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HCC94(HCC941122)细胞培养注意事项

HCC 94 (HCC941122)细胞。培养注意事项1.收到HCC 94 (HCC941122)细胞。后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现 象发生请及时和我们联系。2. 仔细阅读HCC 94 (HCC941122)细胞。说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题,责任由客户自行承担。3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常, 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活 力,请拍下 照片及时和我们联系,信息确认后我们为您再免费寄送一次。4.静置细胞贴壁后,......阅读全文

HCC 94 (HCC941122)细胞培养操作

1)复苏细胞:将含有 1mLHCC 94 (HCC941122)细胞。悬液的冻存管在  37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL  培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(

羊膜细胞的培养——封闭式试管培养

实验方法原理在标准培养箱(37°C ) 中用 Leighton 塑料管培养细胞,然后用胰蛋白酶悬浮法收集细胞。实验材料羊水标本D-PBSA秋水仙酰胺胸腺嘧啶核苷溴脱氧尿核苷胰蛋白酶EDTAHistopaque-l077试剂、试剂盒完全培养液胰蛋白酶和EDTA混合液消毒剂如Virkon氯化钾低渗溶液固

培养箱的种类与功能大盘点!

培养箱,通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞、组织、微生物在生物体内或某一特定情况的生长环境,如一定的温度、一定的湿度、一定的光照或一定的CO2水平、一定的酸碱度等,来对细胞、组织、生物体进行体外培养的一种装置,是植物、生物、微生物、遗传、病毒、医学、环保等领域广泛使用的设备,广泛应用于低温恒温试

培养箱的种类与功能大盘点

培养箱,通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞、组织、微生物在生物体内或某一特定情况的生长环境,如一定的温度、一定的湿度、一定的光照或一定的CO2水平、一定的酸碱度等,来对细胞、组织、生物体进行体外培养的一种装置,是植物、生物、微生物、遗传、病毒、医学、环保等领域广泛使用的设备,广泛应用于低温恒温试

检测细胞凋亡的实验方法比较-5

3 胆汁淤滞性肝病在许多临床综合征中可以观察到胆汁淤滞,胆汁淤滞是一组慢性进行肝病的主要特征,并可最终导致肝硬化、肝衰竭和死亡。肝内疏水的毒性胆盐储滞长期以来被认为是肝损伤的一个主要原因,并被认为是胆汁淤滞性肝病肝损伤的一个关键原因。事实上肝内毒性胆盐:鹅脱氧胆酸和脱氧胆酸盐的储滞水平与肝损伤的程度

多重端粒荧光原位杂交实验

实验方法原理实验材料永生化淋巴细胞株试剂、试剂盒青霉素谷氨酰胺胎牛血清植物血球凝集素胸苷秋水仙胺KCl甲醇冰乙酸柠檬酸钠SSC甘油生物素-16-dUTP地高辛-11- dUTP10 XdNTP 混合物仪器、耗材超净台细胞培养瓶Nunc 管培养基相差显微镜染色缸加热板装有Pinkel滤光片轮的CCD显

原核表达——基因克隆技术

原核表达可以用于检测(1)发生在原核生物内的基因表达。(2)通过基因克隆技术,将外源目的基因,通过构建表达载体并导入表达菌株的方法,使其在特定原核生物或细胞内表达。实验方法原理一个完整的表达系统通常包括配套的表达载体和表达菌株。如果是特殊的诱导表达还包括诱导剂,如果是融合表达还包括纯化系统或者Tag

重组病毒噬斑筛选实验

实验材料转染细胞溶解产物BS-C-1/HuTK-143B/BHK-21/CEF 贴壁生长汇片的细胞试剂、试剂盒完全 2 × 噬斑培养基-5完全MEM-2.5培养基筛选试剂LMP 琼脂糖溶液5-溴脱氧尿苷溶液中性红溶液X-gal溶液X-gluc溶液干冰/乙醇仪器、耗材6孔 35 mm 组织培养板杯状超

细胞的冻存与复苏实验_液氮冻存法

实验方法原理目前长时间保存细胞的方法是将细胞低温冻结保存在液氮中(-196 ℃),保存时间可长达一年甚至几年,用时解冻,大多数细胞仍能生长繁殖,为妥善起见,细胞冻存一年后应复苏培养后再冻存。冻存细胞时应加入保护剂,否则,细胞内外的水会结成冰晶,使细胞发生机械损伤。加入保护剂后,可使冰点降低

