如何清洁移液器以减少移液污染造成的PCR检测假阳性风险

对于大量进行PCR的实验室来说,移液器的污染造成的假阳性并不是一个罕见的情况。 PCR尤其是RT-PCR技术已经逐渐成为疾病诊断的标准方法。如近期流行的新冠(COVID-19)疫情,RT-PCR结果即为诊断标准之一。对于PCR检测,由于实验室设备的污染造成的假阳性结果也不容忽视。尤其是在样本量极大,PCR仪连续工作期间,检测间往往都是封闭环境,气溶胶弥漫,仪器极易污染。而移液器往往是离样品最近,使用最频繁的仪器,不论是吸液过程中,还是在操作环境中,都非常容易被污染。污染的移液器可能会将污染的样品或核酸引入后续样品或者PCR反应体系中导致检出信号而出现假阳性结果。 我们以德国BRAND 的Transferpette® S移液器为例,介绍如何清洁移液器以减少移液器污染造成的假阳性风险。德国BRAND 的Transferpette® S移液器具有易于拆卸维护的优点,配件更换容易,并具有易校准技术,无需工具即......阅读全文

PCR-反应出现假阳性结果原因

1 ) 引物设计不合适: 选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而,在进行PCR扩增时,扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。 2 ) 靶序列或扩增产物的交叉污染: 这种污染有两种原因: 一是整个基因组或大片段的交叉污染,导致假

PCR技术

            实验方法原理 PCR是在模板DNA、引物和dNTPs的存在下依赖于DNA聚合酶的酶促反应。PCR技术的特异性取决于引物和模板结合的特异性。反应分为变性、退火、延伸三步,经过一定的循环,介于两个引物之间的特异DNA片段得到大量扩增。 

移液器(移液枪)地使用、维护

移液器(移液枪)地使用、维护与选购:在进行分析测试方面地研究时,一般采用移液枪()量取少量或微量地液体.对于移液枪地正确使用方法及其一些细节操作,是很多人都会忽略地.现在分几个方面详细叙述.量程地调节在调节量程时,如果要从大体积调为小体积,则按照正常地调节方法,逆时针旋转旋钮即可;但如果要从小体积调

使用血液进行基因检测如何减少假阴性

基因检测-入门攻略什么是基因检测?肿瘤基因检测是通过特定检测设备对被检测者细胞中的DNA分子信息作检测,分析它所含有的各种基因突变情况,从而能针对性地为每位患者“量身定制”一套最合适的治疗方案。它是肿瘤精准医疗的基础。选择什么样本最合适?做基因检测,是检测肿瘤细胞的突变,因此需要获取肿瘤细胞。临床上

电子移液器的多种移液模式简介

  1、移液模式 (PIP Mode)  2、样品混匀模式,(PIPmix Mode)  3、反向吸液模式(revPIP Mode)该模式专为吸高黏度,高蒸汽压或发泡液体所设计。  4、电泳上样模式(GEL Mode) 以设定的移液量会以较快可调的速度进行吸液,然后以较慢的速度进行排液,以免扩散。该

关于移液器和移液管的对比

关于移液器和移液管的对比  1.从使用的舒适性来说,移液器完胜于移液管。现在的手持式移液器,其外观设计中,已越来越多地掺入了人体工程学原理,使得移液器使用起来更为方便,更显人性化。  2.从计量准确度来说,移液器的准确度,已远高于移液管。现在的微小容量移液器,已经能够计量到0.1微升级,完够代替移液

移液器的2种移液方法分析

移液器作为实验室常规的工具,通常有2种移液方法:1)正向移液法该技术使用吹出功能,保证液体完全转移。按下按钮到停点。将吸液嘴没入液面下2-3mm,轻缓松开按钮回原点。仔细提上吸液嘴并在容器壁上停靠一下,以去除多余液体。 轻按按钮至停点,液体即被排出。稍停片刻继续按按钮至第二停点(即吹出),这一步骤将

影响移液器移液误差的几大因素

可能造成移液误差的因素→确定影响因素的方法→避免误差的方法1、气压变化对移液器调节影响→观察测试环境中气压计→按照制造商建议的方法操作2、被移取液体与水的密度不同对移液的影响→比较被移取液体与水的密度→观察用户相关信息,采用不同的移液方式3、被移取液体与水的水汽压力不同对移液的影响→移液过程中,液体

