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激光扫描共聚焦显微镜背景

激光扫描共聚焦显微镜(Laser scanning confocal microscope)是20世纪80年代中期发展起来并得到广泛应用的新技术 ,它是激光、电子摄像和计算机图像处理等现代高科技手段渗透,并与传统的光学显微镜结合产生的先进的细胞分子生物学分析仪器,在生物及医学等领域的应用越来越广泛,已经成为生物医学实验研究的必备工具 。 传统荧光显微镜使用荧光物质标志细胞中的特定结构,不仅图像与背景的对比度增强,而且由于许多荧光显微镜的光源使用短波长的紫外光,大大提高了分辨率(δ=0.61·λ/NA,其中δ为显微镜的分辨率;λ为照明光线的波长;NA 为物镜的数值孔径)。但当所观察的荧光标本稍厚时,传统荧光显微镜一个难以克服的缺点就显现出来:焦平面以外的荧光结构模糊、发虚。原因是大多数生物学标本是层次区别的重叠结构(如耳蜗基底膜。其实是外毛细胞 、多种支持细胞 、神经纤维等组成的空间结构),,在普通光学显微镜下聚焦平面的变化......阅读全文

激光扫描共聚焦原理和样品前期处理

  1、激光扫描共聚焦显微镜用途  激光扫描共聚焦显微镜(Confocal laser scanning microscope,CLSM)是近代最先进的细胞生物医学分析仪器之一。目前,激光扫描共聚焦显微技术已用于细胞形态定位、立体结构重组、动态变化过程等研究,并提供定量荧光测定、定量图像分析等实用研

激光扫描共聚焦显维镜定量分析的优势和注意事项

  激光扫描共聚焦显微镜与图像半定量分析相比,具有以下优点:   1.更精细、精确度更高。激光扫描共聚焦显微镜对免疫荧光组织化学染色样品做定量分析时,利用激光聚焦和系统软件分析对组织进行深层扫描,不破坏组织细胞结构,可深层次准确定位并精确定量。而一般图像分析只是以荧光灰度的差别变化进行半定量

激光扫描共聚焦显维镜定量分析的优势和注意事项

  激光扫描共聚焦显微镜与图像半定量分析相比,具有以下优点:   1.更精细、精确度更高。激光扫描共聚焦显微镜对免疫荧光组织化学染色样品做定量分析时,利用激光聚焦和系统软件分析对组织进行深层扫描,不破坏组织细胞结构,可深层次准确定位并精确定量。而一般图像分析只是以荧光灰度的差别变化进行半定量分

原子力激光共焦显微镜的使用需求判断

原子力激光共焦显微镜的主要原理是利用激光扫描束通过光栅针孔形成点光源,在荧光标记标本的焦平面上逐点扫描,采集点的光信号通过探测针孔到达光电倍增管,再经过信号处理,在计算机监视屏上形成图像。对于物镜焦平面的焦点处发出的光在针孔处可以得到很好的会聚,可以全部通过针孔被探测器接收。而在焦平面上下位置发出的

细胞研究用的显微镜分类和工作原理

  显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同,可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光(紫外线显微镜以紫外光)为光源,后者则以电子束为光源。   —、光学显微镜   (一)、普通光学显微镜   普通生物显微镜由3部分构成,即:①照明系统,包括光源和聚光器;②光学放大系统,由物镜和目镜组

细胞研究用的显微镜分类和工作原理

  显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同,可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光(紫外线显微镜以紫外光)为光源,后者则以电子束为光源。   —、光学显微镜   (一)、普通光学显微镜   普通生物显微镜由3部分构成,即:①照明系统,包括光源和聚光器;②光学放大系统,由物镜和目镜组

膜厚三维形貌测量中是如何提高工作效率

需要在高度方向上做扫描,得到一系列的切片图,然后进行图像叠加并得到三维图像,从而提高景深范围。相对于传统的光学显微镜,激光共聚焦显微镜其横向分辨率提高40%以上,优秀可达120nm。激光共聚焦显微镜样品适用性强,非接触测试,无需样品制备和导电性处理,对样品无损伤(粉末、软性样品以及透明样品均可测试)

挑战更高效的高内涵分析:In Cell Analyzer高内涵分析系统

高内涵成像技术已成为不可缺少的工具,推进我们在细胞水平了解人体是如何工作的。——Anthony Davies,都柏林大学圣三一学院 高内涵研究中心主管  高内涵分析(High Content Analysis,简称HCA)是对高分辨率显微镜所拍摄细胞图像的自动提取和分析。高内涵,意味着丰富

