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什么是绿色荧光蛋白?

绿色荧光蛋白分子的形状呈圆柱形,就像一个桶,负责发光的基团位于桶中央,因此,绿色荧光蛋白可形象地比喻成一个装有色素的“油漆桶”。装在“桶”中的发光基团对蓝色光照特别敏感。当它受到蓝光照射时,会吸收蓝光的部分能量,然后发射出绿色的荧光。利用这一性质,生物学家们可以用绿色荧光蛋白来标记几乎任何生物分子或细胞,然后在蓝光照射下进行显微镜观察。原本黑暗或透明的视场马上变得星光点点——那是被标记了的活动目标。对生物活体样本的实时观察,在绿色荧光蛋白被发现和应用以前,是根本不可想象的。而这种彻底改变了生物学研究的蛋白质,最初是从一种广泛生活于太平洋海域的发光水母体内分离得到的。 在大自然中,具有发光能力的生物有不少,萤火虫是陆地上最为我们所熟悉的发光生物,中国古代还有“捕萤数百入囊内照明夜读”的佳话。在海洋里,某些水母、珊瑚和深海鱼类也有发光的能力。特别是有的肉食性鱼类专门靠一条闪着荧光的触角来把其他小鱼吸引到自己的嘴边,《海底总动员......阅读全文

三位荧光蛋白研究先驱获诺贝尔化学奖

多色荧光蛋白在所跟踪细胞中的图示。 下村修现年80岁的下村修1928年出生于日本京都府,1960年获得名古屋大学理学博士学位后赴美,先后在美国普林斯顿大学、波士顿大学和伍兹霍尔海洋生物实验所工作。他1962年从一种水母中发现了荧光蛋白,被誉为生物发光研究第一人。 ▲马丁·沙尔

“点亮了生物学”的故事

  荧光蛋白标记神经细胞是研究大脑的一项重要的工具,带动了脑彩虹等技术的发展。刚刚去世的华裔科学家钱永健则为改造绿色荧光蛋白做出了重要的工作,改变了荧光蛋白分子的一个氨基酸,使其发光更强、更稳定。  美国乔治城大学吴建永教授曾在2014年介绍脑彩虹技术时着重介绍了荧光蛋白的故事。为纪念钱永健博士对科

自噬流的检测方法

  自噬是真核细胞降解长寿蛋白、错误折叠蛋白和受损细胞器的重要生物学过程。细胞自噬由多个步骤组成, 其中包括: ① 吞噬泡的形成; ② 自噬体的形成; ③ 自噬体与溶酶体融合形成自噬溶酶体; ④ 自噬溶酶体的降解。自噬流是这些步骤在细胞内连续出现的动态过程, 自噬流中的任一环节出现障碍自噬将无法完成

解读2008诺贝尔自然科学奖:解决人类的难题

从今年的诺贝尔科学奖中我们能获得什么启示?在欢欣鼓舞的背后,我们发现,奖项内容的字里行间,闪现着一些让人类不太如意的负面词汇:疾病、艾滋、肿瘤…… 当世界越来越幸福的时候,我们应该注意到:苦难依然此起彼伏。世上没有皇帝神仙,解决它们只能从我们的思想降临开始。 2008诺奖:人类的难题 □文/本

活体生物发光成像技术的最新进展

活体动物体内光学成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence)两种技术。生物发光是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA,而荧光技术则采用荧光报告基团(GFP、RFP, Cyt及dyes等)进

形形色色的蛋白标签(一)

  一提到蛋白研究,首先跳入脑海的当然是抗体。的确,很多蛋白实验都离不开抗体。然而,即使抗体公司时不时推出新产品,但许多蛋白还是没有相应的抗体,我们只能望电脑兴叹。而且,也有很多抗体无能为力的情况,比如观察蛋白在细胞内的运输。所幸,各种各样的蛋白标签让我们能够从容应对这些挑战。   遗传标签  

图解光诱导荧光蛋白系统

GFP蛋白曾经为蛋白质定位等相关研究带来革命性的进展,而随着具有和GFP类似遗传学特征的光学指示剂蛋白的出现,蛋白质相关的动态研究也将获得更多的手段和技术,本文详细介绍了激光诱导荧光系统在蛋白质研究中的应用。 近年来随着蛋白质学研究的进展,研究人员相继发现和特异克隆了一些特殊蛋白质。这些蛋

超分辨显微技术浅析

光学显微成像的衍射极限 生物医学成像技术是基础生物学研究和临床医学最重要的工具之一。回顾历史,已有多位科学家凭借在成像技术方面的突破获得诺贝尔奖。其中,Roentgen 因发现 X 射线获得 1901 年诺贝尔物理学奖; Zernike 因发明相衬显微镜获得 1953 年诺贝尔

