WesternBlot实验中封闭液的选择
封闭是Western Blot 至关重要的一部分， 所以正确的封闭液选择可以让抗体更特异地和抗原结合，为成功的WB奠定基础。虽然这个步骤操作简单，但是封闭液的选择确是很多科研人员的难题。为了让大家更方便的选择适合自己实验的封闭液，这里给大家介绍6种不同的封闭液，以及它们的优缺点。1、脱脂奶粉最好买的封闭剂就属脱脂奶粉了。无论是从化学制品公司还是从超市购买，都可以直接拿来使用。通常封闭液的浓度为 2.5-5% （w/v）。但值得注意的是，脱脂奶粉是许多种蛋白质的混合物，其中含有酪蛋白，是一种磷蛋白。如果你的目标蛋白是磷蛋白的话，千万不要选择脱脂奶粉，否则会有很多背景信号。即使你的目标蛋白不是磷蛋白，因为是蛋白质的混合物，所以也容易产生较高的背景信号。2、牛血清白蛋白(BSA)牛血清白蛋白是从牛血清中提纯之后的一种球蛋白，是除了脱脂奶粉之外，非常常用的封闭剂。通常含有BSA的封闭液的浓度为2-5%（w/v）。但大家也可 ......阅读全文
western－blot实验中印迹膜和凝胶出现的问题及解决方案
Western blot是生物化学和免疫遗传学中常用的一种蛋白分析方法，其技术环节多，操作时间长，哪一步出现问题，都会影响最后的结果，今天小编总结了WB中印迹膜和凝胶中出现的问题及解决方案，希望可以帮助在WB中苦恼的小伙伴。 问题：波浪式的环绕条带 引起原因：转印不均匀 解决方
酶标板如何处理，增加抗体结合能力？
根据酶标板与蛋白和其它分子结合能力的不同可以将酶标板分为以下几类： 1 高结合力酶标板：酶标板经表面处理后蛋白结合能力大大增强，可达300~400ng IgG/cm2，主要结合的蛋白分子量＞10kD。使用该类酶标板可提高敏感性，并可相对减少包被蛋白的浓度和用量，不足之处为较易产生非特异性反应。抗
实验中使用汞时的注意事项
使用汞时的注意事项①使用汞工作时，不许用薄壁玻璃容器和一些薄壁管。因为汞的密度大，这些薄壁玻璃容器和管子不够坚实极易损坏，使汞洒出和泼溅以致难以收拾。即使是厚壁的，如果注入汞过分迅速也能将它打碎。因此向管内或容器注入汞时应该使用特制的、坚实的、具有长端的漏斗。向高形器皿内注入汞时，最好使器皿略略倾斜
原代细胞免疫荧光鉴定步骤
为了更好的帮助客户提供真实的原代细胞，使用免疫荧光鉴定出提取的细胞类型，免疫荧光技术又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。 一下是赛百慷技术人员提供的免疫荧光细胞鉴定的步骤，仅做
中结合力酶标板的基本介绍
酶标板经表面疏水键被动与白结合，适合作为分子量20D的大分子蛋白的固相载体，其蛋白结合能力为200－300 ng 1gG/cm2。由于该类酶标板所具有的仅与大分子结合的特性，适用于作为未纯化抗体或抗原的固相载体，可降低潜在的非特异性交又反应。该类板可以惰性蛋白或非离子去污剂作为封闭液。
中结合力酶标板
酶标板经表面疏水键被动与白结合，适合作为分子量20D的大分子蛋白的固相载体，其蛋白结合能力为200－300 ng 1gG/cm2。由于该类酶标板所具有的仅与大分子结合的特性，适用于作为未纯化抗体或抗原的固相载体，可降低潜在的非特异性交又反应。该类板可以惰性蛋白或非离子去污剂作为封闭液
IHC－实验操作步骤
免疫组化方法（石蜡切片）*重要提示：参考抗体说明书选用合适的抗体稀释液和抗原修复处理方法。IHC 方法：抗原修复缓冲液/抗体稀释液A. 所需溶液和试剂1. 二甲苯2. 无水乙醇（100% 和 95%，变性无水乙醇，组织学级）3. 去离
免疫荧光染色的一抗，二抗分别用什么稀释
PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释，再加一点TritonX100效果好。培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了，用培养液没什么意义，只要保证其pH等条件适合就好了。抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下，有很多protocol。一般一比几百到一万都有，依抗体而定。可以4度过夜，这样染色效果
免疫荧光染色的一抗，二抗分别用什么稀释
PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释，再加一点TritonX100效果好。培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了，用培养液没什么意义，只要保证其pH等条件适合就好了。抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下，有很多protocol。一般一比几百到一万都有，依抗体而定。可以4度过夜，这样染色效果