激光扫描共聚焦显微镜技术原理

光学显微镜作为细胞生物学的研究工具,可以分辨出小于其照明光源波长一半的细胞结构。随着光学、视频、计算机等技术飞速发展而诞生的激光扫描共聚焦显微镜 (Laser Scanning Confocal Microscope,LSCM),则使现代显微镜有能力研究和分析细胞在变化过程中的结构。特别是

显微技术(图)

显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同,可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光(紫外线显微镜以紫外光)为光源,后者则以电子束为光源。—、光学显微镜(一)、普通光学显微镜普通生物显微镜由3部分构成,即:①照明系统,包括光源和聚光器;②光学放大系统,由物镜和目镜组成,是显微镜的主体,为了消除

双光子显微镜简介

双光子荧光显微镜是结合了激光扫描共聚焦显微镜和双光子激发技术的一种新技术。双光子激发的基本原理是:在高光子密度的情况下,荧光分子可以同时吸收 2 个长波长的光子,在经过一个很短的所谓激发态寿命的时间后,发射出一个波长较短的光子;其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子是相同的。双光子

双光子荧光显微镜的技术特点和使用技巧

  双光子荧光显微镜是结合了激光扫描共聚焦显微镜和双光子激发技术的一种新技术。   双光子激发的基本原理是:在高光子密度的情况下,荧光分子可以同时吸收 2 个长波长的光子,在经过一个很短的所谓激发态寿命的时间后,发射出一个波长较短的光子;其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发

快速了解激光共聚焦成像

  激光扫描共聚焦显微镜(Confocal laser scanning microscope,简称CLSM)是近代生物医学图象仪器。它是在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置,使用紫外光或可见光激发荧光探针。  利用计算机进行图象处理,从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图象,以及在亚细胞水平上

双光子荧光显微镜的技术特点和使用技巧

  双光子荧光显微镜是结合了激光扫描共聚焦显微镜和双光子激发技术的一种新技术。  双光子激发的基本原理是:在高光子密度的情况下,荧光分子可以同时吸收 2 个长波长的光子,在经过一个很短的所谓激发态寿命的时间后,发射出一个波长较短的光子;其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子是相同的。双

什么是激光共聚焦显微镜?

  激光共聚焦显微镜是20世纪80年代中期发展起来并得到广泛应用的新技术 ,它是激光、电子摄像和计算机图像处理等现代高科技手段渗透,并与传统的光学显微镜结合产生的先进的细胞分子生物学分析仪器,在生物及医学等领域的应用越来越广泛,已经成为生物医学实验研究的必备工具 。   传统荧光显微镜使用

双光子荧光显微镜的技术特点和使用技巧

双光子激发的基本原理是:在高光子密度的情况下,荧光分子可以同时吸收 2 个长波长的光子,在经过一个很短的所谓激发态寿命的时间后,发射出一个波长较短的光子;其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子是相同的。双光子激发需要很高的光子密度,为了不损伤细胞,双光子显微镜使用高能量锁模脉冲激光器。

共定位分析应通过获得薄的光学切片来进行

对于厚度小于 5μm 的样品,比如贴壁细胞或很薄的组织切片,在常规的宽场荧光显微镜下,定量的共定位分析一般是可以的。然而,对于厚样品,图像应以具有一定轴向尺寸的光学切片来记录,来分析看起来共定位的荧光团是否真正位于同一个侧向焦平面上,或在 Z 轴上他们是否彼此叠加。厚样品的荧光团共定位分析应通过获得

激光共聚焦显微镜的原理

  在普通宽视野光学显微镜中,整个标本全部都被水银弧光灯或氙灯的光线照明,图像可以用肉眼直接观察 。 同时,来自焦点以外的其他区域的荧光对结构的干扰较大,尤其是标本的厚度在 2um 以上时,其影响更为明显。  激光共聚焦显微镜脱离了传统光学显微镜的场光源和局部平面成像模式采用激光束作光源,激光束经照

多光子共聚焦扫描显微镜的原理以及应用

多光子共聚焦显微镜是光学显微镜的重大改进,主要表现为可以观察活细胞、固定细胞和组织的深层结构,并且可以得到清晰锐利的多层Z平面结构,即光学切片,并以此可以构建标本的三维实体结构。共聚焦显微镜采用激光光源,经过扩充后充满整个物镜后焦平面,然后经过物镜的透镜系统,在标本的焦平面上会聚成非常小的点。根据物

