电泳技术介绍及影响电泳的因素
一、基本知识和种类 电泳是指带粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。例如蛋白质具有两性电离性质。当蛋白质溶液的pH在蛋白质等电点的碱侧时,该蛋白质带负电荷,在电场中向正极移动,相反则带正电荷,在电场中向负极移动,只有蛋白质溶液pH在蛋白质的等电点时静电荷是零,在电场中不向任何一极移动。 电泳现象早在1890年就被发现,1907年有人曾在琼脂中电泳,研究白喉毒素。1937年由Tiselius制成界面电泳仪,并开始用于蛋白质的研究。从此,人们才逐渐认识到电泳技术对于生物科学研究是一种重要工具。然而,界面电泳结构复杂,价格昂贵难于普及。1940年左右,以纸为支持物的电泳问世后,电泳技术得到迅速发展。 电泳技术以支持物分,可分为:纸电泳,醋酸纤维素薄膜电泳,淀粉凝胶电泳,琼脂(糖)凝胶电泳及聚丙烯酰胺凝胶电泳等。经凝胶形状分有水平平板电泳,园盘柱状电泳及垂直平板电泳。各种类型的电泳技术概括如表。 各......阅读全文
电泳技术介绍及影响电泳的因素
一、基本知识和种类电泳是指带粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。例如蛋白质具有两性电离性质。当蛋白质溶液的pH在蛋白质等电点的碱侧时,该蛋白质带负电荷,在电场中向正极移动,相反则带正电荷,在电场中向负极移动,只有蛋白质溶液pH在蛋白质的等电点时静电荷是零,在电场中不向任何一极移动。电泳现
电泳技术介绍及影响电泳的因素
一、基本知识和种类 电泳是指带粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。例如蛋白质具有两性电离性质。当蛋白质溶液的pH在蛋白质等电点的碱侧时,该蛋白质带负电荷,在电场中向正极移动,相反则带正电荷,在电场中向负极移动,只有蛋白质溶液pH在蛋白质的等电点时静电荷是零,在电场中不向任何一极
电泳技术介绍及影响电泳的因素
一、基本知识和种类 电泳是指带粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。例如蛋白质具有两性电离性质。当蛋白质溶液的pH在蛋白质等电点的碱侧时,该蛋白质带负电荷,在电场中向正极移动,相反则带正电荷,在电场中向负极移动,只有蛋白质溶液pH在蛋白质的等电点时静电荷是零,在电场中不向任何一极
影响电泳技术的因素介绍
1.电泳介质的pH值溶液的pH值决定带电物质的解离程度,也决定物质所带净电荷的多少。对蛋白质,氨基酸等类似两性电解质,pH值离等电点越远,粒子所带电荷越多,泳动速度越快,反之越慢。因此,当分离某一种混合物时,应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差别的pH值,以利于各种蛋白质的有效分离。为了保证电泳过
电泳技术的影响因素
1.电泳介质的pH值溶液的pH值决定带电物质的解离程度,也决定物质所带净电荷的多少。对蛋白质,氨基酸等类似两性电解质,pH值离等电点越远,粒子所带电荷越多,泳动速度越快,反之越慢。因此,当分离某一种混合物时,应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差别的pH值,以利于各种蛋白质的有效分离。为了保证电泳过
单细胞凝胶电泳技术影响因素的分析
单细胞凝胶电泳(SCGE)又称“彗星”法,是一种操作简便、快速、敏感性高的DNA损伤与修复的检测技术。尽管此法无需复杂的实验条件,但在建立过程中可能受诸多因素的影响而难以得到较理想的结果,我们就其主要的影响因素作如下分析。1.琼脂糖凝胶薄板的制备:该实验需要制备两层琼脂糖凝胶薄板,应注意琼脂糖的浓度
电泳技术基本原理和影响电泳速度的因素1
电泳是指带电粒子在电场中向异性电极移动的现象。例如蛋白质具有两性电离性质,当溶液pH值大于蛋白质等电点时,蛋白质带负电荷,在电场中向正极移动,反之则带正电荷,向负极移动。当蛋白质溶液pH值与蛋白质的等电点相等,静电荷为零则不移动。电泳技术常以有无支持物来分类。电泳中不用支持物在溶液中进行的电泳称为自
电泳技术基本原理和影响电泳速度的因素2
设:某物质(A)在电场中移动的距离为 另物质(B)的移动距离为 则:两物质移动距离之差为: 3-3 (3-3)式指出物质A、B能否分离决定于两者的迁移率。如两者的迁移率相同,则不能分离;如有差别则能分离。实验所选择的条件如电压和电泳时间与两物质的分离距离成正比