目的基因的亚克隆

目的基因的亚克隆所谓亚克隆就是对已经获得的目的DNA片段进行重新克隆,其目的在于对目的DNA进行进一步分析,或者进行重组改造等。    亚克隆的基本过程包括:(1)目的DNA片段和载体的制备;(2)目的DNA片段和载体的连接;(3)连接产物的转化;(4)重组子筛选。&n

单层细胞的传代

实验方法原理去除培养基,加人胰蛋白酶短暂作用,孵育,以培养基分散细胞,计数,稀释并再接种。实验材料A549细胞WI-38MRC-5胰蛋白酶D-PBS试剂、试剂盒70%乙醇喷壶仪器、耗材生长培养基吸管离心管培养瓶移液器吸耳球吸水纸巾吸管桶抗乙醇记号笔血细胞计数板实验步骤1. 准备超净工作台,将试剂及材

表皮角质形成细胞模型构建实验

培养的表皮角质形成细胞可用作:(1)分化模型、器官型培养的理想组织构建物和细胞间相互作用的研究;(2)烧伤或外伤修复的移植物。实验方法原理用酶消化法将表皮与真皮分开,然后分离角质形成细胞,用无血清培养液培养或在生长停止的饲养层细胞上培养。 实验材料皮肤组织试剂、试剂盒热解素胰蛋白酶SKDM

真核表达文库的构建与筛选实验

类似方案 1、方案 2 描述了在真核表达载体上进行 cDNA 文库构建与筛选的方法, 流程分为以下两个阶段:1. 在真核表达载体上构建 cDNA 文库;2. 在真核表达载体上构建的 cDNA 文库的筛选。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)上册,作者:黄培堂。实验材料宿主细胞质粒或λ噬菌体表达载体

从成年骨骼肌分离和培养成肌细胞

在添加 20 %(fetal bovine serum,FBS)的 Ham’s F12 培养中,原代细胞容易生长。在不改变培养条件的情况下,这些细胞增殖和分化,融合形成多个细胞核的肌管。这证明培养的细胞具有成肌性。实验方法原理在添加 20 %(fetal bovine serum,FBS)的 Ham

将DNA导入酵母细胞实验_乙酸锂转化

实验材料待转化的酵母菌株试剂、试剂盒YPD培养基YPAD培养基:添加30 mg L腺嘌呤半硫酸的YPD培养基高纯无菌水l0×TE缓冲液pH 7.5无菌10×乙酸锂储液:1 mol L乙酸锂pH 7.5 (用稀乙酸调pH)过滤除菌DNA :高分子质量单链载体DNA和待转化DNA50% (m V) PE

细胞冻存和复苏实验

细胞冻存和复苏可以:(1)用于生物学保种;(2)用于医学上干细胞研究;(3)用于传代培养。实验方法原理细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融,实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂,这两种物质能提高细胞膜对水的通透性,加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外,减

重组腺病毒构建,扩增及纯化基本技术操作

重组DNA技术可以用于:(1)据需要选择目的基因(DNA片段)在体外与基因运载体重组,转移至另一细胞或生物体内,以达到改良和创造新的物种和治疗人类疾病的目的;(2)是现代分子生物技术发展中最重要的成就之一,即是基因工程(Gene Engineering)的核心技术。实验方法原理Adeasy系统利用了

质粒转染大肠杆菌

质粒转染大肠杆菌可应用于:(1)细菌株的构建;(2)细胞工程;实验方法原理感受态细胞易于接受外来基因成为重组细胞,实验将质粒加入有感受态细胞的培养皿中,热击处理进行质粒转染。实验材料细胞株质粒试剂、试剂盒链霉素青霉素FCSPBS胰酶EDTA转染试剂(Lipofectamine TM2000)胰化蛋白

表达蛋白检测实验_免疫印迹法

实验方法原理当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后,免疫印迹可用于鉴定重组蛋白,并检测其是否有预期的大小以及是否从感染细胞中分泌。下面的步骤是介绍检测非分泌性(细胞内)蛋白的,如果重组蛋白是分泌到培养基中的,可按注解中的步骤操作。实验材料生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞重组痘苗病毒储液试剂、试剂盒完全

表达蛋白检测实验_免疫印迹法

实验方法原理当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后,免疫印迹可用于鉴定重组蛋白,并检测其是否有预期的大小以及是否从感染细胞中分泌。下面的步骤是介绍检测非分泌性(细胞内)蛋白的,如果重组蛋白是分泌到培养基中的,可按注解中的步骤操作。实验材料生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞重组痘苗病毒储液试剂、试剂盒完全

