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第一天：1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min；3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）；4. PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭30min；5. 吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗（使用浓度需要摸索，1：500前后摸索一下）并放入湿盒，4℃孵育过夜；第二天：6.加荧光二抗：PBST 浸洗爬片3次，每次3min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。7.复染核：滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBST 5min×4次洗去多余......阅读全文
细胞免疫荧光主要用于蛋白定位研究和细胞内信号转导，细胞免疫荧光技术是利用免疫技术和荧光标记技术相结合，原理就是利用抗原-抗体反应之后，采用荧光标记，标记完成后，显微镜下观察细胞内某种抗原成分的多少，从而做出一个定位研究，也可以为细胞内信号传导提供一个明确的指导，细胞免疫荧光具有敏感性强、特异性高、速
免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及
免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术
二、细胞凋亡的细胞化学测定细胞凋亡的细胞化学测定包括细胞表面（细胞膜）的结构和通透性改变的测定和细胞核DNA改变的测定。根据应用的范围，又可分为细胞群休和单个细胞测定两种，以下仅介绍其中几种较为常用的方法。碘化丙啶（propidium iodide,PI）检测早期死亡细胞膜通透性状态的不同是区分细胞
细胞免疫荧光可应用于：可以观察组织或细胞内抗原物质的定位，以及一些特殊信号分子蛋白的出核/入核的定位变化。实验方法原理在进行细胞免疫荧光过程中，需要用到细胞爬片，通过将爬片浸在细胞培养基内，细胞在爬片上生长，进而进行细胞的免疫荧光。实验材料细胞样品试剂、试剂盒多聚甲醛70%甲醇丙酮PBSTriton
圆形（φ24mm、φ20mm、φ14mm、φ8mm）。分别对应6孔板配套用细胞爬片、12孔板配套用细胞爬片、24孔板配套用细胞爬片、48孔板配套用细胞爬片。在医学生物研究中，免疫荧光检测等需用到细胞爬片。细胞爬片就是让玻片浸在细胞培养基内，细胞在玻片上生长。主要用于组织学，免疫组织化学，冰冻切片，细
细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式，根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别，可以将二者区别开来。细胞凋亡的检测方法有很多，下面介绍几种常用的测定方法。 第一种 细胞凋亡的形态学检测 根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。
细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式，根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别，可以将二者区别开来。细胞凋亡的检测方法有很多，下面介绍几种常用的测定方法。一、细胞凋亡的形态学检测 根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。 1 光学显微镜和倒
不同细胞不同状态是有不同死法的，具体是细胞凋亡、坏死、还是程序性坏死，需要进一步排查分析来确定。而细胞凋亡是个复杂的过程，针对凋亡时期不同，检测的方法有所不同。那如何去确定哪条途径被触发，在哪个步骤被阻断，以及抑制剂是否能够抑制呢？下面介绍几种常用的测定方法。 一：细胞凋亡的形态学检测 发生
酶分离法 实验方法原理 运用显微手术器械在肉眼下仔细剔除膀胱黏膜层及浆膜层后，完整分离膀胱平滑肌层
酶分离法 实验方法原理 运用显微手术器械在肉眼下仔细剔除膀胱黏膜层及浆膜层后，完整分离膀胱平滑肌层
兔膀胱平滑肌细胞培养可以：（1）分离得到高纯度兔膀胱平滑肌细胞；（2）进行细胞学鉴定研究；（3）用于细胞学其他研究。实验方法原理运用显微手术器械在肉眼下仔细剔除膀胱黏膜层及浆膜层后，完整分离膀胱平滑肌层。然后以酶分离法获取兔膀胱平滑肌细胞，体外原代和传代培养分离细胞。在倒置显微镜下观察细胞形态及生长
实验方法原理 运用显微手术器械在肉眼下仔细剔除膀胱黏膜层及浆膜层后，完整分离膀胱平滑肌层。然后以酶分离法获取兔膀胱平滑肌细胞，体外原代和传代培养分离细胞。在倒置显微镜下观察细胞形态及生长状况，同时进行细胞爬片H-E染色和透射电镜等形态学观察分析，并应用免疫荧光染色平滑肌特有的α-肌动蛋白进行细胞学鉴