影响电泳的因素
不同的带电颗粒在同一电场中泳动的速度不同。常用泳动度(或迁移率)来表 示。泳动度是指带电 颗粒在单位电场强度下泳的速度。影响泳动度的主要因素有:1、首先决定于带颗粒的性质,即颗粒所带净电荷的数量,大小及形状。 一般说来,颗粒带净电荷多,直径小而接近于球形,则在电场中泳动速度快,反 之则慢。泳动
影响电泳的因素
1.电场强度 电场强度也称电位梯度,它是指单位长度的电位降。电场强度对电泳起重要的作用。电场强度愈大,则带电粒子的移动愈快。根据所用电场强度大小,可将电泳分为常压电泳(100~500V)和高压电泳(500~10000V)。常压电泳分离时间长,多用于分离蛋白质等大分子物质;高压电泳分离时间短,多用来
影响电泳的因素
1.电场强度 电场强度也称电位梯度,它是指单位长度的电位降。电场强度对电泳起重要的作用。电场强度愈大,则带电粒子的移动愈快。根据所用电场强度大小,可将电泳分为常压电泳(100~500V)和高压电泳(500~10000V)。常压电泳分离时间长,多用于分离蛋白质等大分子物质;高压电泳分离时间短,多用来分
电泳技术简单介绍
电泳技术原理(以琼脂糖凝胶电泳为例) 1、首先介绍使用的载体--琼脂糖。 琼脂糖是线性的多聚物,基本结构是1,3连结的β-D-半乳呋喃糖和1,4连结的3,6-脱水α-L-半乳呋喃糖。琼脂果胶是由许多更小的分子组成的异质混合物。琼脂糖在水中一般加热到90℃以上溶解,温度下降到35-40℃时形
转移电泳技术介绍
生物化学与分子生物学的研究工作经常需要对电泳分离后的DNA进行分子杂交,但琼脂糖不适合于进行杂交操作,1975年,Southern创造了将DNA区带原位转移到硝酸基纤维素膜(NC膜)上,再进行杂交的方法,被称为Southern印迹法。随后,Alwine等将类似方法用于RNA印迹,被戏称为Northe
电泳技术的过程介绍
电泳是电泳涂料在阴阳两极,施加于电压作用下,带电荷的涂料离子移动到阴极,并与阴极表面所产生的碱性物质作用形成不溶解物,沉积于工件表面。它包括四个过程:电解(分解)在阴极反应最初为电解反应,生成氢气及氢氧根离子OH-,此反应造成阴极面形成一高碱性边界层,当阳离子与氢氧根作用成为不溶于水的物质,涂膜沉积
电泳技术的应用介绍
1.聚丙烯酰胺凝胶电泳可用做蛋白质纯度的鉴定。聚丙烯酰胺凝胶电泳同时具有电荷效应和分子筛效应,可以将分子大小相同而带不同数量电荷的物质分离开,并且还可以将带相同数量电荷而分子大小不同的物质分离开。其分辨率远远高于一般层析方法和电泳方法,可以检出10-9~10-12g的样品,且重复性好,没有电渗作用。
电泳技术的应用介绍
过程如何运作有机分子通常带有正电荷或负电荷,这会使它们对电流作出响应。带正电荷的分子向电场的负极迁移,带负电荷的分子向正极迁移。电荷较大的分子在施加电荷时趋向于更快地移动并传播更远。但是,它们也会因摩擦而减慢,而摩擦又受分子的大小和形状以及测试所用介质的影响。通过控制电流和测试介质提供的摩擦力,研究
电泳设备及电泳技术应用范围
电泳:在直流电场中,带电荷的粒子向带符号相反的电极移动,称为电泳。电泳也是一种分离的方法和技术,就是分离和鉴定混合物中带电粒子(包括离子、高分子多电解质、胶体粒子、病毒颗粒以致活的细胞,如细菌和红细胞等)的技术。 电泳装置:由电泳仪(电源)和电泳槽(混合样品电泳时的支持物)组成。 电泳仪(电源):为
电泳设备及电泳技术应用范围
电泳:在直流电场中,带电荷的粒子向带符号相反的电极移动,称为电泳。电泳也是一种分离的方法和技术,就是分离和鉴定混合物中带电粒子(包括离子、高分子多电解质、胶体粒子、病毒颗粒以致活的细胞,如细菌和红细胞等)的技术。 电泳装置:由电泳仪(电源)和电泳槽(混合样品电泳时的支持物)组成。 电泳仪(电
毛细管电泳技术的分离因素
缓冲液缓冲试剂的选择主要由所需的pH决定,在相同的pH下,不同缓冲试剂的分离效果不尽相同,有的可能相差甚远。CE中常用的缓冲试剂有:磷酸盐、硼砂或硼酸、醋酸盐等。缓冲盐的浓度直接影响到电泳介质的离子强度,从而影响Zeta电势,而Zeta电势的变化又会影响到电渗流。缓冲液浓度升高,离子强度增加,双电层
影响胶体电泳的因素
影响电泳泳动度的因素:1、颗粒性质:颗粒的直径、形状及所带静电荷量对泳动速度有较大影响。一般来说颗粒带净电荷量越多,或其形状越接近球形,在电场中的泳动速度就越快。反之则越慢。2、电场强度:电场强度是指每一厘米的电位降。又称为电位梯度或电势梯度。它对泳动速度起着十分重要的作用。电场强度越高,带电颗粒的