痘苗病毒储液制备——噬斑分析测定滴度

实验方法原理经胰酶作用的系列稀释病毒储液常被用于感染适当的细胞系。经过几天的培养后,吸出培养基,将细胞用结晶紫染色。由于感染细胞变缩、变圆和脱落,形成直径 1~2 mm 颜色较淡的噬斑。实验材料生长良好的贴壁培养的单层 BSC-1 细胞病毒储液试剂、试剂盒0.1% 结晶紫(溶于 20% 乙醇)仪器、

人外周血淋巴细胞的培养及染色体制片实验

实验方法原理外周血是制备动物染色体标本的重要材料之一,但通常情况下哺乳动物的外周血中是没有分裂相的,其他动物如两栖类外周血中也只是偶尔能见到分裂相。外周血中的小淋巴细胞几乎都处于G1期或G0期,在人工离体培养的培养基中加入植物凝集素(photohemagglutinin,PHA)后,小淋巴细胞受刺激

NK细胞活性测定:LDH法

实验方法原理活细胞的胞浆内含有LDH。正常情况下,LDH不能透过细胞膜,当细胞受到NK细胞的杀伤后,LDH释放到细胞外。LDH 可使乳酸锂脱氢,进而使NAD还原成NADH,后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化四氮唑(INT),INT 接受H+被还原成紫红色甲月赞类化合物。在酶标仪上

用克隆环分离细胞克隆

实验方法原理将集落在瓷制克隆环、玻璃环、PTFE 环或者不锈钢环中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一个孔或者直接种于 25 cm2 的培养瓶内。实验材料胰蛋白酶试剂、试剂盒硅油仪器、耗材克隆培养环巴氏吸管生长培养基多孔板无菌镊移液器粗头笔实验步骤1. 观察细胞克隆,用毡制粗头笔

MVA 病毒储液制备实验——免疫染色法滴度测定

实验方法原理MVA 病毒滴度通常是用免疫染色法进行测定,因为 MVA 不能在 CEF 或 BHK-21 细胞中形成噬斑。实验材料CEF 或 BHK-21 细胞MVA病毒储液试剂、试剂盒MEM-10 和 MEM-2.5 完全培养基1:1 丙酮/甲醇PBS(含和不含3% FBS两种)PBS/H2O2兔抗

酵母转化实验_原生质体转化

实验材料酵母试剂、试剂盒YPD山梨醇CaCl2-MEPEG选择性再生琼脂仪器、耗材水浴锅离心机分光光度计培养箱实验步骤1.  在实验前2天,将转化用酵母菌株的单菌落接种到5 ml YPD培养基中,于30℃培养过夜(如果酵母菌株是温度敏感的应在低温下培养)。2.  转化前一天晚上,

蛋白质的Western blot印迹分析

一、原理  一个基因表达的最终产物是产生相应的蛋白,因此检测蛋白是测定基因表达的主要标志。    原理:Western Blotting 是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳,对不同分子量的蛋白质进行分离;并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持

λ噬菌体的局限性转导实验

λ噬菌体是一种温和噬菌体,在大肠杆菌宿主细胞内其DNA可整合在宿主染色体上,如同细菌的基因一样传递给子代细胞,此为溶原状态。在溶原菌中,λ噬菌体有两种选择:①溶原生长:即继续维持其溶原状态;②裂解生长:在某些物理化学等因素的诱导下,λ噬菌体借助宿主细胞的酶系统,开始有序的复制、转录、表达,装配成完整

从正常人和骨关节炎患者关节软骨分离软骨祖细胞实验2

从人滑膜中分离软骨祖细胞、培养、分化实验材料骨关节炎患者全关节置换得到的胫骨滑膜;需要正常组织时使用新鲜的尸体组织试剂、试剂盒DMEM(包含4.5 g L葡萄糖和4 mmol L L-谷氨酰胺)黏附培养基:含100μg ml庆大霉素的DMEM克隆生长培养基:DMEM10% FBS和100μg ml庆

肿瘤细胞原代培养实验——酶消化法

实验方法原理本法是利用成纤维细胞对胶原酶较为敏感的特点,通过消化进行选择。可用0.5mg/ml的胶原酶消化处理,边消化边在倒置显微镜下窥视,当发现成纤维细胞被除掉后,即终止消化;用Hanks洗涤处理一次后,更换新培养液,继续培养,可获纯净肿瘤细胞。如成纤维细胞未被除净,可再次重复。实验材料组织试剂、