体外哺乳类细胞微核试验原理及注意事项(二)
4) 阳性对照阳性对照物包括染色体断裂剂和非整倍体剂。加S9时,断裂剂可以选用环磷酰胺和苯并(a)芘;不加S9时,断裂剂可以选用阿糖胞苷、丝裂霉素C、甲磺酸甲酯和4-硝基喹啉;非整倍体剂只用于不加S9时,可以选用秋水仙素和长春新碱。如果短期处理试验方案在S9存在和不存在两种条件下都选用断裂剂作为阳性对照,那么长期处理试验方案应该选用非整倍体剂作为阳性对照。如果选用的细胞本身具有代谢能力,则不需要另外添加S9,阳性对照应该同时使用断裂剂和非整倍体剂。5) 阴性对照溶媒必须是非致突变物,不与受试物发生化学反应,不影响组胞存活和S9活性。首选溶媒是培养液(不含血清)或水。使用水作为溶媒时其体积不应大于总体积的10%。DMSO也是常用溶媒,但终浓度不应大于1%。6) 空白对照如果没有文献资料或历史资料证实所用溶媒无致突变作用时应设空白对照。2.5试验步骤1) 细胞准备将一定数量的细胞接种于培养皿(瓶)中,以收获细胞时,培养皿(瓶)的细胞......阅读全文
体外哺乳类细胞微核试验原理及注意事项(二)
4) 阳性对照阳性对照物包括染色体断裂剂和非整倍体剂。加S9时,断裂剂可以选用环磷酰胺和苯并(a)芘;不加S9时,断裂剂可以选用阿糖胞苷、丝裂霉素C、甲磺酸甲酯和4-硝基喹啉;非整倍体剂只用于不加S9时,可以选用秋水仙素和长春新碱。如果短期处理试验方案在S9存在和不存在两种条件下都选用断裂剂作为阳性
体外哺乳类细胞微核试验原理及注意事项
微核试验是遗传毒性研究标准组合试验之一,在食品,化学品,药品,农药,饮用水等多类产品的遗传毒性评价方面得到广泛应用。与体内实验相比,体外微核试验更加简单快速,避免动物个体差异影响,灵敏度高。体外微核试验主要包括体外哺乳类细胞微核试验,人外周血淋巴细胞微核试验,肝原代细胞微核试验等类别。体外哺乳类细胞
体外哺乳类细胞微核试验原理及注意事项(一)
微核试验是遗传毒性研究标准组合试验之一,在食品,化学品,药品,农药,饮用水等多类产品的遗传毒性评价方面得到广泛应用。与体内实验相比,体外微核试验更加简单快速,避免动物个体差异影响,灵敏度高。体外微核试验主要包括体外哺乳类细胞微核试验,人外周血淋巴细胞微核试验,肝原代细胞微核试验等类别。体外哺乳类细胞
体外哺乳类细胞基因突变(HGPRT)试验原理及注意事项
体外哺乳动物细胞基因突变试验是利用培养的哺乳动物细胞作指示生物的体外遗传毒理学试验,可用于检测有化学物质诱导的基因突变,适用的细胞系包括小鼠淋巴瘤细胞(L5178Y),中国仓鼠肺细胞(V79),中国仓鼠卵巢细胞(CHO),人类淋巴母细胞(TK6)等。这些细胞系,常用的遗传学终点是检测胸苷激酶(TK)
体外哺乳类细胞基因突变(HGPRT)试验原理及注意事项3
结果评价:阳性结果的判定:受试物组在任何一个剂量条件下的突变频率为阴性(溶媒)对照组的3倍或3倍以上,可判定为阳性。受试物组的突变频率增加,与阴性(溶媒)对照组比较具有统计学意义,并有剂量-反应趋势,则可判定为阳性。受试物组在任何一个剂量条件下引起具有统计学意义的增加并有可重复性,则可判定为阳性。阴
体外哺乳类细胞基因突变(HGPRT)试验原理及注意事项1
In vitro Mammalian Cell Gene Mutation Test【试验原理】体外哺乳动物细胞基因突变试验是利用培养的哺乳动物细胞作指示生物的体外遗传毒理学试验,可用于检测有化学物质诱导的基因突变,适用的细胞系包括小鼠淋巴瘤细胞(L5178Y),中国仓鼠肺细胞(V79),中国仓鼠卵
体外哺乳类细胞基因突变(HGPRT)试验原理及注意事项2
三、试验步骤和观察指标贴壁生长细胞的试验步骤和观察指标:1、细胞准备:将5×105 个细胞接种于直径为10 mm平皿中,于37℃、5%二氧化碳培养箱中培养24h。2、接触受试物:吸去培养液,PBS洗两次,加人一定量的无血清培养液、一定浓度的受试物及S9混合物(无需代谢活化者用无血清培养液补足),置于
小鼠骨髓细胞微核试验
微核试验可以用于:染色体损伤和干扰细胞有丝分裂的化学毒物的快速检测方法。实验方法原理微核试验是用于染色体损伤和干扰细胞有丝分裂的化学毒物的快速检测方法。微核是指存在于细胞中主核之外的一种颗粒,大小相当于细胞直径的1/20~1/5,呈圆形或杏仁状,其染色与细胞核一致,在间期细胞中可以出现一个或多个。一
小鼠骨髓细胞微核试验
