qpcr内参基因选择为什么CT值不能太低或者太高
CT值过高说明模板量太高，过低可能是模板量低或者背景过高，这两种情况都会导致结果不准确，一般内参ct值控制在16-18之间可以保证比较真实的结果......阅读全文
real－time－PCR实验为什么要使用内参基因
这个是根据定量PCR算法决定的，如果是相对定量，就需要内参，内参主要是使样品均一化，你做实验的时候，可能提取RNA时所用的样品是相同的，反转录时所用的mRNA的量是相同的，做定量PCR时所加的cDNA量也是相同的。但是你的样品是新长的部分，还是老的部分？反转录时是加相同的体积还是相同打质量，这些对结
吸光度超过1的值为什么不能用
吸光度为1表示所测物完全没有透光性，所以就没有测吸光度的意义了，在用分光光度计之前你得调零，以免出现这样的情况。
荧光定量PCR“相对定量”与“绝对定量”的区别
相对定量 相对定量，顾名思义，它的结果是一个相对的值，没有单位。与谁相对呢？就是传说中的“内参基因”，又名“持家基因”，即housekeeping gene。 那为什么在相对定量里一定需要它呢？ 打个比方：假如你要研究某个基因，提取完样品的RNA然后逆转录再做PCR，发现结果是
相对定量采用外参或者内参之间有何区别
内参标准和外参标准就是一种标准对照就是参照物。参照物按其性质不同可分为内参照和外参照。内参照是与目的基因加于同一反应管中，与目的基因同时进行扩增；而外参照则是参照物与目的基因的扩增分别在不同的管间进行。
qPCR溶解曲线TM值
tm>80℃_芙馇叻治隹梢杂美慈范ú煌姆从Σ铮ǚ翘匾煨圆铩?_芙馇?(Dissociation curve)：随温度升高，DNA的双螺旋结构降解程度的曲线。全部DNA双螺旋结构降解一半的温度称为溶解温度（Tm）。不同序列的DNA，Tm值不同。DNA中G－C含量越高，Tm值越高，成正比关系。不排除极度
qPCR溶解曲线TM值
tm>80℃随温度升高，DNA的双螺旋结构降解程度的曲线。全部DNA双螺旋结构降解一半的温度称为溶解温度（Tm）。不同序列的DNA，Tm值不同。DNA中G－C含量越高，Tm值越高，成正比关系。不排除极度偶然的情况：1.两个序列的溶解曲线一样 2.没有目标产物，只有一种非特异产物。
Western实验中内参基因的选择及使用方法
相关专题western blot实验western blot实验常用于检测蛋白表达量、蛋白表达产物的正确性等。相对于其他检测蛋白的方法而言Western Blot实验在蛋白的定性定量分析、与目的蛋白量的比较方面更简单一些。虽然，顺利的时候western blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦
RTPCR内参基因选择：除了βactin还能用什么？
Q1： 要做real-time pcr，而该种的β-actin未确定，我知道一般用持家基因作内参，但似乎其他基因各有缺点，有的作者用他们做内参时被SCI杂志要求用两个内参以证实，我想知道的是除了β-actin，哪个基因是SCI公认的内参基因(不用作两个内参了)?A1： 28S和18S rRNA甘油醛
Western实验中内参基因的选择及使用方法
Western Blot实验常用于检测蛋白表达量、蛋白表达产物的正确性等。相对于其他检测蛋白的方法而言Western Blot实验在蛋白的定性定量分析、与目的蛋白量的比较方面更简单一些。虽然，顺利的时候Western blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现
荧光定量PCR标准曲线有几个梯度
相对定量 相对定量得到的结果为特定样本中目的基因相对于另一参照样本的量的变化。 在某些不需要对基因进行绝对定量，只需要确定基因相对表达差异的情况下，如某样品在经过某种处理后目的基因表达量是增加了还是减少了，用相对定量的方法就可以得到结果，相对定量是一种更普遍、更简单的方法。 内参基因 实
为什么pcr中ct值远小于其实dna的数目
没有关系,可以继续按正常步骤计算.内参的CT值通常要控制在25-30,目的基因CT值高,只说明目的基因表达量比较低..
