阳性杂交瘤细胞怎么样进行克隆化培养与冻存？
单个细胞培养又称克隆化。细胞克隆化一般至少进行3～5次。克隆化有以下几种方法：(一)荧光激活细胞分选仪 先进、高效、高纯度、昂贵。(二)有限稀释法 操作简单，出现率高，为实验室最常用的方法。(三)显微操作法 直观可靠，但操作时间过长，容易增加污染机会。(四)软琼脂平板法 本法缺点是琼脂融化温度较难掌握，过高会导致细胞死亡，过低使细胞分布不均匀，操作较复杂，克隆出现率不稳定。杂交瘤细胞应及时冻存，以保证细胞不会因污染或过多传代变异丢失染色体而丧失功能。目前均采用液氮保存细胞。(注意逐步降温、快速复温)......阅读全文
阳性杂交瘤细胞怎么样进行克隆化培养与冻存？
单个细胞培养又称克隆化。细胞克隆化一般至少进行3～5次。克隆化有以下几种方法：(一)荧光激活细胞分选仪 先进、高效、高纯度、昂贵。(二)有限稀释法 操作简单，出现率高，为实验室最常用的方法。(三)显微操作法 直观可靠，但操作时间过长，容易增加污染机会。(四)软琼脂平板法 本法缺点是琼脂融化温度较难掌
阳性杂交瘤细胞的克隆化培养与冻存
单个细胞培养又称克隆化。细胞克隆化一般至少进行3～5次。克隆化有以下几种方法：(一)显微操作法 直观可靠，但操作时间过长，容易增加污染机会。(二)有限稀释法 操作简单，出现率高，为实验室最常用的方法。(三)荧光激活细胞分选仪 先进、高效、高纯度、昂贵。(四)软琼脂平板法 本法缺点是琼脂融化温度较难掌
阳性杂交瘤细胞的克隆化培养与冻存
单个细胞培养又称克隆化。细胞克隆化一般至少进行3～5次。克隆化有以下几种方法：(一)显微操作法 直观可靠，但操作时间过长，容易增加污染机会。(二)有限稀释法 操作简单，出现率高，为实验室最常用的方法。(三)荧光激活细胞分选仪 先进、高效、高纯度、昂贵。(四)软琼脂平板法 本法缺点是琼脂融化温度较难掌
杂交瘤的克隆化及冻存与复苏
杂交瘤克隆化一般是指将抗体阳性孔进行克隆化。因为经过HAT筛选后的杂交瘤克隆不能保证一个孔内只有一个克隆。在实际工作中，可能会有数个甚至更多的克隆，可能包括抗体分泌细胞、抗体非分泌细胞、所需要的抗体（特异性抗体）分泌细胞和其它无关抗体的分泌细胞。要想将这些细胞彼此分开就需要克隆化。克隆化的原则是，
细胞培养不用血清，冻存要怎么样
细胞培养不用血清，冻存可以用无血清冻存液配方为细胞条件无血清培养基与含10%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基1比1混匀冻存过程：消化贴壁细胞或收集悬浮细胞，将细胞悬液收集至离心管并1000rpm离心10分钟，弃上清液用一定量冻存液将细胞重悬，计数并调整细胞密度至100个每毫升左右将细胞悬液分装至2ml
细胞培养与冻存那些事儿！
细胞冻存是将细胞储存在低温环境中，减少细胞代谢，实现长期储存的一种技术。在大多数细胞系中，细胞会随着衰老和演化不断的积累改变，造成表型和基因型的“培养漂移”，在冻存过程中，适当的操作和合适的冻存条件可以减少细胞特性的改变或丢失，起到细胞保种的作用。因而，正确且成功的冻存对于细胞的长久应用起着非常重要
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备技术2
检测抗体的方法应根据抗原的性质、抗体的类型不同，选择不同的筛选方法，一般以快速、简便、特异、敏感的方法为原则。 常用的方法有: 1. ELISA用于可溶性抗原蛋白质、细胞和病毒等McAb的检测。 2. RIA用于可溶性抗原、细胞McAb的检测。 3. FACS荧光激活细胞分类仪用于检查细胞
杂交瘤技术的基本原理
杂交瘤技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。这两种细胞分别是经抗原免疫的小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞。被特异性抗原免疫的小鼠脾细胞（B淋巴细胞）的主要特征是它的抗体分泌功能，但不能在体外连续培养，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即具有所谓永生性。在选择培养基的作用下，
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术（二）
2. HAT选择杂交瘤 一般在融合24 小时后，加HAT选择培养液。HT和HAT均有商品化试剂50×贮存，用时1 ml加入50 ml20 ％小牛血清完全培养液中。 因为在培养板内已加入饲养细胞、融合后的细胞，200 μl/孔。所以在加选择培养液时应加3倍量的HAT。我们认为，融合后最初补加的量可用
抗体的制备方法与原理2
骨髓瘤细胞的培养可用一般的培养液，如RPMI1640，DMEM培养基。小牛血清的浓度一般在10%～20%，细胞浓度以104～5×105/ml为宜，最大浓度不得超过106/ml。当细胞处于对数生长的中期时，可按1：3～1：10的比例传代。每3～5天传代一次。细胞在传代过程中，部分细胞可能有返祖现象，
单克隆抗体技术的克隆化的内容
从原始孔中得到的阳性杂交瘤细胞，可能来源于二个或多个杂交瘤细胞，因此它们所分泌的抗体是不同质的。为了得到完全同质的单克隆抗体，必须对杂交瘤细胞进 行克隆化。另一方面，杂交瘤细胞培养的初期是不稳定的，有的细胞丢失部分染色体，可能丧失产生抗体的能力。为了除去这部分已不再分泌抗体的细胞，得到分泌 抗体
单克隆抗体技术的方法克隆化操作过程
从原始孔中得到的阳性杂交瘤细胞,可能来源于二个或多个杂交瘤细胞,因此它们所分泌的抗体是不同质的。为了得到完全同质的单克隆抗体,必须对杂交瘤细胞进 行克隆化。另一方面,杂交瘤细胞培养的初期是不稳定的,有的细胞丢失部分染色体,可能丧失产生抗体的能力。为了除去这部分已不再分泌抗体的细胞,得到分泌 抗体稳定
培养干细胞的冻存
干细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-196℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。 1． 冻存细胞 （1）选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前1d换液。 （2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×10 7 ／ml左右密度，离心，去
