双荧光素酶实验原理

双荧光素酶实验原理:利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点,把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因(firefly luciferase)的上游,构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞,适当刺激或处理后裂解细胞,测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。同时,为了减少内在的变化因素对实验准确性的影响,将带有海肾荧光素酶基因(Rinilla luciferase)的质粒作为对照质粒与报告基因质粒共转染细胞,提供转录活力的内对照,使测试结果不受实验条件变化的干扰。荧光素酶报告基因是指以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物荧光(bioluminescence)。......阅读全文

双荧光素酶验证

miR 和LncRNA/circRNA/mRNA 结合双荧光素酶验证方案 一、 检测原理全基因合成 miR 潜在结合位点上下游~500bp( LncRNA、circRNA 或 mRNA 的3’UTR)野生形式 WT 及结合位点的突变形式 Mut,克隆到 psiCHECK-2 多克隆位点处

什么是双荧光素酶

荧光素酶(Luciferase)是催化莹光素氧合而发光的蛋白酶即[让萤火虫尾部荧光素发出荧光的蛋白质]莹光素+ATP+O2-->氧合莹光素+AMP+PPi+荧光

双荧光素酶实验原理

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什么是双荧光素酶

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双荧光素酶实验原理

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双荧光素酶实验原理

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双荧光素酶实验原理

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双荧光素酶实验原理

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双荧光素酶实验原理

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双荧光素酶实验原理

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双荧光素酶实验原理

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什么是双荧光素酶

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双荧光素酶实验原理

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双荧光素酶实验原理

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双荧光素酶报道系统详解

一、概述报告基因 (reporter gene):是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。  一般的,把报告基因的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。在基因表达调控的研究中,

双荧光素酶报道系统详解

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双荧光素酶报道系统详解

一、概述报告基因 (reporter gene):是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。  一般的,把报告基因的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。在基因表达调控的研究中,

双荧光素酶实验原理是什么

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双荧光素酶报告基因测试

在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时 ,通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因(比如CAT,β-Gal,GUS)不够便利。因为各自的测试化学,处理要求,检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术,结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因

双荧光素酶实验原理是什么

双荧光素酶实验原理:利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点,把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因(firefly luciferase)的上游,构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞,适当刺激或处理后裂解细胞,测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣

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双荧光素酶转烟草如何观察

观察双荧光素酶转烟草可以通过以下步骤:1.准备转基因烟草植株:使用含双荧光素酶基因的转基因烟草,使其表达荧光蛋白。2.观察烟草植株:使用荧光显微镜观察转基因烟草植株,检查其是否表达荧光蛋白。荧光显微镜可以用来观察转基因烟草叶片、茎、花和果实等部位,以检查是否存在荧光信号。3.测定荧光强度:可以使用荧

双荧光素酶实验原理是什么

双荧光素酶实验原理:利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点,把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因(firefly luciferase)的上游,构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞,适当刺激或处理后裂解细胞,测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣

双荧光素酶报告基因检测(二)

双荧光素酶报告基因检测(二)双荧光素酶实验通常被用来评估miRNA是否与其潜在的靶基因发生相互作用。实验中,预测的miRNA靶标基因的3’-UTR序列被克隆到含有萤火虫荧光素酶的报告基因载体的3’-UTR位置。如果miRNA与插入到质粒中的目标序列发生结合,miRNA将通过抑制该序列的翻译来降低萤火

双荧光素酶报告基因检测(三)

双荧光素酶报告基因检测(三)萤火虫荧光素酶片段互补成像(LCI)技术是一种新兴的蛋白质相互作用研究方法,其中两个被研究的目标蛋白质分别与萤火虫荧光素酶的N端和C端相连。当这两个蛋白质发生相互作用时,荧光素酶的两个段落会接近并组合成一个活性酶。结合烟草瞬时表达系统的LCI技术,能够在植物细胞内进行实时

双荧光素酶报告基因实验原理

双荧光素酶报告基因实验原理具体如下:双荧光素酶报告基因实验原理是利用双荧光素酶作为荧光素酶的标记来研究基因表达与调控的机制。双荧光素酶报告基因实验是一种基因表达定量分析技术,通过将双荧光素酶Luciferase作为报告基因插入到需要研究的靶基因启动子区域或转录后区域,使其与靶基因协同表达。当荧光素基