IHC实验操作步骤
免疫组化方法(石蜡切片)*重要提示:参考抗体说明书选用合适的抗体稀释液和抗原修复处理方法。IHC 方法:抗原修复缓冲液/抗体稀释液A. 所需溶液和试剂1. 二甲苯2. 无水乙醇(100% 和 95%,变性无水乙醇,组织学级)3. 去离子水(dH2O)4. 苏木精(可选)5. 漂洗(缓冲)液:1X TBS/0.1% Tween-20 (1X TBST):配制时,取 100 ml 10X TBS 加 900 ml 水稀释至 1 升。加入 1 ml Tween-20,混匀。10X Tris 缓冲盐水 (10X TBS):在 800 ml 蒸馏水中加入 24.2 g 三羟甲基氨基甲烷(Trizma base, C4 H11NO3)和 80 g 氯化钠(NaCl)。用浓盐酸将 pH 调节到 7.......阅读全文
IHC-frozen-sections...
实验概要 The method provides a guideline procedure and tips for staining of frozen sections. 实验步骤 Frozen sections: Once mounted on APES coated slides,
IHC-增敏实验
实验方法原理 滚动式循环放大(rolling circle amplification;RCA)法是一种能够在恒温条件下,使标记有寡核苷酸探针(与组织细胞内的核苷酸无相关性)的抗体(特异性一抗或第二抗)与组织细胞内的抗原结合后,在 DNA 聚合酶的作用下,加入的寡核苷酸进行循环扩增,产生
IHC-Protocol-for-Fr...
实验概要The method provides a IHC protocol for free floating brain sections.实验步骤1. Coronal 30-40 µm sections cut on a freezing microtome. Sections colle
IHC石蜡技术
实验概要免疫组织化学 (IHC) 是确定组织切片上是否存在蛋白及其位置的一种方法。尽管这种方法在定量分析时灵敏度较免疫印迹法或 ELISA 等免疫测定方法低,但它能了解整个组织的情况。适用于癌症等疾病发展及治疗情况的评估。因此,从 IHC 获得的信 息结合显微技术提供了一副“宏图”,使来自其它
IHC石蜡技术
实验概要免疫组织化学 (IHC) 是确定组织切片上是否存在蛋白及其位置的一种方法。尽管这种方法在定量分析时灵敏度较免疫印迹法或 ELISA 等免疫测定方法低,但它能了解整个组织的情况。适用于癌症等疾病发展及治疗情况的评估。因此,从 IHC 获得的信 息结合显微技术提供了一副“宏图”,使来自其它
IHC-实验操作步骤
免疫组化方法(石蜡切片)*重要提示:参考抗体说明书选用合适的抗体稀释液和抗原修复处理方法。IHC 方法:抗原修复缓冲液/抗体稀释液A. 所需溶液和试剂1. 二甲苯2. 无水乙醇(100% 和 95%,变性无水乙醇,组织学级)3. 去离
图说鲜肉IHC/ICC晋级攻略
西土有一名寺,昂迪·赛司腾姆寺,有大师。一日,来了一位东土小鲜肉。鲜肉问大师:“学业有惑,可解?”大师反问:“你术业可是生物?”鲜肉惊奇:“是,大师神奇,何以得知?”大师指鲜肉鞋履:“鞋上两块蓝斑,乃考马斯亮蓝,其渍尚新,你近来必在捣弄蛋白,对否?”鲜肉羞赧:“正是近日检测蛋白,跑胶无数,不慎滴上。
IHC原理、操作及注意事项
免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)是利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的一项技术。IHC的实验流程和方法总体不难,但做出漂亮的染色结果却不容易,
IHC,ELISA,WB实验之间的区别
免疫组化、Western、ELISA,是免疫学三大常用工具,分别用于定位,定性和定量。那么,我们今天就来说说这三者之间的差别以及其具体使用的场景。1、IHC中文名称:免疫组化英文名称:Immunohistochemistry简介:是融合了免疫学原理(抗原抗体特异性结合)和组织学技术(组织的取材、固定
