荧光定量Western上样量疑惑解答与实际操作案例解析
荧光定量Western Blot，绝对不是上样量越多越好。可靠的Western Blot印迹数据通过加载适当量的样品才能获得。加载过多的蛋白会导致信号饱和或用于检测的荧光基团的自猝灭。那么，您如何知道要加载多少裂解液呢？首先使用BCA或Bradford等蛋白测定方法测量裂解液样品的浓度。一旦知道样品的浓度，便可以确保每种样品的加载量相同。于此同时，您仍然需要一种方法来校准凝胶加载量和转印效率的问题。蛋白印迹定量的最佳方法和新共识是将蛋白进行归一化。许多期刊都接受了总蛋白质归一化（TPN），有些期刊（例如《JBC》）甚至要求作者在Western印迹的定量数据时使用TPN或使用验证过的看家蛋白进行归一化。在下面的实验中，加载了0.2-50µg的HeLa裂解物，以检测靶标蛋白STAT3与内参对照GAPDH和总蛋白膜染色的性能。尽管Total-PVDF膜染色线性最高至50μg裂解物，但这显然不是靶标蛋白STAT3加载的理想上样量，因为信......阅读全文
荧光定量Western上样量疑惑解答与实际操作案例解析
荧光定量Western Blot，绝对不是上样量越多越好。可靠的Western Blot印迹数据通过加载适当量的样品才能获得。加载过多的蛋白会导致信号饱和或用于检测的荧光基团的自猝灭。那么，您如何知道要加载多少裂解液呢？首先使用BCA或Bradford等蛋白测定方法测量裂解液样品的浓度。一旦知道样品
western－blot－怎么保证上样量一致
western blot 要保证上样量一致关键就是保证每个泳道样品的蛋白量一致可以先进行浓度检测，通过浓度检测得出样品总蛋白量。根据总蛋白量调整SDS PAGE的上样体积，保证上样量一致或者先行将SDS PAGE染色，根据条带大小调整上样体积也能保证上样量一致
上样质控和抗体验证用于Western－blot定量
今天的帖子的灵感来自于我和同事在教他们SDS-PAGE和western blot的实验交谈中。 他们对于qRT-PCR（R）和流式细胞术（R）精通，特别关心如何以及为什么使用某些上样质控，还有其它的技术被使用验证，蛋白质表达和抗体特异性的变化。 样品准备和上样质控 理想地，上样质控是多步骤过程的
上样质控和抗体验证用于Western－blot定量
今天的帖子的灵感来自于我和同事在教他们SDS-PAGE和western blot的实验交谈中。 他们对于qRT-PCR（R）和流式细胞术（R）精通，特别关心如何以及为什么使用某些上样质控，还有其它的技术被使用验证，蛋白质表达和抗体特异性的变化。样品准备和上样质控理想地，上样质控是多步骤过程的一部分，
Western－Blot－时，上样量是多少由什么决定
目的蛋白在样品中的含量，如果含量高，那么样品上样量要少一点，避免因条带过亮，印象分子量的确定以及微弱的修饰等。一般细胞裂解液样品，义翘的上样量大致在30µg/泳道。
装柱时如何确定上样液的浓度与上样量
上样量根据树脂饱和吸附量换算，上样液的浓度当然是自己算了
关于种子发芽箱的疑惑解答
1.光照强度可以定制？ 可以，种子发芽箱光照强度可以根据用户的要求定制。每种型号后面的B代表昼夜两个温度、时间段；D代表1-30个温度、时间、光照段，自由组合实验周期显示，光照级别显示。可根据用户要求增加光照强度，光照自动可选。例如：种子发芽可选3500LX；幼苗生长可选5500LX。2.箱体
定量western－blot疑问解答—为什么需要验证抗体？
验证抗体对于结果的一致性和重复性是至关重要的，即确认抗体能特异性识别感兴趣的蛋白，抗体与其他蛋白的交叉反应性情况。在您的论文提交给期刊发表之前，经常需要验证抗体的特异性，但并非所有人都花时间进行验证。或者很多人都认为他们使用抗体进行了免疫共沉淀验证，因而不需要再通过蛋白质印迹进行验证。然而，抗体与抗
定量western－blot疑问解答：为什么需要验证抗体？
验证抗体对于结果的一致性和重复性是至关重要的，即确认抗体能特异性识别感兴趣的蛋白，抗体与其他蛋白的交叉反应性情况。在您的论文提交给期刊发表之前，经常需要验证抗体的特异性，但并非所有人都花时间进行验证。或者很多人都认为他们使用抗体进行了免疫共沉淀验证，因而不需要再通过蛋白质印迹进行验证。然而，抗体与抗
Nature新文章解答干细胞长期疑惑
