质粒DNA纯化和内毒素去除
质粒是在染色体或核区之外能够自主复制的双链闭合环状DNA分子，以超螺旋状态存在，几乎完全裸露，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。质粒具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。 质粒DNA广泛应用于基因工程、生物医学的研究以及生物产品的开发和应用。质粒DNA纯化是其应用的关键步骤，直接影响到转化、测序、PCR、酶切和转染等下游实验。一般质粒DNA约为2~20kb，初步纯化的质粒DNA构型分为超螺旋、开口环状及线性3种，其中超螺旋结构的质粒DNA转化和表达效率最高。质粒DNA安全性好、毒性低和免疫原性较低、便于分离和提取，在DNA重组技术、转基因方面有广泛应用。内毒素又称脂多糖，是革兰阴性菌外部细胞壁的主要成分。脂多糖由疏水的脂质A部分、核心寡糖和杂多糖链及菌株特异性O抗原组成，其中脂质A部分是分子内毒素活性的原因。尽管脂质A不会直接伤害任何组织，但人类和动物的免疫细胞都将其视为存在......阅读全文
质粒DNA的纯化
聚乙二醇沉淀法质粒DNA氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心法纯化闭环DNA(一)聚乙二醇沉淀法提取质粒DNA1)将核酸溶液所得]转入15mlCorex 管中，再加3ml 用冰预冷的5mol/L LiCl溶液，充分混匀，用合适转头于4℃下以10 000转/分离心10分钟。LiCl可沉淀高分子RNA。2)将上
纯化DNA实验_纯化质粒（碱裂解法）
实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒LB葡萄糖缓冲液乙酸钾仪器、耗材离心管实验步骤1. 单个大肠杆菌克隆接种到 2 ml 含适当抗生素的 LB 中。37℃ 剧烈振荡孵育 5~8 小时。或者可以培养过夜使饱和。2. 倒 1.5 ml 培养液到已作标记的微量离心管中。把剩下的培养液存放在 4℃。3. 在微量离心
柱离心法纯化质粒DNA
实验概要本实验介绍了柱离心法纯化质粒DNA的原理及操作流程。实验原理1. 离心柱结构：特殊硅基质吸附材料，特异性吸附DNA，而RNA与蛋白质穿过。在正常情况下，核酸表面覆盖了一层由水分子组成的亲水薄膜，以维持其水溶性。高浓度盐离子的加入破坏了核酸表面亲水薄膜的相对有序排列，形成了疏水环境。在此环境中
柱离心法纯化质粒DNA
实验原理1. 离心柱结构：特殊硅基质吸附材料，特异性吸附DNA，而RNA与蛋白质穿过。在正常情况下，核酸表面覆盖了一层由水分子组成的亲水薄膜，以维持其水溶性。高浓度盐离子的加入破坏了核酸表面亲水薄膜的相对有序排列，形成了疏水环境。在此环境中，核酸与硅胶膜能有效结合，而蛋白质、代谢产物和其他污染物则不
质粒DNA的制备和纯化
实验概要质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小从1~200kb不等，为双链、闭环的DNA分子，并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。质粒在细胞内的复制一般有两种类型：
质粒DNA的提取与纯化
一、实验目的与原理质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。提取质粒的基本步骤分为三步：①细菌的培养和质粒的扩增，②细菌菌体的裂解，③质粒DNA的纯化。本实验采取的菌体裂解方
质粒DNA的提取与纯化
一、实验目的与原理 质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。 提取质粒的基本步骤分为三步： ①细菌的培养和质粒的扩增 ②细菌菌体的裂解 ③质粒DNA的纯化 本实验采取的菌体
质粒DNA的分离、纯化和鉴定
材料、设备及试剂 一、材料 含质粒的E. coli DH5α或JM系列菌株，1.5ml塑料离心管(又称eppendorf管),离心管架。 二、设备 微量取液器(20μl,200μl,1000μl)， 台式高速离心机，恒温振荡摇床， 高压蒸汽消毒器(灭菌锅)， 涡旋振荡器， 电泳仪，琼脂糖平板
柱离心法纯化质粒DNA实验
实验原理1. 离心柱结构：特殊硅基质吸附材料，特异性吸附DNA，而RNA与蛋白质穿过。在正常情况下，核酸表面覆盖了一层由水分子组成的亲水薄膜，以维持其水溶性。高浓度盐离子的加入破坏了核酸表面亲水薄膜的相对有序排列，形成了疏水环境。在此环境中，核酸与硅胶膜能有效结合，而蛋白质、代谢产物和其他污染物则不
质粒DNA纯化和内毒素去除
质粒是在染色体或核区之外能够自主复制的双链闭合环状DNA分子，以超螺旋状态存在，几乎完全裸露，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。质粒具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。 质粒DNA广泛应用于基因工程、生物医学的研究以及生物产品的开发和应用。质粒DNA纯化