CRISPR／Cas9条件性基因敲入鼠的鉴定方法
基因工程小鼠基因型PCR鉴定的基本原则是利用基因工程小鼠基因组与野生型小鼠基因组的序列差异，以小鼠基因组DNA为模板进行PCR，并以凝胶电泳比对比不同基因型特异产物的大小，根据条带大小来区分小鼠的不同基因型。上期我们讲述了CRISPR/Cas9条件性基因敲除鼠的鉴定，今天我们就开始学习CRISPR/Cas9条件性基因敲入鼠的鉴定。 验证F1代flox鼠打靶是否正确 01 引物设计F1/R1验证5'arm打靶是否正确，F2/R2验证3'arm打靶是否正确，F4/R4验证插入区域。鉴定的阳性鼠继续进行Southern Blot的验证。 02 预期片段大小条带1的大小为：F1/R1扩增的5'arm端，包括野生型骨架区+同源臂+loxP+敲入区域；条带2的大小为：F2/R2扩增的3'arm端，包括野生型骨架区+同源臂+loxP+敲入区域；条带3的大小为：F4/R4......阅读全文
CRISPR/Cas9条件性基因敲入鼠的鉴定方法
基因工程小鼠基因型PCR鉴定的基本原则是利用基因工程小鼠基因组与野生型小鼠基因组的序列差异，以小鼠基因组DNA为模板进行PCR，并以凝胶电泳比对比不同基因型特异产物的大小，根据条带大小来区分小鼠的不同基因型。上期我们讲述了CRISPR/Cas9条件性基因敲除鼠的鉴定，今天我们就开始学习CRISPR/
CRISPR/Cas9基因敲入鼠鉴定方法之Southern－Blot与PCR
基因工程小鼠基因型PCR鉴定的基本原则是利用基因工程小鼠基因组与野生型小鼠基因组的序列差异，以小鼠基因组DNA为模板进行PCR，并以凝胶电泳对比不同基因型特异产物的大小，根据条带大小来区分小鼠的不同基因型。上期我们讲述了CRISPR/Cas9条件性基因敲入鼠的鉴定，今天我们就开始学习CRISPR/C
CRISPR/Cas9条件性基因敲除鼠的鉴定手法
基因工程小鼠基因型PCR鉴定的基本原则是利用基因工程小鼠基因组与野生型小鼠基因组的序列差异，以小鼠基因组DNA为模板进行PCR，并以凝胶电泳比对比不同基因型特异产物的大小，根据条带大小来区分小鼠的不同基因型。上期我们讲述了CRISPR/Cas9完全性基因敲除鼠的鉴定，今天我们就开始学习CRISPR/
CRISPR/Cas9完全性基因敲除鼠的鉴定方法
基因工程小鼠基因型PCR鉴定的基本原则是利用基因工程小鼠基因组与野生型小鼠基因组的序列差异，以小鼠基因组DNA为模板进行PCR，并以凝胶电泳比对比不同基因型特异产物的大小，根据条带大小来区分小鼠的不同基因型。上期我们讲述了PCR胶浓度、电泳电压及时间的选择，今天我们就开始学习CRISPR/Cas9完
全新CRISPR/Cas9基因敲入系统助力肝癌建模
最近发表在开放获取期刊《基因组医学》（Genome Medicine）上的一项研究，报道了一种建立肝癌小鼠模型的新方法，即利用CRISPR/Cas9系统快速将癌症相关基因敲入小鼠的DNA中。 研究的通讯作者、麻省大学医学院RNA疗法研究所的王文说：“为了更好地理解肿瘤生物学、开展临床前研究以及
CRISPR新改良实现高效基因敲入
细菌一直在与病毒或入侵核酸进行斗争，为此它们演化出了多种防御机制，CRISPR/Cas适应性免疫系统就是其中之一。该系统能在小RNA分子（crRNA）的引导下，靶标并沉默入侵者的遗传物质。 发现CRISPR系统之后不久，人们就开始用它来进行特异性的基因编辑。这种基因编辑技术更容易操
新技术推动CRISPR、TALEN广泛介导基因敲入
使用一种新型的基因敲入（knock-in）技术，来自日本的科学家们将外源基因有效地插入到了人类细胞和包括蚕及青蛙在内的动物模型中。这种策略不仅能够在培养细胞中，还可以在各种生物体中普遍实现基因敲入。相关研究结果发布在近日的《自然通讯》（Nature Communications）杂志上。 当前
各种类型的基因编辑鼠如何建系？
《鼠年说鼠》系列文章，每周二更新，专门解答大小鼠铲屎官们在养鼠过程中经常遇到的繁育与鉴定类的问题，同时向大家征集问题，任何基因编辑鼠饲养繁殖或鉴定的困惑统统可以丢给小赛，小赛会给您回复或统一在后面的内容为大家做出详细的解答。今天我们就开始第九期的内容吧～ 完全性基因敲除、基因敲入（点突变）鼠如何建
基因敲入的概念
基因敲入（gene knock in）是利用基因同源重组，将外源有功能基因（基因组原先不存在、或已失活的基因），转入细胞与基因组中的同源序列进行同源重组，插入到基因组中，在细胞内获得表达的技术。基因敲入有两种，一种是原位敲入,即在原基因敲除的位点插入新基因,它是基因敲除的逆过程；另一种是定点敲入,即
如何鉴定CRISPR/Cas9点突变小鼠转基因鼠以及ES打靶技术...