定位在肠隐窝中的静态细胞是否是干细胞，长期以来存在很大的争议。答案似乎可以说是也可以说不是，这取决于你对于“干细胞”这一术语的定义。 小肠上皮细胞层是哺乳动物机体的自我更新支持者，它的生命周期只有4-5天。结合其特征性的隐窝-绒毛结构，这一上皮细胞成为了研究哺乳动物干细胞的选择模型。肠隐窝
案例分析：临床医生对Ca结果疑惑
钙（Ca）是人体内含量较多的阳离子。其中99%以上存在于骨骼及牙齿，骨骼是体内最大的储钙库，细胞外液Ca在维持正常的神经肌肉应激性、腺体分泌以及一些酶系统的活性，特别是在血凝过程中起着重要作用。血Ca浓度通过骨骼、肾脏和肠道之间进行调节，同时，甲状旁腺素(升高血钙)、降钙素(降低血钙)和1，25-二
如何确认PTLC上样量？
以20cm*20cm*1mm规格为例：若上样带宽是0.5cm，板两边空出0.5cm边际,其中1mm厚的硅胶板负载量不要超过5mg/cm3，上样量约为0.5*19*5=47.5mg，以此类推。
WB上样量应为多少
>这要根据你做的蛋白表达量多少，一般是用DAB显色要50-100μg，用ecl曝光上样量为20-40μg。但根据你蛋白表达量的不同目标蛋白绝对量DAB法至少50pg，ecl法至少20pg。我也用组织作过western，蛋白浓度的确很高。通常我上50-100ug，足够了。如果蛋白浓度太高导致上样过小，
Azure－biosystems－定量Western－Blotting荧光检测优势
荧光检测的优势 精确的western blot蛋白定量，要求在宽泛的范围内信号与蛋白浓度呈现线性变化。 对于化学发光检测方法，虽然灵敏度极高，但由于其原理是酶促反应，信号随时间变化，重复性差。 荧光检测是定量western blot的“金标准”。信号强度与结合在靶标蛋白上的抗体
干货贴之「载量和上样量」
在做层析实验的时候可能时常会遇到一个问题：一次实验可以上多少样品呢？多也不是少也不是，上样多了会造成一部分样品损失或者达不到预期的分离效果，上样少了无法充分使用层析柱还要增加重复实验或者使用更大层析柱，真是件纠结的事情。我们今天要来给大家介绍的就是不同的层析柱应该如何确定上样量。 层析柱上样量由
解析荧光定量PCR常用术语
基线：基线是早期循环的噪点水平，通常在第3和第15循环之间测量，这是因为在此期间还检测不到扩增产物引起的荧光值增加。用于计算基线的循环数量是可以改变的，如果使用高模板量或者靶标基因的表达水平高则循环数量需要减少。设置基线需要查看线性度扩增曲线的荧光数据。设置基线，使得扩增曲线的增长所开始的循环圈数
差示扫描量热仪应用案例解析
差示扫描量热仪应用案例解析 差示扫描量热仪是指在程序温度控制下，测定输入到试样和参比样的热流速率（热功率）差对温度和/或时间关系的技术。通常，DSC曲线以温度或时间为X轴，热流速率差或热功率差为Y轴。精工X-DSC7000为热流型（Heat Flux）DSC。热流型DSC原理：按控制程序改变试
差示扫描量热仪应用案例解析
差示扫描量热仪是指在程序温度控制下，测定输入到试样和参比样的热流速率（热功率）差对温度和/或时间关系的技术。通常，DSC曲线以温度或时间为X轴，热流速率差或热功率差为Y轴。精工X-DSC7000为热流型（Heat Flux）DSC。热流型DSC原理：按控制程序改变试样的温度时，测量由试样和参比样之间
差示扫描量热仪应用案例解析
差示扫描量热仪应用案例解析 差示扫描量热仪是指在程序温度控制下，测定输入到试样和参比样的热流速率（热功率）差对温度和/或时间关系的技术。通常，DSC曲线以温度或时间为X轴，热流速率差或热功率差为Y轴。精工X-DSC7000为热流型（Heat Flux）DSC。热流型DSC原理：按控制程序改
差示扫描量热仪应用案例解析
差示扫描量热仪应用案例解析 差示扫描量热仪是指在程序温度控制下，测定输入到试样和参比样的热流速率（热功率）差对温度和/或时间关系的技术。通常，DSC曲线以温度或时间为X轴，热流速率差或热功率差为Y轴。精工X-DSC7000为热流型（Heat Flux）DSC。热流型DSC原理：按控制程序改变试
制备液相色谱的上样量与什么有关
进样量根据需要而定，一般10ul,20ul。当然跟浓度有关 分析测试百科网乐意为你解答实验中碰到的各种问题，祝你实验顺利，有问题可找我，百度上搜下就有。与你进样器量程有关 与样品浓度,柱子填料的量有关系.柱子体积越大,相对上样量也就大些.只要能够分开就行了.....