实验方法原理 微核试验是用于染色体损伤和干扰细胞有丝分裂的化学毒物的快速检测方法。微核是指存在于细胞中主核之外的一种颗粒,大小相当于细胞直径的1/20~1/5,呈圆形或杏仁状,其染色与细胞核一致,在间期细胞中可以出现一个或多个。一般认为微核是
小鼠骨髓细胞微核试验
原理>微核试验是用于染色体损伤和干扰细胞有丝分裂的化学毒物的快速检测方法。微核是指存在于细胞中主核之外的一种颗粒,大小相当于细胞直径的1/20~1/5,呈圆形或杏仁状,其染色与细胞核一致,在间期细胞中可以出现一个或多个。一般认为微核是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有丝分裂后期滞留在细胞核外的
体外哺乳类细胞(V79/HGPRT)基因突变试验
- 中华仓鼠肺细胞染色体突变实验药物毒理体外经典实验。国家都有标准了就可以想象重要性了。自己做了一个PDF文件,方便大家收藏。中华人民共和国国家标准GB 15193.12一91体外哺乳类细胞(V79/HGPRT)基因突变试验V79/HGPRT gene mutation test----------
微载体细胞培养技术及应用原理(二)
5.微载体培养操作要点• 培养初期:保证培养基与微球体处于稳定的PH与温度水平,接种细胞(对数生长期,而非稳定期)至终体积1/3的培养液中,以增加细胞与微载体接触的机会。不同的微载体所用浓度及接种细胞密度是不同的。常使用2-3g/L的微载体含量,更高的微载体浓度需要控制环境或经常换液。• 贴壁阶
体内哺乳动物骨髓细胞微核试验2
7.31/15mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)成分:磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 19.077g磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.814g加蒸馏水至 1000mL配制:将上述两种成分溶于蒸馏水中。以pH试纸检验pH值。7.4Giemsa应用液取一份Giemsa染液与6份1/15mol/
体内哺乳动物骨髓细胞微核试验1
1范围本规范规定了哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验的基本原则、要求和方法。本规范适用于化妆品原料的染色体畸变检测。2规范性引用文件GB 14924实验动物与饲料标准OECD Guidelines for Testing of Chemicals(No.481,Adopted:21,July 1997
关于微核试验的基本介绍
经致突变物作用后,染色体无着丝点断片或因纺锤体受损伤而丢失的整个染色体在细胞分裂的后期仍留在子细胞的胞质内,成为一个或几个规则的次核,称为微核。常用啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验。PCE是红细胞成熟的一个阶段,此时红细胞的主核已排出,微核容易辩认,PCE胞质含RNA染色与成熟红细胞
微流控技术原理及发展史(二)
5.显影用光胶配套显影液通过化学方法除去经曝光的光胶(正光胶)或未经曝光的光胶(负光胶),显影液和显影时间的选择对显影效果的影响很大。选择显影液的原则是,对需要去除的那部分胶膜溶解度大、溶解速度快,对需要保留的那部分溶解度小。显影时间视光致抗蚀剂的种类、胶膜厚度、显影液种类、显影温度和操作方法而异。
《食品毒理学评价程序及方法标准清理建议》公开征求意见
根据《食品安全法》及其实施条例规定和《食品安全国家标准“十二五”规划》要求,我委制定公布了《食品标准清理工作方案》,成立食品标准清理领导小组和专家组,对现行食用农产品质量安全标准、食品卫生标准、食品质量标准和有关食品的行业标准中强制执行的标准进行清理。食品标准清理工作分为食品产品、理化检验方法、
合适的小鼠胚胎干细胞胞质分裂阻断微核试验CBMn分析
实验概要观察表明,加入细胞松弛素-B到小鼠胚胎干细胞(mESC)的培养诱导细胞凋亡作CBMn分析。另一方面,加入 cyt-B是(CBMn)技术的最关键的部分。因此,改变传统CBMn分析方法是必要的。在本实验中,我们试图解决这个问题。研究表明,CBMn可作为一个可靠的工具用于胚胎干细胞研究,特
彗星试验原理及注意事项(二)
样本制备:在最后一次用测试化学品后的适当时间,对动物实施安乐死。收集选定的组织,而同时采集同一组织的一部分,放置在甲醛溶液或适当的固定剂可能组织病理学分析。彗星实验的组织被放置在切碎缓冲液中,用冷切碎缓冲液充分冲洗以去除残留的血液,并储存在冰冷的切碎缓冲液中,直到处理完毕。原位灌注也可进行,如肝、肾