移液器的移液量异常状况解析

  移液器的移液量异常状况解析  1.移液量偏大  移液量偏大的情况不多,如果遇到了,一般有两种原因:  ①操作错误,就是在吸液时把吸/排液按钮按到底了,而实际只需要按到档(停止点);  ②移液器不准了,需要用工具调节定量螺丝。  2.移液量偏小  移液量偏小是常见的,其原因也有很多种,下面是问题的

移液器的结构、原理和移液模式

移液器是实验室的必备常规设备,是每一位科研工作者,特别是生物、药物、化学等行业科研工作者每天都使用的工具,它的耐用性和精确度是大部分使用者最关心的,为了帮助大家选择适合的移液器、正确使用移液器、延长移液器使用寿命、确保移液精度,莱贝此文从介绍移液器最基础的知识开始,将会对移液器做一系列介绍。俗话说简

实验室仪器之移液器移液技法–反向移液模式

相信每一个在实验室工作人员都有使用移液器的经验,也要求移液器能有高准确度跟精确度,但是其实除了移液器本身的准确度和精确度会影响到我们的移液结果之外,移液器的使用技法也会对我们的移液结果产生影响。为了能获得最佳结果,确保实验的准确性,我们需要采用良好的移液技法。莱贝将向您介绍关于获得最佳移液效果的技巧

移液器移液和排液操作对比

吸液的操作:1、连接恰当的吸嘴; 2、按下控制钮至第一档;3、将移液器吸嘴垂直进入液面下 1-6mm (视移液器容量大小而定);        0.1-10ul 容量的移液器进入液面下1-2mm        2-200ul 容量的移液器进入液面下 2-3mm        1-5ml 容量的移液器

核酸检测实验室清除气溶胶污染的日常操作

核酸检测实验室(qPCR)如何清除污染? 早在2020年5月1日,国家卫健委发布《关于落实常态化疫情防控要求进一步加强医疗机构感染防控工作的通知》,从七个方面对进一步加强医疗机构感染防控工作提出了具体要求。其中一条要求就是对所有三级医院以及县医院开展建设,使其迅速达到新冠病毒核酸检测条件;对其他二级

新冠病毒检测,警惕气溶胶感染风险(二)

● 只需一个按键,可在数秒内完成转头的装卸,而且确保转头锁牢;● 根据不同的应用场景,可迅速更换转头;● 对于极其危险的样本方便把转头和样品整体卸下,搬运至生物安全柜中进行操作,减少风险。 03 SmartFlow Plus 双风机系统 具有ZL设计的、独特的自动补偿、节能双直流无碳刷风机,不论 H

利用-LTS-减少-85%-的移液用力

June 17, 2015 - Greifensee移液是一种耗力的重复性活动;张力产生的微小压力即可发展成损伤。 为了使移液用力更轻并确保操作人员保持健康,Rainin 发明了轻触式去吸头系统,在过去 15 年间证明了其价值。由于 Rainin LiteTouch 系统不需要使用摩擦力,因此很大程

PCR仪PCR结果出现假阳性是什么原因?

假阳性假阳性是指出现的 PCR 扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。产生的原因有:①引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行 PCR 扩增时,扩增出的 PCR 产物为非目的序列;②靶序列太短或引物太短;③靶序列或扩增产物的交叉污染。解决方法有:操作轻柔

小吸头上的大学问(之二)——-吸附性

在移取低表面张力的液体(如含有清洁剂的试剂等)时,移液器吸头的内壁上通常会留下一层肉眼难以察觉的液体薄膜。这种液体残留的存在会导致移液结果的不一致和不准确,并造成珍贵样品的损失。近年来,各种品牌纷纷推出低吸附吸头,希望能尽量减少这种残留对实验造成的影响。以下用不同供应商制造的低吸附吸头处理含有清洁剂

核酸检测中涉及PCR污染的预防和处理原则

一、适用范围: 本原则适用于涉及PCR方法进行食品安全检测的实验室 本原则适用于PCR实验室污染的预防和处理。 二、污染来源: (1)样品间的交叉污染:样品污染主要是由于样品在运输、储存、放置过程中处置不当造成的污染。样品核酸模板在提取过程中,由于操作不当也会导致样品间的污染。 (2)试剂

核酸检测中涉及PCR污染的预防和处理原则

一、适用范围:本原则适用于涉及PCR方法进行食品安全检测的实验室本原则适用于PCR实验室污染的预防和处理。二、污染来源:(1)样品间的交叉污染:样品污染主要是由于样品在运输、储存、放置过程中处置不当造成的污染。样品核酸模板在提取过程中,由于操作不当也会导致样品间的污染。(2)试剂的污染:由于操作不当