高度保守的两个基因，如何做qPCR
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引 物终浓度为100-40
BioTNT－mRNA－引物筛选，引物定制或specific－primers的使用说明2
1、 低速离心数秒，并且按照荧光PCR仪的使用说明放置好您的PCR管/条/板；2、 从下列表中选择最合适的实验反应条件，按照荧光PCR仪的使用说明设置好PCR反应条件： 荧光PCR仪 循 环 时 间
荧光定量pcrct值太高，怎么调退火温度
标准曲线按照标准曲线计算般都相量则用delta delta CT计算举例： 照组基ACT值20 内参（比βactin)CT值15实验组基A CT值18内参CT值14 首先算加量：delta CT=15-14=1212说
RealTime－PCR－(qPCR)常见问题及解决方案
Real Time PCR(qPCR)，即实时荧光定量核酸扩增检测系统，是一种利用荧光染剂检测每次PCR循环后产物总量的方法技术，是常规PCR的衍生反应。主要是通过荧光信号的变化实时监测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。因其具有灵敏、特异、
什么是内参基因
这个概念一般是用在定量PCR中。定量PCR是要检测某个基因的表达，降低或者提高，但是当你得出结果以后，你并不知道是它本身的表达降低/提高了，还是你操作过程中造成的误差（比如提RNA时的损失），所以这个时候需要同时检测另外的基因作为参照。这个基因就是内参基因，这类基因是生物体或者细胞中稳定表达的基因，
Realtime－qPCR手册手把手教你从菜鸟到高手
3.3 SYBR@Green 法SYBR@Green I是一种结合于小沟中的双链DNA结合染料，与双链DNA结合后，其荧光大大增强。这一性质使其用于扩增产物的检测非常理想。SYBR@Green I 的最大吸收波长约为497nm，发射波长最大约为520nm。在PCR反应体系中，加入过量SYBR@Gre
血清western－blot怎样选择内参
由于血浆或血清中很难找到一个稳定表达的蛋白，常见的在组织中比较常用的内参蛋白如肌动蛋白，GAPDH等，严格讲并不适合血浆或血清；可以考虑用立春红染色 或考染做loading control（这种方法在不少文献中都有报道，是大家认可的）Blood上有些文章 用的是立春红染色做control
PCR的Ct值
Ct值：C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺省设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍
PCR的Ct值
Ct值：C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺省设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍
PCR的Ct值
Ct值：C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺省设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍
CT值的关系
研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代表Ct值。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。
PCR疑难问题解答第二篇：荧光定量PCR（二）
在qPCR 技术中重要的参数指标有哪些？ 扩增及溶解曲线：扩增曲线是PCR过程中，以循环数为横坐标，以荧光强度为纵坐标所绘制的曲线。主要用于反映qPCR的动态进程；溶解曲线是用来验证扩增产物特异性的，如果产物是单一条带，溶解曲线就会出现单峰，如果有引物二聚体或其它非特
定量方法知多少之相对定量法详解
在荧光定量PCR检测实验中可以采用多种方法来进行基因的定量。定量的方法也取决于实验的目标。当实验者对待测样品中的核酸的具体拷贝数比较感兴趣时，可以选择绝对定量。如果实验者关注的是实验样本与对照样本之间的倍数变化，无需精确测定拷贝数，则选择相对定量。目前相对定量方法适用于大多数基因表达研究，可分析对照
为什么选择组蛋白H3为细胞核的内参指标？
为什么选择组蛋白H3为细胞核的内参指标呢？当实验样品中只是核蛋白，而不是细胞总蛋白提取液时，可以用组蛋白H（Histone H），或者增殖细胞核抗原（PCNA）等为核内参抗体。除了这些，其它常见的核蛋白内参还有K70， K80， Lamin A和B。但是需要注意的问题是核蛋白内参的选择需要考
肌动蛋白基因为什么可以作为荧光定量pcr的内参基因
肌动蛋白基因可以作为荧光定量pcr的内参基因的原因是：内参基因相当于一个标尺，具有校正作用，避免待测样本回收率或者加样误差等因素带来的差异。具有标准化作用，内参基因表达相对稳定，以其为参照，反应基因表达水平的变化。根据查询相关信息显示引入内参基因进行了归一化处理，可以最大限度地减少样本制备，处理时产
Ct－值出现过晚（Ct>38）－问题分析
扩增效率低：反应条件不够优化。设计更好的引物或探针；改用三步法进行反应；适当降低退火温度；增加镁离子浓度等。 PCR 各种反应成分的降解或加样量的不足。 PCR 产物太长： 一般采用 80～150 bp 的产物长度。
qpcr中拷贝数相差一个数量级，ct值相差多少
3.33+3.33=6.66，理论上相差6.66，实际数值略有出入，因为你的扩增效率不一定是100%
原理易懂然而难做，qPCR结果分析的常见问题
qPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即实时荧光定量核酸扩增检测系统，也叫实时定量基因扩增荧光检测系。qPCR主要是利用插入性染料或荧光探针（比如TaqMan），人们可以通过监控PCR过程中的荧光强度比较多个样品的DNA水平。
深蓝云课堂：如何抓住qPCR数据分析的关键
同学们又是做qPCR实验的一天，有没有怀着忐忑又期待的心情去点开“analysis”的呢？点开之后，发现扩增曲线不正常，或者Cq值过大，又或者SD值太高，那这样的实验结果还靠谱吗？现在让小编来告诉你，qPCR实验的成功与否，关键在于各组数据是否达到判定标准以及是否符合实验预期，小小的qPCR实验