免疫荧光染色的一抗，二抗分别用什么稀释
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免疫荧光的一抗核二抗分别用什么稀释
PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释，再加一点TritonX100效果好。培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了，用培养液没什么意义，只要保证其pH等条件适合就好了。抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下，有很多protocol。一般一比几百到一万都有，依抗体而定。可以4度过夜，这样染色效果
western－glut4一抗,二抗怎么配置
配制抗体的时候有两样东西比较关键：溶解抗体的溶液或稀释液，通常如果只是溶解抗体，可能会建议用PBS或者TBS，提供中性环境，以帮助抗体的保存。如果已经是液体，只是需要稀释做实验的话，一般会用封闭液（BSA溶液，脱脂奶粉，注脱脂奶粉稀释后的抗体无法再次使用），或者是洗液（TBST或PBST）。抗体的浓
免疫荧光染色的一抗，二抗分别用什么稀释
PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释，再加一点TritonX100效果好。培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了，用培养液没什么意义，只要保证其pH等条件适合就好了。抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下，有很多protocol。一般一比几百到一万都有，依抗体而定。可以4度过夜，这样染色效果
免疫荧光染色的一抗，二抗分别用什么稀释
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免疫荧光染色的一抗，二抗分别用什么稀释
PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释，再加一点TritonX100效果好。培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了，用培养液没什么意义，只要保证其pH等条件适合就好了。抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下，有很多protocol。一般一比几百到一万都有，依抗体而定。可以4度过夜，这样染色效果
Vilber－实用技巧磷酸化蛋白检测小妙招
蛋白质磷酸化是一种非常重要且广泛存在于原核生物和真核生物中的翻译后修饰调控方式,参与细胞的增殖、发育、分化、凋亡,细胞骨架调控、神经活动、肌肉收缩、新陈代谢及肿瘤发生等,对许多生物的细胞功能起着生物“开/关”作用。 蛋白质磷酸化指由蛋白质激酶催化的把ATP的磷酸基转移到底物蛋白质氨基酸残基
Vilber－实用技巧磷酸化蛋白检测小妙招
蛋白质磷酸化是一种非常重要且广泛存在于原核生物和真核生物中的翻译后修饰调控方式,参与细胞的增殖、发育、分化、凋亡,细胞骨架调控、神经活动、肌肉收缩、新陈代谢及肿瘤发生等,对许多生物的细胞功能起着生物“开/关”作用。蛋白质磷酸化指由蛋白质激酶催化的把ATP的磷酸基转移到底物蛋白质氨基酸残基（丝氨酸、苏
免疫学技术专题：斑点金免疫渗滤测定法（DIGFA）
基本原理斑点金免疫渗滤测定法是在斑点免疫渗滤测定法基础上，改用胶体金标记物代替酶，省去底物显色的步骤。试验方法是以硝酸纤维素膜（NC膜）为载体，将试剂及标本滴加在膜上，通过渗滤而逐步反应。全过程可于数分钟内完成，阳性结果在膜上呈红色斑点。试剂及材料1. 渗滤装置：为一塑料小盒（4x3x0.6cm
大鼠ELISA试剂盒的抗原包被
大鼠ELISA试剂盒检测系统可谓是免疫学反应应用到科研出产中zui为广泛zui为敏捷的技术手段。自己也为此苦恼过很长一段时间，跟着自己技术水平得进步，或多或少地也把握了ELISA体系的脾气，也是熟能生巧吧，现在做方阵，做大鼠ELISA试剂盒已是轻车熟路了，以前检测一种抗体用整整一下战书还算得晕晕的，
酶标抗体和酶抗酶复合物的应用于双抗体夹心法ELISA
该法多用于检测多价大分子抗原，但不能用于检测半抗原等小分子物质。 【试剂及配制】 （1） 包被液（pH 9.6 碳酸盐缓冲液） Na2CO3 0.16g NaHCO3 0.29g 蒸馏水加至 100ml (2)稀释液(pH 7.4 -Tween 20) KH2PO4 0.