显微镜选购分类及相关依据

显微镜分类一、 按使用目镜的数目可分为单目、双目和三目显微镜。单目价格比较便宜,可以作为初学爱好者或者学生的选择,双目稍贵点,观察的时候两眼可以同时观察,观察得舒适些,三目又多了一目,它的作用主要是连接数码相机或电脑用,比较适合长时间工作的人员选用。  二、显微镜分类根

超分辨显微技术浅析

光学显微成像的衍射极限 生物医学成像技术是基础生物学研究和临床医学最重要的工具之一。回顾历史,已有多位科学家凭借在成像技术方面的突破获得诺贝尔奖。其中,Roentgen 因发现 X 射线获得 1901 年诺贝尔物理学奖; Zernike 因发明相衬显微镜获得 1953 年诺贝尔

超分辨显微技术浅析

光学显微成像的衍射极限生物医学成像技术是基础生物学研究和临床医学最重要的工具之一。回顾历史,已有多位科学家凭借在成像技术方面的突破获得诺贝尔奖。其中,Roentgen 因发现 X 射线获得 1901 年诺贝尔物理学奖; Zernike 因发明相衬显微镜获得 1953 年诺贝尔物理学奖; Ruska

超分辨率显微镜实现自由运动神经环路高分辨成像

  提到在体小动物神经成像,人们自然会联想到钙离子荧光探针局部注射或遗传钙指示剂(如Gcamp家族)结合双/三光子显微镜的经典在体成像组合。  随着基因改造技术的突飞猛进,通过病毒转染和转基因技术,在神经元内源性表达“基因编码类钙指示剂(genetically encoded calcium ind

MemGlow™质膜染色荧光探针在膜标记领域的应用(二)

       MemGlow™应用程序很简单,当将MemGlow™探针引入水性介质中时,两亲性探针会形成自发淬灭性的聚集体,直到与质膜的接触引发其解离并分散到脂质双层中。整合后,荧光探针即可进行生物成像。从MemGlow™488到MemGlow™700,M

中科院苏州医工所 图像扫描显微成像技术研究取得进展

  激光扫描共聚焦显微镜是研究亚微米细微结构的有效手段,广泛应用于生物医学、材料检测等领域,是从事生物医学和材料科学研究的科技工作者必备的研究工具。然而,在共聚焦显微镜中,其分辨率与信噪比相互矛盾,不能同时实现高分辨率和高信噪比。近年来出现的基于共聚焦显微成像的图像扫描显微成像技术解决了这一问题,可

11月23日《科学》杂志内容精选

    地球环境噪音披露内部深处的线索  一种基于地震噪声,即地球的集体“嗡嗡声”的新技术正在帮助科学家们探索我们行星的内部深处。地球的表面受到了大气压变化、海浪、雨、风和喧闹的人类活动的持续性的轰击。这些力产生了作为地球背景噪声一部分的地震波。人类无法听到地震噪声,但我们可以看到它

拉曼光谱技术综述

   【摘要】本文从拉曼散射原理出发,介绍了拉曼技术的特征,以及拉曼技术的优势和不足,从激光技术和纳米技术出发介绍了当前拉曼技术的广泛发展和应用。综述了近年来了曼技术的主要的分析技术。涉及拉曼光谱技术的发展简史,发展现状和最新研究进展等方面。  1、拉曼光谱的发展简史  印度物理学家拉曼于1928年

钙离子荧光探针类型大盘点

钙离子在许多生理过程中起着复杂的作用。例如,细胞内钙离子在促进神经元从神经元中释放神经递质的信号转导途径中必不可少,并参与所有肌肉细胞收缩所需的机制。细胞离子浓度受被动和主动离子通道和泵的调节。离子通道和泵的故障可能导致离子浓度调节不当,从而产生不利于正常细胞功能的不利条件。钙离子浓度研究领域中常使

拉曼药学应用

  1 激光共聚焦显微拉曼光谱技术简介   拉曼信号是一种由入射光引起的分子的非弹性散射信号,拉曼光谱技术无需样品准备和制备过程,简单,可重复且能够进行无损伤定性定量分析。水的拉曼散射微弱,拉曼光谱也因此成为研究水溶液中的生物样品和化学化合物的理想工具。激光共聚焦显微拉曼光谱技术是一种激光为基础的

探讨前沿科技成果 记2021北京激光共聚焦显微年会

  分析测试百科网讯 2021年4月10日,由北京市电镜学会主办、北京理化分析测试技术学会承办的北京市2021年度激光共焦及超高分辨显微学学术研讨会在北京隆重举行。本次研讨会共有近200人出席、参与。分析测试百科网作为会议合作媒体,为您带来全程跟踪报道。研讨会现场中国科学院动物研究所 王荣荣主任报告