基因扩增PCR的扩增结果假阳性的原因

出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。 引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行PCR扩增时,扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。 靶序列或扩增产物的交叉污染:这种污染有两种原因:一是整个

PCR实验室污染

在众多的生物实验室中,分子生物学检测方法如PCR因其检测灵敏度高、准确度好、操作方便、快速等优势已经被广泛应用。不过正是由于它的高灵敏性,实验室中极微量的污染源都有可能导致检测结果的假阳性,所以对环境中污染源的防控也极为重要。一旦出现实验室环境污染,比如样本之间交叉污染、试剂污染、仪器污染、阳性对照

非瘟防控中PCR实验室环境污染的监控措施介绍

随着非洲猪瘟(ASF)的来袭,国内荧光定量PCR实验室如雨后春笋般地快速发展。荧光定量PCR方法已成为ASF防控过程中最常见的手段。我们通过调查发现:随着检测量的增加,各实验室的环境污染问题日益突出。2019年初,仇华吉研究员多次在国内ASF防控会议上,从专家的角度呼吁大家在做ASF检测和监测时,务

丙肝抗体胶体金方法检测的假阳性如何避免?

问丙肝抗体胶体金方法检测的假阳性如何避免?答北京大学人民医院张正教授:丙肝抗体临床检验使用胶体金方法判为假阴性应十分慎重。标准合格的抗—HCV试剂条本身应有:阳性质控带,检测时只有质控带出现后方能判定标本结果。从检验方面避免假阴性首先要求试剂合格,买后应有验证,验证合格试剂贮存于要求条件下,使用时在

耶拿新冠病毒核酸检测假阴性/阳性问题探索及解决方案

  在此次新型冠状病毒疫情中,作为最终确诊的关键性技术,核酸检测发挥了极其重要的作用。但是近期关于核酸检测准确性问题的讨论甚嚣尘上,如何提高检测的准确性,如何减少假阴性/假阳性成为困扰检测工作者的重要难题。  从目前已有的资料来看,很多方面得到了讨论,如:冠状病毒感染人体后,病变主要发生肺部,即下呼

可调容量移液器正式移液调节方法

 可调容量移液器正式移液调节方法    可调容量移液器产品特点:    1.移液操作简单、、单手轻松控制。    2.适用0.1-100ml移液管。    3.大功率马达可快速充满100ml液体。    4.可更换的锂电池使用时间长,可间歇工作8小时,充电时间仅需2-3小时。    5.液晶大显示屏

移液管与移液器哪个更准确

 1.从使用的舒适性来说,移液器完胜于移液管。现在的手持式移液器,其外观设计中,已越来越多地掺入了人体工程学原理,使得移液器使用起来更为方便,更显人性化。2.从计量准确度来说,移液器的准确度,已远高于移液管。现在的微小容量移液器,已经能够计量到0.1微升级,完全能够代替移液管从事要求严格的实验活动。

移液管与移液器哪个更准确

 1.从使用的舒适性来说,移液器完胜于移液管。现在的手持式移液器,其外观设计中,已越来越多地掺入了人体工程学原理,使得移液器使用起来更为方便,更显人性化。2.从计量准确度来说,移液器的准确度,已远高于移液管。现在的微小容量移液器,已经能够计量到0.1微升级,完全能够代替移液管从事要求严格的实验活动。

移液和移液器相关基础知识

移液器的原理移液器根据使用原理分为两种,一种是空气置换式(或称为气体活塞式,Air Displacement),另一种是正压式(或称为外置活塞式,Positive Displacement)。1、 空气置换式适用于常规移液操作(液体跟活塞间充满空气)。2、 正压式适用于操作高粘度液体(活塞和液体直接

电子移液器多功能移液模式介绍

电子移液器具有多功能移液模式:    1.移液(P)对选定的容量进行移液,有自动吹出功能,完全控制活塞移动。分出后混合可以被用于连接这个模式。    2.多次分液(d)吸取全部容量加上一定增量,然后多次分出相等容量的液体。剩余部分的容量和次数在显示器上显示。     3.稀释(dd)两种不同溶液由空

PCR拖尾及假阳性的原因及对策

拖尾  现象:产物在凝胶上呈Smear状态。  原因:  1.模板不纯  2.Buffer不合适  3.退火温度偏低  4.酶量过多  5.dNTP、Mg2+浓度偏高  6.循环次数过多  对策:  1.纯化模板  2.更换Buffer  3.适当提高退火温度  4.适量用酶  5.适当降低dNTP