二抗孵育时间及注意事项
二抗孵育（Secondary antibody inucubation） 参考二抗的说明书，按照适当比例用封闭液稀释辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗。 吸尽洗涤液后，立即加入稀释好的二抗，室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。回收二抗。然后加入Western洗涤液，在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟。吸尽洗涤液后，再加入洗涤液，洗涤5-10分钟。共洗涤3次。如果结果背景较高可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。 前2步洗涤是为了洗去一抗和二抗的非特异性结合，洗涤的效果直接影响结果背景的深浅，所以洗涤一定要干净。洗涤液使用 TBST 或者 PBST,其中的 Tween20 有助于去除非特异性的结合，减少背景。同时短时间多次的洗膜（如 5-6次，每次 3分钟）比长时间少次数的洗膜更有效。 ......阅读全文
二抗孵育时间
二抗孵育时间为1至2小时。参考二抗的说明书，按照适当比例用封闭液稀释辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗。吸尽洗涤液后，立即加入稀释好的二抗，室温在摇床上缓慢摇动孵育1至2小时。回收二抗。二抗的浓度一般要参照抗体说明书选择最适当的比例。一抗二抗的选择直接影响实验结果以及背景的深浅。要严格保证反应时间，
二抗孵育久了会怎样
孵育过夜一般多见于封闭液。二抗孵育过夜比较少见。因为二抗中酶的活性可能容易受到影响，并且如果在二抗孵育阶段有微生物滋生，后续洗涤步骤少，容易干扰显色。二抗浓度太高、孵育时间太长了 。洗膜不够,可以尝试3次,每次15min 。如果片子全黑,要考虑胶片是不是已经曝光了。
elisa二抗孵育过夜影响结果吗
孵育过夜一般多见于封闭液。二抗孵育过夜比较少见。因为二抗中酶的活性可能容易受到影响，并且如果在二抗孵育阶段有微生物滋生，后续洗涤步骤少，容易干扰显色。
二抗孵育时间及注意事项
参考二抗的说明书，按照适当比例用封闭液稀释辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗。 吸尽洗涤液后，立即加入稀释好的二抗，室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。回收二抗。然后加入Western洗涤液，在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟。吸尽洗涤液后，再加入洗涤液，洗涤5-10分钟。共洗涤3
二抗孵育时间及注意事项
二抗孵育（Secondary antibody inucubation） 参考二抗的说明书，按照适当比例用封闭液稀释辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗。 吸尽洗涤液后，立即加入稀释好的二抗，室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。回收二抗。然后加入Western洗涤液，在摇床上缓慢摇动
一抗和二抗浓度和孵育时间有什么要求
一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
二抗四度孵育一个小时可以吗
可以的二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。
二抗四度孵育一个小时可以吗
可以的二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。
免疫组化的一抗和二抗浓度和孵育时间有什么要求
一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
免疫组化的一抗和二抗浓度和孵育时间有什么要求
一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
免疫组化的一抗和二抗浓度和孵育时间有什么要求
一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
免疫组化的一抗和二抗浓度和孵育时间有什么要求
一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
免疫组化的一抗和二抗浓度和孵育时间有什么要求
一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
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一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
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一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
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一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
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一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
免疫组化的一抗和二抗浓度和孵育时间有什么要求
一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
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western－blot－一抗孵育过夜具体是指孵育多少小时
一抗孵育过夜操作方法：下班时间——孵育一抗——放置在4℃冰箱内——第二天上班拿来孵育二抗时间8~10个小时，都行，
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