彗星试验原理及注意事项(二)
彗星试验试剂盒北京汇智泰康针对碱性彗星试验开发彗星试验试剂盒,本试剂盒提供了彗星试验(单细胞凝胶电泳试验)需要的主要试剂盒耗材,省去了细胞裂解液、细胞悬液、碱性电泳液、电溶胶配制等时间,可以直接使用,大大缩短了实验周期;试剂盒各成分均经过严格的质量检测和多次试验验证,符合碱性彗星试验要求,实验结果准
微载体细胞培养技术及应用原理
微载体细胞培养技术是细胞培养过程中常见的一种细胞培养技术。关于微载体细胞培养技术,以动物细胞为例,具体介绍如下: 一、微载体培养技术的应用 微载体培养技术于1967年被用于动物细胞大规模培养。经过三十余年的发展,该技术目前已渐日趋完善和成熟,并广泛应用于生产疫苗、基因工程产品等。
简述苯并芘的致突变性的危害
所谓的致突变性是环境中某些外界因素在一定条件下引起机体的遗传物质发生突然的根本的变异性能。这种突变造成遗传物质复制错乱,有时可引起形态和结构及功能的改变,导致遗传缺陷和疾病。常用的化学物致突变方法有细菌回复突变试验、鼠伤寒沙门菌回变试验 (Ames 试验)、微核试验、染色体畸变试验和程序外DNA
关于检测染色体和染色体组畸变—微核试验的基本介绍
传统的体内微核试验仍然是检测化学物质染色体损伤的基本方法。目前微核试验方法主要有以下改进:1体外微核试验 常用细胞有中国仓鼠肺细胞(CHL)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)及中国仓鼠成纤维细胞(V79)等,近年开始有用L5178Y小鼠淋巴瘤细胞和人的类成淋巴细胞TK6。也有用叙利亚仓鼠胚胎(SHE
微载体细胞培养技术及应用原理(一)
微载体细胞培养技术是细胞培养过程中常见的一种细胞培养技术。关于微载体细胞培养技术,以动物细胞为例,具体介绍如下: 一、微载体培养技术的应用微载体培养技术于1967年被用于动物细胞大规模培养。经过三十余年的发展,该技术目前已渐日趋完善和成熟,并广泛应用于生产疫苗、基因工程产品等。微载体培养是目前公认的
微流控与体外诊断
(一)体外诊断(In vitro diagnosis, IVD),顾名思义,主要是指对人体的血液、体液、组织等进行检测而获得临床信息的产品或服务。在我国,由于:1.人口老龄化日渐严重;2.传染病慢性病日渐流行;3.城市化进程中对医疗健康行业需求的剧增;4.政府对医疗保健市场的大力支持;5.医院药
微流控与体外诊断
(一)体外诊断(In vitro diagnosis, IVD),顾名思义,主要是指对人体的血液、体液、组织等进行检测而获得临床信息的产品或服务。在我国,由于:1.人口老龄化日渐严重;2.传染病慢性病日渐流行;3.城市化进程中对医疗健康行业需求的剧增;4.政府对医疗保健市场的大力支持;5.医院药
微流控与体外诊断
(一)体外诊断(In vitro diagnosis, IVD),顾名思义,主要是指对人体的血液、体液、组织等进行检测而获得临床信息的产品或服务。在我国,由于:1.人口老龄化日渐严重;2.传染病慢性病日渐流行;3.城市化进程中对医疗健康行业需求的剧增;4.政府对医疗保健市场的大力支持;5.医院药品加
基于人类多功能干细胞的微流体体外培养模型
密西根大学傅剑平教授团队设计了一种基于人类多功能干细胞的微流体体外培养模型。在该模型中,人类多功能干细胞可以非常近似的模拟人类胚胎着床早期的若干关键阶段的发育,并且具有高度的可控性及重复性。相关研究结果发表在Nature杂志,论文标题为“Controlled modelling of human
体外诊断的“光学法”种类及应用(二)
3、光致发光(photoluminescence),也就是我们常说的荧光,是指发光剂(荧光素)经短波长的入射光照射后,电子吸收能量跃迁到激发态,在其回复至基态时,发射出较长波长的可见光(荧光)。像经常听到的实时荧光PCR、流式细胞分析仪、时间分辨免疫荧光、生物芯片扫描仪就用到这种方法。利用免疫学、基
非洲爪蟾卵母细胞体外翻译系统(二)
(二)外源 mRNA 在非洲爪蟾卵母细胞提取物中的翻译1) 室温融化冻存的提取物,然后即置于冰上。2) 同时,应将用于翻译的 mRNA 分装于 0.5 ml 或 1.5 ml 离心管中,置于冰上3) 每 100ul 提取物应分別加入以下各成分:10ul 网织红细胞裂解液 S-100,1ul120