双荧光素酶验证
miR 和LncRNA/circRNA/mRNA 结合双荧光素酶验证方案 一、 检测原理全基因合成 miR 潜在结合位点上下游~500bp（ LncRNA、circRNA 或 mRNA 的3’UTR）野生形式 WT 及结合位点的突变形式 Mut，克隆到 psiCHECK-2 多克隆位点处（1640-1674）（图 1），然后与 miR 的 mimics/NC 共同转染 293T 细胞测定荧光素酶读值即可。 图 1 双荧光素酶载体示意图 二、 载体构建与 Mimics 合成1.构建 WT miR 潜在结合位点到 psiCHECK-2 载体，命名为 WT；2.构建 Mut miR 潜在结合位点到 psiCHECK-2 载体，命名为 Mut（突变模式：A/T 与 G/C 互变）；3.合成待测 miR 的 Mimmics 及阴性对照 NC。 三、 实验分组信息 四、 预期实验结果 ......阅读全文
双荧光素酶验证
miR 和LncRNA/circRNA/mRNA 结合双荧光素酶验证方案 一、 检测原理全基因合成 miR 潜在结合位点上下游~500bp（ LncRNA、circRNA 或 mRNA 的3’UTR）野生形式 WT 及结合位点的突变形式 Mut，克隆到 psiCHECK-2 多克隆位点处
什么是双荧光素酶
荧光素酶（Luciferase）是催化莹光素氧合而发光的蛋白酶即[让萤火虫尾部荧光素发出荧光的蛋白质]莹光素+ATP+O2-->氧合莹光素+AMP+PPi+荧光
什么是双荧光素酶
荧光素酶（Luciferase）是催化莹光素氧合而发光的蛋白酶即[让萤火虫尾部荧光素发出荧光的蛋白质]莹光素+ATP+O2-->氧合莹光素+AMP+PPi+荧光
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
什么是双荧光素酶
荧光素酶（Luciferase）是催化莹光素氧合而发光的蛋白酶即[让萤火虫尾部荧光素发出荧光的蛋白质]莹光素+ATP+O2-->氧合莹光素+AMP+PPi+荧光
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶报道系统详解
一、概述报告基因 (reporter gene):是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。 一般的，把报告基因的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。在基因表达调控的研究中，
双荧光素酶报道系统详解
一、概述报告基因 (reporter gene):是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。 一般的，把报告基因的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。在基因表达调控的研究中，
双荧光素酶报道系统详解
一、概述报告基因 (reporter gene):是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。 一般的，把报告基因的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。在基因表达调控的研究中，
双荧光素酶报道系统详解
一、概述报告基因 (reporter gene):是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。 一般的，把报告基因的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。在基因表达调控的研究中，
双荧光素酶报道系统详解
一、概述报告基因 (reporter gene):是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。 一般的，把报告基因的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。在基因表达调控的研究中，
双荧光素酶实验原理是什么
v双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴
双荧光素酶报告基因测试
在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时 ，通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因（比如CAT，β-Gal，GUS）不够便利。因为各自的测试化学，处理要求，检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术，结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因
双荧光素酶实验原理是什么
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶实验原理是什么
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶实验原理是什么
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶转烟草如何观察
观察双荧光素酶转烟草可以通过以下步骤：1.准备转基因烟草植株：使用含双荧光素酶基因的转基因烟草，使其表达荧光蛋白。2.观察烟草植株：使用荧光显微镜观察转基因烟草植株，检查其是否表达荧光蛋白。荧光显微镜可以用来观察转基因烟草叶片、茎、花和果实等部位，以检查是否存在荧光信号。3.测定荧光强度：可以使用荧
双荧光素酶实验原理是什么
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶实验原理是什么
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶检测的原理和应用
一、荧光素酶报告基因的检测原理荧光素酶（Luciferase）是生物体内催化荧光素(luciferin)或脂肪醛(firefly aldehyde)氧化发光的一类酶的总称，来自于自然界能够发光的生物。自然界存在的荧光素酶来自萤火虫、发光细菌、发光海星、发光节虫、发光鱼、发光甲虫等。细菌荧光素酶对热敏
双荧光素酶报告基因检测（二）
双荧光素酶报告基因检测（二）双荧光素酶实验通常被用来评估miRNA是否与其潜在的靶基因发生相互作用。实验中，预测的miRNA靶标基因的3’-UTR序列被克隆到含有萤火虫荧光素酶的报告基因载体的3’-UTR位置。如果miRNA与插入到质粒中的目标序列发生结合，miRNA将通过抑制该序列的翻译来降低萤火
双荧光素酶报告基因检测（一）
双荧光素酶实验是广大科研工作者经常会遇到的实验。双荧光素酶报告基因通常以萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）为报告基因，以海肾荧光素酶（Renilla luciferase）为内参基因。这样构建的报告系统具备很多优势，包括检测灵敏度高、动态范围广、应用灵活等。同时双荧光素酶实验也有