Western杂交
实验概要本实验介绍了Western杂交的基本流程。主要试剂液氮，提取缓冲液(1 x PBS，10ug/mL Leupeptin，1 mM PMSF，5 mMBenzamidine. 2mM EDTA)，转移缓冲液(39mM Glycine，48mM Tris，0.037% SDS，20%甲醇)，
Western杂交
实验概要本实验介绍了Western杂交的基本流程。主要试剂液氮，提取缓冲液(1 x PBS，10ug/mL Leupeptin，1 mM PMSF，5 mMBenzamidine. 2mM EDTA)，转移缓冲液(39mM Glycine，48mM Tris，0.037% SDS，20%甲醇)，
二手液相检测器实验的运用保养
检测器是液相色谱系统的“眼睛”，测量脱离柱的样品的浓度或质量。光电检测器测量柱流出物的光吸收、荧光和折光率的改动。电化学和电导检测器溶液的改动。特殊的样品用特殊的检测器。不合适的检测器测得的成果也不可靠。二手液相检测器实验的运用保养:1.检测器对含盐类活动相比较敏感，不要让仪器里有 盐类、粘度大的样
免疫组化染色方法（SP法和SABC法）
SP法1）脱蜡、水化；2）PBS洗2～3次各5分钟；3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在TMA上，室温静置10分钟；4）PBS洗2～3次各5分钟； 5）抗原修复；6）PBS洗2～3次各5分钟；7）滴加正常山羊血清封闭液,室温20分钟。甩去多余液体。8）滴加Ⅰ抗50μl，室温静置1小时或者4℃过夜或者
Western－Blot详解－常见的问题指南（三）
6. 染色的选择OO. Western Blot哪种染色好？解答：（1）阴离子染料是最常用的，特别是氨基黑，脱色快，背景低检测极限可达到1.5μg，考马虽然与氨基黑有相同的灵敏度，但脱色慢，背景高。丽春红S和快绿在检测后容易从蛋白质中除去 ，以便进行随后的氨基酸分析。缺点是：溶剂系统的甲醇会引起硝化
用微波消化原子荧光分光光度法快速检测食品中的汞
用微波消化原子荧光分光光度法快速检测视频中的汞 （1）基本概念 别试品经酸升温消化后，在酸碱度化学物质中，别试品溶液中的汞与硼氢化钾或硼氢化钠（NaBH4）体现在氢化物造成系统中转换成分子结构态汞蒸气: KBH4＋3H2O＋H＋=H3BO3＋K＋＋8H（新生态环保氢） 8H＋H
蛋白质印迹法实验结果没有阳性条带或条带很弱的原因
①目的蛋白质未充分转移到膜上或洗膜过度，应使用丽春红S染色以检查转膜效果，或减少洗膜次数，缩短洗膜时间；②抗体不匹配或一抗过期或一抗不能识别变性或还原的蛋白质，应注意选择特异性的抗体并在有效期内使用，或改用非变性凝胶系统；③抗体浓度低，应适当增加抗体浓度，或延长孵育时间；④样品中的目的蛋白质含量低或
红外光谱仪处理液体和溶液试样
（1）液体池法 对于沸点较低挥发性较大的试样，将液层厚度为0.01~1mm注入封闭液体池中即可。 （2）液膜法 沸点较高的试样，直接滴在两片盐片之间，形成液膜。对于一些吸收很强的液体，可以样品调整厚度，仍然得不到满意的谱图时，则可适当配成稀溶液进行测定。一些固体也可以溶液
生化实验室15大常识
1.在重蒸酚中为什么加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇? 保存在冰箱中的酚，容易被空气氧化而变成粉红色，这样的酚容易降解DNA，一般不可以使用。为了防止酚的氧化，可加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇。8-羟基喹啉是带有淡黄色的固体粉沫，不仅能抗氧化，并在一定程度上能抑制DN
实验室常识
1.在重蒸酚中为什么加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇？ 保存在冰箱中的酚，容易被空气氧化而变成粉红色，这样的酚容易降解DNA，一般不可以使用。为了防止酚的氧化，可加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇。8-羟基喹啉是带有淡黄色的固体粉沫，不仅能抗氧化，并在一定程度上能抑制DNase