如何鉴定CRISPR/Cas9点突变小鼠转基因鼠以及ES打靶技术构建鼠？ 基因工程小鼠基因型PCR鉴定的基本原则是利用基因工程小鼠基因组与野生型小鼠基因组的序列差异，以小鼠基因组DNA为模板进行PCR，并以凝胶电泳对比不同基因型特异产物的大小，根据条带大小来区分小鼠的不同基因型。上期我们讲述了CRI
Nature子刊：TALEN/CRISPR介导的新型替代基因敲入技术
来自广岛大学的专任讲师Tetsushi Sakuma、Takashi Yamamoto教授，专任副教授Ken-Ichi T Suzuki及同事们在《Nature Protocols》杂志上，报告了一种利用基因组编辑技术的替代基因敲入方法的精简实验方案。这一创新方法被称作为PITCh系统（精确整合
TetraOne－KO——基因敲除技术进展
TetraOne KO——基因敲除技术的重大突破 近日，赛业生物科技（Cyagen Biosciences）宣布推出其全球ZL技术TetraOne基因敲除，一种不仅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9（把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6个月），而且避免了TALEN、CRISP
CRISPR/Cas9和ES打靶选择的优劣比较
近年随着生物医药技术快速迭代，靶向药物、免疫疗法、基因治疗等个性化治疗方式成为生物药创新的主要方向，这其中离不开基因编辑技术的发展。从一年前的ZL之争，到基因编辑公司Editas人类基因编辑的临床试验获FDA批准可知，基因编辑技术的发展备受期待。 目前动物模型基因编辑技术大抵分为两类：ES细胞打靶
TetraOne－KO——基因敲除技术的重大突破
近日，赛业生物科技（Cyagen Biosciences）宣布推出其全球ZL技术TetraOne基因敲除，一种不仅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9（把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6个月），而且避免了TALEN、CRISPR/Cas9脱靶效应困扰的革命性技术。TetraO
TetraOne－KO——基因敲除技术的重大突破
TetraOne KO——基因敲除技术的重大突破 近日，赛业生物科技（Cyagen Biosciences）宣布推出其全球ZL技术TetraOne基因敲除，一种不仅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9（把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6个月），而且避免了TALEN、
Cas9CKI小鼠繁育原则与路线讲解
随着基因工程技术的发展，针对特定基因研究的小鼠模型构建也越来越成熟。但是，构建成功的模型小鼠要用于实验，还需要漫长的繁育之路要走。行百里者半九十，你以为模型构建成功了就结束了吗？NO NO NO！繁育是提供合格实验材料过程中的临门一脚。特别是对于CKO、CKI这些组织特异性的模型小鼠，需要与cre工
上海生科院利用双生病毒载体系统实现CRISPR/Cas9
3月19日，《分子植物》（Molecular Plant）杂志在线发表了中国科学院上海生命科学研究院植物逆境生物学研究中心朱健康研究组题为Gene targeting by homology-directed repair in rice using a geminivirus-based CR
科学家在植物中实现超长基因片段高效精准无赘敲入
5月17日，国际学术期刊《自然-通讯》（Nature Communications）在线发表了中国科学院上海植物逆境生物学研究中心朱健康研究组题为CRISPR/Cas9-mediated gene targeting in Arabidopsis using sequential transfo
Cell子刊介绍一种高效精确的基因敲入技术：TildCRISPR
一组研究人员设计了一种新型基因靶向整合策略Tild-CRISPR，它可以在小鼠和人的细胞中实现高效精确的基因敲入。Tild-CRISPR不仅适用于高效地构建小鼠动物模型，同时为研究体内的基因功能以及开发潜在的基因疗法提供新思路。 这一研究成果公布在Developmental Cell期刊上，题