制备液相色谱的上样量与什么有关
进样量根据需要而定，一般10ul,20ul。当然跟浓度有关 分析测试百科网乐意为你解答实验中碰到的各种问题，祝你实验顺利，有问题可找我，百度上搜下就有。与你进样器量程有关 与样品浓度,柱子填料的量有关系.柱子体积越大,相对上样量也就大些.只要能够分开就行了.....
制备液相色谱的上样量与什么有关
进样量根据需要而定，一般10ul,20ul。当然跟浓度有关 分析测试百科网乐意为你解答实验中碰到的各种问题，祝你实验顺利，有问题可找我，百度上搜下就有。与你进样器量程有关 与样品浓度,柱子填料的量有关系.柱子体积越大,相对上样量也就大些.只要能够分开就行了.....
Azure－biosystems－定量Western－Blotting荧光检测优势介绍
定量Western Blotting荧光检测的优势精确的western blot蛋白定量，要求在宽泛的范围内信号与蛋白浓度呈现线性变化。对于化学发光检测方法，虽然灵敏度极高，但由于其原理是酶促反应，信号随时间变化，重复性差。荧光检测是定量western blot的“金标准”。信号强度与结合在靶标蛋白
CST抗体－Western－Blot常见问题与解答
1.Problem：高背景（曝光1-30秒后，背景高或无特异性蛋白带） 2.Problem：信号弱（1-30秒的曝光后检测不到信号） 3.Problem：无着色 4.Problem：着色太浅 5.Problem：着色太深 6.
western－blot电泳时内参上样量怎么确定
内参一般是指待测样品中含有的一个表达水平稳定的蛋白质，而不是与待测样品相区分的另外一种样品。楼主所说的内参是否与其他的什么概念混淆了？如果给更具体的信息，我可以继续回答。Marker上样量同两个因素有关，一个是产品本身的浓度，这方面不需要知道确切的浓度，只需要看厂商的推荐用量即可；另一个是胶的性质，
做western上样前样品要混匀吗
Western Blot Quick Guide（以及一天跑完Western的时间规划）前期准备：蛋白已经定量，各样本已经稀释到某固定浓度，已经和SDS loading buffer混合，已经分装好，保存与-20°。头天下午或晚上配胶，分离胶和浓缩胶一起配好，带上梳子，放入潮湿的自封袋内放入4°冰箱
荧光定量PCR体系如何加样？
PCR反应体系中,各试剂加样量是如何确定的，DNA模板怎么提取，PCR体系。这个小小管子里都有什么东西、需要加多少呢？今天一起来看一下关于PCR体系的加样各种问题。 关于体系 PCR技术问世于上世纪80年代。问世之初的PCR体系比较大，动辄以毫升计。现在的PCR体系要精巧多了，总体积可
未央区食品药监局用检测数据解答群众疑惑
群众对所购买的食品有怀疑怎么办？未央区食品药监局以现场抽检的方式，用检测数据给群众吃了一颗“定心丸”。 2017年12月11日，市民白先生反映在某超市购买了一箱婴幼儿奶粉，质疑其质量安全，要求食药部门给予解决处理。接到投诉后，未央区食品药监局张家堡所执法人员第一时间联系了白先生，同时对该超市进
解答CRISPR基因编辑疑惑：为何有时有效，有时无效？
伊利诺伊大学芝加哥分校的研究人员第一次指出了为什么CRISPR基因编辑有时无法生效，以及如何能帮助这一过程更为有效。 CRISPR是一种大热的基因编辑工具，它能帮助科学家们从DNA中切除不需要的基因或遗传物质，有时还可以添加上所需的序列。CRISPR使用的是一种名为Cas9的酶，它像剪刀一样切