超分辨显微技术浅析

光学显微成像的衍射极限生物医学成像技术是基础生物学研究和临床医学最重要的工具之一。回顾历史,已有多位科学家凭借在成像技术方面的突破获得诺贝尔奖。其中,Roentgen 因发现 X 射线获得 1901 年诺贝尔物理学奖; Zernike 因发明相衬显微镜获得 1953 年诺贝尔物理学奖; Ruska

绿色荧光蛋白在自然生活中起到的作用

  绿色荧光蛋的发光机理比荧光素/荧光素酶要简单得多。一种荧光素酶只能与相对应的一种荧光素合作来发光,而绿色荧光蛋白并不需要与其他物质合作,只需要用蓝光照射,就能自己发光。  在生物学研究中,科学家们常常利用这种能自己发光的荧光分子来作为生物体的标记。将这种荧光分子通过化学方法挂在其他不可见的分子上

狂言50年要拿30个诺奖的日本,如今怎么样了?

  2019年10月9日,日本化学家吉野彰(Akira Yoshino)因在锂离子电池的发明和应用领域做出的卓越贡献,与美国科学家 John B. Goodenough、英国科学奖 M. Stanley Whittingham 一起荣获2019年诺贝尔化学奖。吉野彰成为日本第27位诺贝尔奖得主。  

那个要50年拿30个诺奖的日本,如今怎么样了?

  2019年10月9日,日本化学家吉野彰(Akira Yoshino)因在锂离子电池的发明和应用领域做出的卓越贡献,与美国科学家 John B. Goodenough、英国科学奖 M. Stanley Whittingham 一起荣获2019年诺贝尔化学奖。吉野彰成为日本第27位诺贝尔奖得主。  

微生物细胞体内实现多色荧光信号的同时成像

  荧光蛋白的发现革新了生命科学的研究,应用荧光蛋白可以观测到细胞内部的活动,例如荧光蛋白可以标记特定的蛋白,也可以作为报告探针用于检测特定基因的活性。荧光蛋白的开发和进化使其光谱得到了全面的扩展,也使得多个荧光蛋白的同时使用成为可能。  目前,多色成像较多局限于两个荧光蛋白的同时使用。通常是选取两

我国学者研制多色荧光成像技术,可精准分离特定信号

  荧光蛋白的发现革新了生命科学的研究,应用荧光蛋白可以观测到细胞内部的活动,例如荧光蛋白可以标记特定的蛋白,也可以作为报告探针用于检测特定基因的活性。荧光蛋白的开发和进化使其光谱得到了全面的扩展,也使得多个荧光蛋白的同时使用成为可能。图:(左)1-4色荧光报告系统的质粒系统示意图,(右)串色校正后

饶毅:美妙的生物荧光分子与好奇的生物化学家

下村修 做出应获诺贝尔奖工作的科学家,几十年默默无闻;  被广泛应用的分子,很少人知其发现者; 原始论文鲜为人知,后继论文倒很热门;  曾失明的人,发现了美丽的发光蛋白; 低调的父亲,出了高调的儿子。  这里简介一项生物化学研究,讲一个科学家的故事,

【分享】几种常用的蛋白标签的功能和优点

  重组蛋白表达技术现已经广泛应用于生物学各个具体领域。特别是体内功能研究和蛋白质的大规模生产都需要应用重组蛋白表达载体。本文将简要介绍几个常用的蛋白标签及其功能和优点。  一. GST标签  GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 标签蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶,它的天然大小为26KD。

活体动物体内光学成像(七)

关于生物发光与荧光及其它技术的比较 34. 荧光检测与生物发光检测的优势与劣势比较如何?  荧光发光需要激发光,但生物体内很多物质在受到激发光激发后,也会发出荧光,产生的非特异性荧光会影响到检测灵敏度。特别是当发光细胞深藏于组织内部,则需要较高能量的激发光源,也就会产生很强的背景噪音。作为

张锋:如何在34岁跻身于世界顶尖生物学家?

  豉汁蒸凤爪端上桌后,一个小女孩顽皮地用筷子哒哒地敲打着餐桌。一位穿着Polo衫和牛仔裤的男士,正在和自己的小女儿、妻子和母亲享用着广式点心。在波士顿唐人街这个喧闹的餐厅,没人会多瞄一眼这位男青年。  没人能猜到,34岁的张锋会是这一代人中公认的最具转化能力的生物学家,在不久的将来可能会在两个领域

人肺癌裸鼠原位移植模型的建立实验

实验方法原理 利用逆转录病毒转染法将增强型绿色荧光蛋白基因导入人肺癌大细胞系NCI-H460,采用外科原位移植法建立肺癌原位移植模型。定期通过小动物活体荧光成像系统观察肿瘤生长,利用相关性检验分析荧光面积和肿瘤体积之间的相关关系,并观察原位移植术后裸鼠的生存期和肿瘤转移情况。