原位免疫PCR的IHC增敏方法
(一)基本原理 Sano等(1992)率先利用基因工程的方法表达了A蛋白与链霉亲和素的嵌合体分子获得成功,建立了免疫PCR技术。这是一种新的抗原检测系统,利用细胞工程和基因工程技术,巧妙地将抗原抗体反应的特异性同PCR的敏感性相结合,通过构建单克隆抗体与重组核酸的嵌合体分子,使得利用PCR技术检
IHC全攻略2:如何制备样品
对于每一项IHC/ICC研究,组织和细胞样本的制备都不可掉以轻心。为了方便孵育,整个组织必须被切成超薄(5-10 μm)的切片,或切成小块用于整体免疫组化(whole mount IHC)。对于ICC实验,在开始染色步骤之前,细胞必须附着在显微镜载玻片或盖玻片上。样本制备也与固定方法密切
IHC-增敏实验——滚动循环放大法
实验方法原理滚动式循环放大(rolling circle amplification;RCA)法是一种能够在恒温条件下,使标记有寡核苷酸探针(与组织细胞内的核苷酸无相关性)的抗体(特异性一抗或第二抗)与组织细胞内的抗原结合后,在 DNA 聚合酶的作用下,加入的寡核苷酸进行循环扩增,产生一条扩增的 D
IHC免疫组化常见问题分析
分析一下免疫组化实验中一些常见的问题和解决措施: 常见问题一:所有切片呈阴性 原因分析:a.缓冲液内含叠氮化钠,抑制酶的活性; b.染色未完全按照操作步骤进行; c.漏加一种抗体或抗体失活; d.复染或脱水剂使用不当; e.底物中加入的过氧化氢少或失活。
IHC全攻略3:固定剂的选择
IHC/ICC实验中使用的所有样本必须经过固定,以维持组织形态,并保留目的分子的抗原性。固定改变了组织的化学组成,因此往往需要在维持组织结构和保留表位之间进行折衷。细胞或组织的不完全固定(固定不足)可能造成组织内目的蛋白的快速水解,并降低了特异的免疫反应性。然而,过度的固定(固定过度)可能导致表
IHC全攻略6:抗原修复方法
尽管固定对于组织形态的保留是必不可少的,但这一过程对IHC/ICC检测也有不良影响。固定可能会改变蛋白的生化特性,如目的表位被掩盖,或不再与一抗结合。表位的掩盖可能是由氨基酸与表位的交联、表位附近无关肽段的交联、表位构象的改变或抗原静电荷的改变引起的。抗原修复指的是逆转表位掩盖和恢复表位-抗体结
关于IHC检验的分析验证原则的指南推荐
日前,美国 CAP2014 年会上,美国病理家学会及实验室质量中心发布了一项关于 IHC 检验的分析验证原则的指南推荐(Principles of Analytic Validation of Immunohistochemical Assays),原文发表于近期 Arch Pathol Lab M
IHC/ICC/IF实验前需要知道的几个要点~!
IHC/ICC/IF ,傻傻分不清楚?它们都是用于定位检测抗原表达的免疫检测技术,由于技术相对简单且直观,在科研和临床上都得到了大量使用。但是影响最终检测效果的变量非常多;每一个具体的检测都会遇到多个需要调整的变量。具体到选择何种方法来保存组织样本;固定标本该用醇还是醛;如何选择最合适的一抗;抗
IHC/ICC/IF实验前需要知道的几个要点
IHC/ICC/IF ,傻傻分不清楚?它们都是用于定位检测抗原表达的免疫检测技术,由于技术相对简单且直观,在科研和临床上都得到了大量使用。但是影响最终检测效果的变量非常多;每一个具体的检测都会遇到多个需要调整的变量。具体到选择何种方法来保存组织样本;固定标本该用醇还是醛;如何选择最合适的一抗;抗原修
βTubulin抗体—做出漂亮WB和IHC图片的内参
Tubulin即微管蛋白,是细胞的一种骨架蛋白。Tubulin分为α、β、γ、δ、ε等多种tubulin,其中α-Tubulin和β-Tubulin可以形成异源二聚体,是形成微管的最主要的两种Tubulin。α-tubulin和β-tubulin分子量分别为55kDa和50kDa,其实际检测条带均在
滚动式循环放大(RCA)法IHC增敏方法
滚动式循环放大(RCA)法是一种能够在恒温条件下,使标记有寡核苷酸探针(与组织细胞内的核苷酸无相关性)的抗体(特异性一抗或第二抗)与组织细胞内的抗原结合后,在DNA聚合酶的作用下,加入的寡核苷酸进行循环扩增,产生一条扩增的DNA序列拷贝产物,此时,标记在抗体上的寡核苷酸得到有效扩增(109倍),扩增