（一）细胞膜蛋白分子的检测原理：细胞膜表面的抗原或受体可特异地与相应的抗体或配体结合，将针对细胞表面抗原的抗体或配体用不同的荧光素标记，根据不同荧光物质的最大激发和发射波长的不同，即可准确定量每种荧光物质的强度，从而推出相应细胞表面抗原表达量1 直接法：细胞＋荧光素标记的抗CD分子的抗体→4ºC反应
（2）间接法：细胞→3％多聚甲醛固定和渗透化→封闭→针对蛋白的特异抗体→洗涤→荧光素标记的二抗→洗涤 → 荧光显微镜观察或流式细胞计分析凋亡相关蛋白TFAR19蛋白的表达和细胞定位分析TFAR19（PDCD5）是由本研究室在国际上首先报导的一个拥有自己知识产权的人类新基因，前期的功能研究表明，它是促
免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。一．传统的免疫
激光共聚焦显微镜可以观察到细胞内已经标记好的蛋白质和分子，为生物学研究提供了更直观的观测方法。如今，激光共聚焦成像已经是一个非常常规的实验操作，应用于生物学各个研究领域中。 在细胞实验中，如果要进行一次激光共聚焦成像，除了要知道相关的显微镜参数设置和操作以外，样品的准备也是非常重要的一环。
激光共聚焦显微镜可以观察到细胞内已经标记好的蛋白质和分子，为生物学研究提供了更直观的观测方法。如今，激光共聚焦成像已经是一个非常常规的实验操作，应用于生物学各个研究领域中。 在细胞实验中，如果要进行一次激光共聚焦成像，除了要知道相关的显微镜参数设置和操作以外，样品的
1、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。2、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞
一、细胞凋亡的形态学检测1、光学显微镜和倒置显微镜（1） 未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。（2） 染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋
1. 爬片可用一般的盖玻片，也可用爬片； 2. 应用盖玻片，可根据自己的需要剪裁成合适的大小，以备置于 6 孔板、12 孔板或 24 孔板；裁剪时可用前护士输液用于打开玻璃安瓶的小沙轮，或者是口腔科
AO / EB原理与流程zhongyisheng:1、原理：吖啶橙(AO)能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，使之发出明亮的绿色荧光。溴乙锭(E仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。凋亡的细胞呈现为染色增强，荧光更为明亮，均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。非凋亡细胞核呈现荧光深浅
为了更好的帮助客户提供真实的原代细胞，使用免疫荧光鉴定出提取的细胞类型，免疫荧光技术又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。 一下是赛百慷技术人员提供的免疫荧光细胞鉴定的步骤，仅做
六、Caspase-3活性的检测 Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个
细胞的免疫荧光实验是一个基础的细胞实验，传统的方法是在培养板中放入预先处理好的盖玻片，待细胞贴壁后，使用镊子将盖玻片拿出再开始进行固定，染色等系列工作。 现在分享一种简便的免疫荧光方法，无需爬片，培养-操作-镜检，在一个培养皿/载玻片上完成所有工作！一气呵成！使用如图的培养皿和载玻片，免疫
一、量子点免疫荧光组织化学原理量子点免疫荧光组织化学（Quantum Dots based Immunohistochemistry, QD-IHC）又称量子点免疫荧光细胞化学，是根据抗原—抗体特异性结合的原理，用量子点标记特异性抗体作为探针，检测组织或细胞中抗原性物质的一种技术。量子点免疫荧光组化
免疫组织化学的概念： 免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。 免疫组化实验所用的抗体有哪些？ 免疫组化实验中
方法：1 、悬浮细胞的染色；（1）收获正常和诱导凋亡的细胞（0.5~1′106），PBS洗2次，1000rpm′10min。（2）3%多聚甲醛冰浴10min，PBS洗2次，1000rpm′10min。（3）加入PBS-T溶液，37℃孵育15min，PBS洗2次，1000rpm′10min。（4）加入
一、免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)免疫组织化学是利用抗原抗体的特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。免疫组织化学染色技术不仅有较高的敏感性
实验原理： 抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原