单克隆抗体的制备步骤
过程1）免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。2）骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细胞
关于动物细胞工程的过程介绍
1）免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。2）骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细胞不能在
单克隆抗体的制备步骤
过程1）免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。2）骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细胞
关于动物细胞工程的过程介绍
1）免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。 2）骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备技术4
（二）细胞融合 1．细胞融合前准备 （1）骨髓瘤细胞系的选择：骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。常用的骨髓瘤细胞系见表2-4。表2-4用于融合试验的主要骨髓瘤细胞系名 称来 源耐 受 药 物Ig链H LP3/X63-Ag
细胞冻存与复苏
细胞冻存1. 实验前准备：细胞室及工作台紫外线照射15min；培养液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、恒温水浴箱37℃预热备用；收集对数生长期细胞，在冻存前一天最好换液2．用吸管吸出培养瓶中的细胞培养液，PBS清洗2遍吸出冲洗液，加入适量胰蛋白酶消化。3. 适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。吸管
单克隆抗体制备的流程
原理：B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力
动物细胞培养之细胞冻存与复苏
细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于一196~C液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。除此之外，还可以利用细
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术
1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单克隆抗体包括动物免疫
细胞株的培养、传代、冻存与复苏
1）细胞株的培养和传代 培养： 用于检测细胞因子的细胞株通常培养于含10％小牛血清和抗生素的培养液中，培养细胞因子依赖细胞株还有加入适量细胞因子。在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养，3～4天传代一次。 悬浮生长细胞的传代： 直接吸去或离心后吸去培养上清液，用新鲜培养
杂交瘤细胞的克隆化
融合后的细胞在孔里生长时，一般并不是一个单纯的克隆（一般是两个或者多个克隆，就算肉眼看到的是形成一个完整的克隆，但事实上可能是由两个或者多个原始的杂交瘤形成的），如果直接将其扩大培养将会产生两个问题：一是如果有两个或两个以上的克隆或一个克隆实际上是由两个克隆长在一起形成的，并且都分泌抗体，那么就有可
细胞的冻存与复苏实验_液氮冻存法
实验方法原理目前长时间保存细胞的方法是将细胞低温冻结保存在液氮中（－196 ℃），保存时间可长达一年甚至几年，用时解冻，大多数细胞仍能生长繁殖，为妥善起见，细胞冻存一年后应复苏培养后再冻存。冻存细胞时应加入保护剂，否则，细胞内外的水会结成冰晶，使细胞发生机械损伤。加入保护剂后，可使冰点降低，在缓慢冻
单克隆抗体技术的操作过程
动物免疫 (1) 抗原制备。制备单克隆抗体的免疫抗原，从纯度上说虽不要求很高，但高纯度的抗原使得到所需单抗的机会增加，同时可以减轻筛选的工作量。因此，免疫抗原是越纯越好，应 根据所研究的抗原和实验室的条件来决定。一般来说，抗原的来源有限，或性质不稳定，提纯时易变性，或其免疫原性很强，或所需单抗
单克隆抗体技术的操作过程
动物免疫(1) 抗原制备。制备单克隆抗体的免疫抗原，从纯度上说虽不要求很高，但高纯度的抗原使得到所需单抗的机会增加，同时可以减轻筛选的工作量。因此，免疫抗原是越纯越好，应 根据所研究的抗原和实验室的条件来决定。一般来说，抗原的来源有限，或性质不稳定，提纯时易变性，或其免疫原性很强，或所需单抗是用于抗
单克隆抗体的制备技术路线和关键点
动物的选择与免疫1．动物的选择 纯种BALB/C小鼠，较温顺，离窝的活动范围小，体弱，食量及排污较小，一般环境洁净的实验室均能饲养成活。目前开展杂交瘤技术的实验室多选用纯种BALA/C小鼠。2．免疫方案 选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。一般在融合前两个月左右根
细胞培养|细胞冻存技术原理
1. 细胞冻存是将细胞储存在低温环境中，减少细胞代谢，实现长期储存的一种技术。2. 在大多数细胞系中，细胞会随着衰老和演化不断的积累改变，造成表型和基因型的“培养漂移”，在冻存过程中，适当的操作和合适的冻存条件可以减少细胞特性的改变或丢失，起到细胞保种的作用。因而，正确且成功的冻存对于细胞的长久应用
细胞培养|细胞冻存技术原理
1. 细胞冻存是将细胞储存在低温环境中，减少细胞代谢，实现长期储存的一种技术。2. 在大多数细胞系中，细胞会随着衰老和演化不断的积累改变，造成表型和基因型的“培养漂移”，在冻存过程中，适当的操作和合适的冻存条件可以减少细胞特性的改变或丢失，起到细胞保种的作用。因而，正确且成功的冻存对于细胞的长久应用