凝胶电泳技术介绍
一般琼脂糖凝胶电泳只能分离小于20kb的DNA。这是因为在琼脂糖凝胶中,DNA分子的有效直径超过凝胶孔径时,在电场作用下,迫使DNA变形挤过筛孔,而沿着泳动方向伸直,因而分子大小对迁移率影响不大。如此时改变电场方向,则DNA分子必须改变其构象,沿新的泳动方面伸直,而转向时间与DNA分子大小关系极为密
关于电泳技术的应用介绍
1.聚丙烯酰胺凝胶电泳可用做蛋白质纯度的鉴定。聚丙烯酰胺凝胶电泳同时具有电荷效应和分子筛效应,可以将分子大小相同而带不同数量电荷的物质分离开,并且还可以将带相同数量电荷而分子大小不同的物质分离开。其分辨率远远高于一般层析方法和电泳方法,可以检出10-9~10-12g的样品,且重复性好,没有电渗作用。
电泳技术
电泳技术简介 电泳法,是指带电荷的供试品(蛋白质、核苷酸等)在惰性支持介质(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)中,于电场的作用下,向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动,使组分分离成狭窄的区带,用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。 电泳技术的基本原理和分类
电泳技术
电泳法,是指带电荷的供试品(蛋白质、核苷酸等)在惰性支持介质(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)中,于电场的作用下,向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动,使组分分离成狭窄的区带,用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。 电泳技术的基本原理和分类 在电场中,推
电泳技术
电泳是指带粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。例如蛋白质具 有两性电离性质。当蛋白质溶液的pH在蛋白质等电点的碱侧时,该蛋白质带负电荷, 在电场中向正极移动,相反则带正电荷,在电场中向负极移动,只有蛋白质溶液pH在 蛋白质的等电点时静电荷是零,在电场中不向任何一极移动。 电泳现象早在1
影响电泳分析仪电泳的因素
1. 电场强度 电场强度越大,电泳速度越快。但增大电场强度会引起通过介质的电流强度增大,从而造成电泳过程中产热过多,引起介质温度升高,影响电泳效果。降低电流可以减少产生热量,但会延长电泳时间,减慢待分离生物大分子的扩散而影响分离效果。 2. 溶液性质 主要体现为样本溶液的pH、离子强度和黏
电泳技术的过程
电泳是电泳涂料在阴阳两极,施加于电压作用下,带电荷的涂料离子移动到阴极,并与阴极表面所产生的碱性物质作用形成不溶解物,沉积于工件表面。它包括四个过程:电解(分解)在阴极反应最初为电解反应,生成氢气及氢氧根离子OH-,此反应造成阴极面形成一高碱性边界层,当阳离子与氢氧根作用成为不溶于水的物质,涂膜沉积
电泳技术概述
电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团,它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电,在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下,由于待分离样品中各种分子带电性质以
电泳技术概述
电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团,它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电,在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下,由于待分离样品中各种分子带电性质以
火箭电泳技术
(一)原理抗原在含有抗体的凝胶中进行电泳,在电场作用下,抗原向一个方向移动,在移动的过程中,逐步与凝胶中的抗体结合而沉淀呈火箭状。沉淀峰面积越大,说明抗原量越多,二者呈正相关,因此可用于抗原的定量测定。此法具有敏感性高、快速等优点。(二)材料与试剂1.0.05mol/L pH8.6巴比妥缓冲液配成2