人肺癌裸鼠原位移植模型的建立实验

实验方法原理 利用逆转录病毒转染法将增强型绿色荧光蛋白基因导入人肺癌大细胞系NCI-H460,采用外科原位移植法建立肺癌原位移植模型。定期通过小动物活体荧光成像系统观察肿瘤生长,利用相关性检验分析荧光面积和肿瘤体积之间的相关关系,并观察原位移植术后裸鼠的生存期和肿瘤转移情况。实验材料 BALB cn

人肺癌裸鼠原位移植模型的建立实验——外科原位移植法

人肺癌裸鼠原位移植模型的建立可用于:(1)建立一个良好的肺癌动物实验研究平台;(2)实时监测原发肿瘤的生长和转移;(3)在细胞和分子水平对活体内的生理和病理过程进行定性或定量可视化观察。实验方法原理利用逆转录病毒转染法将增强型绿色荧光蛋白基因导入人肺癌大细胞系NCI-H460,采用外科原位移植法建立

我国首例荧光克隆猪怀孕 明年1月当妈妈

东北网12月25日电 记者日前从负责转基因克隆猪项目的东北农业大学生命科学学院了解到,去年出生的3头绿色荧光克隆猪都已怀孕,明年1月份,它们就要当上“妈妈”了。 据该课题组的科研人员尹智介绍,一年多来,在课题组成员和专门饲养员的精心照顾下,3头小猪生长很快。目前发育良好,体重达标,并已经通过正常与

【技术指南】流式细胞仪和流式细胞术

Jay Haron Ph. D.   jay.haron@gmail.com   BD Biosciences, San Diego, United States 引用 实验材料和方法  从1968年最

常见发光免疫分析技术的比较

发光免疫分析是一种灵敏度高、特异性强、检测快速及无放射危害的分析技术。70年代末以来得到了迅速发展,目前在国际上已经实现商品化和产业化的发光免疫分析产品,基本上可以分为:化学发光、时间分辨荧光(也称时间延迟光致发光)、电化学发光(也称场致发光和电致发光)几种。   &n

常见发光免疫分析技术的比较

免疫学技术的迅速发展对精度的要求越来越高,一般的酶免检测技术已逐渐无法适应这种形势的需要。现今发展的主流已不再是用放射性同位素标记的测定方法(避免污染环境及对人体损害),而是转向于能在任何地方操作的快速均相和固相测定,最终趋向于能够检测到皮克或10负18摩尔级的、非同位素的、自动或半自动的实验室测定

利用“无创”技术检测活细胞中荧光蛋白表达(一)

简介在过去的五年中,荧光蛋白在监测体内生物学研究中,起到越来越重要的作用。源于维多利亚多管发光水母中的绿色荧光蛋白(GFP)是最早被我们应用的荧光蛋白,但是随着时间的推移,现在我们可以使用的荧光蛋白种类也越加丰富,包括加强型的变异GFP蛋白、从其他种类水母中发现的荧光蛋白和珊瑚礁蛋白。它们都可以在众

盘点:31项与免疫学有关的分子生物学实验技术

  现代分子生物学和免疫学的进展加深了我们对许多疾病的了解,并且导致了免疫新策略的产生,免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。本文盘点了与免疫学有关的分子生物学实验技术汇总。  一、GST pull-down实验  GST是指谷胱甘肽巯基转移酶,GST pull-down实验是一个行之有效的验

酶标仪利用”无创”技术检测活细胞荧光蛋白(一)

简介在过去的五年中,荧光蛋白在监测体内生物学研究中,起到越来越重要的作用。源于维多利亚多管发光水母中的绿色荧光蛋白(GFP)是最早被我们应用的荧光蛋白,但是随着时间的推移,现在我们可以使用的荧光蛋白种类也越加丰富,包括加强型的变异GFP蛋白、从其他种类水母中发现的荧光蛋白和珊瑚礁蛋白。它们都可以在众

流式细胞术常见问题问答

1、流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的? FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度, FL2-H是指脉冲高度。通常在做细胞周期分析时应用,用于去除粘连细胞。 2、流式同型对照怎样选择? 同型对照(Isotype Control):使用与一抗相同

日本培育出可复制人类疾病的荧光猴

  图片来源:Hideyuki Okano/Keio University; Erika Sasaki/CIEA   北京时间5月28日消息,据国外媒体报道,日本科学家5月27日宣布,他们已经培育出世界上第一批可以复制人类疾病并且会发光的转基因灵长类动物。在一种基因的帮助下,他们让培育出的狨猴