原位免疫PCR的IHC增敏方法原理和操作流程
(一)基本原理Sano等(1992)率先利用基因工程的方法表达了A蛋白与链霉亲和素的嵌合体分子获得成功,建立了免疫PCR技术。这是一种新的抗原检测系统,利用细胞工程和基因工程技术,巧妙地将抗原抗体反应的特异性同PCR的敏感性相结合,通过构建单克隆抗体与重组核酸的嵌合体分子,使得利用PCR技术检测蛋白
免疫组化(ICC)原理和IHC/ICC实验方法2
3、操作流程(1)脱蜡和水化脱蜡前,应将组织芯片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟。1)组织芯片置于二甲苯中浸泡10分钟,更换二甲苯后再浸泡10分钟;2)无水乙醇中浸泡5分钟;3)95%乙醇中浸泡5分钟;4)70%乙醇中浸泡5分钟;(2)抗原修复用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片。1)
免疫组化(ICC)原理和IHC/ICC实验方法1
一、免疫组化(Immunohistochemistry,IHC/ Immunocytochemistry, ICC)原理免疫组化是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋
锐赛小课堂:关于IHC检验的分析验证原则的指南推荐
日前,美国 CAP2014 年会上,美国病理家学会及实验室质量中心发布了一项关于 IHC 检验的分析验证原则的指南推荐(Principles of Analytic Validation of Immunohistochemical Assays),原文发表于近期 Arch Pathol Lab
安捷伦伴随诊断产品PDL1-IHC22C3-pharmDx获FDA批准
PD-L1 IHC22C3 pharmDx(PD-L1检测试剂盒(免疫组织化学法))近期在美国FDA获得批准用于第七种肿瘤的伴随诊断 2020年11月13日,北京——安捷伦科技公司(纽约证交所:A)今日宣布其PD-L1 IHC22C3 pharmDx(PD-L1检测试剂盒(免疫组织化学法))已
Novus血液肿瘤研究
常见的血液肿瘤主要包括各类白血病、多发性脊髓瘤以及恶性淋巴瘤。急性白血病占常见恶性肿瘤的第八位,淋巴瘤也是在前十位,并且发病率逐年升高,多发性骨髓瘤的整个发病率在血液恶性肿瘤里面占10%。以下产品可用于多种常见血液肿瘤研究,急性淋巴细胞白血病(Acute Lymphoblastic Leukemia
Novus细胞器抗体大全
每种细胞在质膜表面都有一系列独特的糖蛋白,这些糖蛋白镶嵌在细胞膜中,在细胞之间交流中发挥重要作用。Novus提供一系列细胞器标记物抗体,方便广大科研用户。(1)核仁标记物Catalog #Antibody NameTested ApplicationsSpecies ReactivityNBP2-1
安捷伦用于胃癌或GEJ癌的Dako-PDL1-IHC-22C3-pharmDx获得FDA认证
安捷伦科技公司用于胃癌或胃食管结合部 (GEJ) 癌的 Dako PD-L1 IHC 22C3 pharmDx 伴随诊断产品获得 FDA 认证表达 PD-L1 的胃腺癌或 GEJ 腺癌患者现可通过 PD-L1 IHC 22C3 pharmDx 检测确定是否可接受 KEYTRUDA®(派姆单抗)的治疗
免疫组化染色机需要进水口吗
显然,免疫组化(IHC)结果获取过程中最关键的步骤是使用正确的抗体和抗原特异结合并对信号进行放大,但其实免疫组化(IHC)过程中所有的步骤对于生成出色的图像结果都十分重要。免疫组化(IHC)染色经常很难获得最优的结果,但通常可以通过对一些实验流程的变量(例如样品制备、抗原修复以及孵育时间等)进行调整
原代细胞培养经典案例和细胞药筛介绍(三)
药物筛选 威斯腾生物与上海中科院生物与细胞所化学生物学技术平台合作,享有英国国家医学研究院科技转化部MRCT独家提供的约1万种核心结构小分子化合物库资源,基于成药性结构设计,特别适于进行以新药研发为目的的活性化合物筛选。精选SiRNA库,包含20个亚库,可根据需求定制提高通路筛选。 高内涵筛选:通过