抗体”教学案例

  1.情境导入,类比学习   有趣的引入,是课堂教学成功的一半。一节课的导入恰如其分,就能使课堂气氛变得轻松、活泼,牢牢吸引学生的注意力,使其产生浓厚的兴趣和强烈的求知欲,从而活跃思维,充分发挥主观能动性。为了达到上述目的,我提前到达A3阶梯室,播放准备好的《今天我要嫁给你》的MV,MV