将致癌基因敲入小鼠DNA中－“基因魔剪”让癌症建模更准确
据开放获取期刊《基因组医学》16日公开的一项研究，美国科学家报告了一种建立癌症小鼠模型的新方法——利用有“基因魔剪”之称的CRISPR/Cas9系统快速将癌症相关基因敲入小鼠的DNA中。该方法以前所未有的高效，满足了快速准确建立动物模型的需求。 研究通讯作者、麻省大学医学院RNA疗法研究所的
基因敲入的概念和基本方式
基因敲入（gene knock in）是利用基因同源重组，将外源有功能基因（基因组原先不存在、或已失活的基因），转入细胞与基因组中的同源序列进行同源重组，插入到基因组中，在细胞内获得表达的技术。 基因敲入有两种，一种是原位敲入,即在原基因敲除的位点插入新基因,它是基因敲除的逆过程；另一种是定点敲入,
基因敲入的定义和方式介绍
基因敲入（gene knock in）是利用基因同源重组，将外源有功能基因（基因组原先不存在、或已失活的基因），转入细胞与基因组中的同源序列进行同源重组，插入到基因组中，在细胞内获得表达的技术。基因敲入有两种，一种是原位敲入,即在原基因敲除的位点插入新基因,它是基因敲除的逆过程；另一种是定点敲入,即
中国农大特聘教授发表CRISPR文章
2015年12月10日，中国农业大学特聘教授韩建永带领的研究小组，以Letter的形式在《Protein & Cell》杂志上发表题为“Highly efficient generation of biallelic reporter gene knock-in mice via CRISPR-
中国农大特聘教授发表CRISPR文章
2015年12月10日，中国农业大学特聘教授韩建永带领的研究小组，以Letter的形式在《Protein & Cell》杂志上发表题为“Highly efficient generation of biallelic reporter gene knock-in mice via CRISPR-
全新CRISPR/Cas9基因编辑系统助力肝癌建模
最近发表在开放获取期刊《Genome Medicine》上的一项研究，报道了一种建立肝癌小鼠模型的新方法，即利用CRISPR/Cas9系统快速将癌症相关基因敲入小鼠的DNA中。 研究的通讯作者、麻省大学医学院RNA疗法研究所的王文说：“为了更好地理解肿瘤生物学、开展临床前研究以及为病人找到潜在
新型高效精确的基因靶向整合策略研究获进展
近日，中国科学院脑科学与智能技术卓越创新中心/神经科学研究所研究员杨辉研究组与山东大学附属生殖医院、上海交通大学医学院附属仁济医院教授陈子江课题组合作，设计了一种新型基因靶向整合策略Tild-CRISPR，它可以在小鼠和人的细胞中实现高效精确的基因敲入，不仅适用于高效地构建小鼠动物模型，同时也为
李晓江博士：探讨用CRISPR/Cas9实现大型动物基因组编辑
6月2日，来自中国科学院遗传与发育生物学研究所的李晓江（Xiao-Jiang Li）研究员在《细胞研究》（Cell Research）杂志上发表了题为“Targeted genome editing in primate embryos”的文章。 在这篇文章中他概述了近期在灵长类动物胚胎中应用
基因编辑到底是什么
嗨~来看点更专业的回答吧 ♪(･ω･)ﾉCRISPR/Cas基因编辑系统 CRISPR/Cas（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/Cas）系统是目前被广泛运用的基因编辑系统，其原理是由CRISPR转录产生的
－Cell子刊突破：无需克隆的CRISPR新技术
来自荷兰Hubrecht研究所和乌特勒支医学中心（UMC Utrecht）、麻省理工学院的研究人员称，他们开发出了一种自身克隆CRISPR/Cas9(scCRISPR)技术，可以绕开基因编辑过程中所有的克隆步骤，在数小时内完成CRISPR/Cas9介导基因突变及位点特异性转基因敲入。他们的研究成
基因编辑到底是什么
CRISPR/Cas9系统中sgRNA(smallguideRNA)识别并结合目标基因的靶向序列，引导Cas9对结合位点进行剪切，产生DNA双链断裂（double-strandbreak,DSB），机体自身通过非同源重组（non-homologousendjoining，NHEJ）的方