qPCR常见异常曲线实战分析(一)

1确认软件设置是否正确对照试剂盒说明书,检查时间、温度、循环数、荧光采集等是否设置正确。有一个比较容易忽略的设置问题是,需要看下所选用的试剂中是否含有ROX来作为参比荧光染料。2确定耗材及配件是否使用正确 耗材对于荧光定量PCR来说比较重要,很多异常的扩增曲线是由于耗材使用不当引起的。耗材的检验可以参照老师都没教过的PCR实验室辅料质检,常见的耗材相关问题包括:1)错误使用成普通PCR仪器所对应的耗材普通PCR耗材一般透光度比较差,会造成荧光扩增曲线异常,比如打折的扩增曲线(图三)。图三:错误使用普通PCR耗材的结果2)未选择跟仪器加热模块规格匹配的耗材荧光定量PCR 仪加热模块分0.2ml跟0.1ml两种,如果0.1m......阅读全文

qPCR常见问题及其分析解决方法

  常见问题  1. 无Ct值出现  检测荧光信号的步骤有误: 一般SG法采用72℃延伸时采集,Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。  引物或探针降解: 可通过PAGE电泳检测其完整性。  模板量不足: 对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。  模板降解: 避免样品制备中杂

qPCR融解曲线的峰高由什么决定

Tm值相同,而峰高低有差异是表达丰度不同,同样的扩增产物也会出现Tm值有微小差异,一般差异在1度以内都可以接受。融解曲线的纵坐标表示荧光信号对温度的一阶负导数。

qPCR融解曲线的峰高由什么决定

Tm值相同,而峰高低有差异是表达丰度不同,同样的扩增产物也会出现Tm值有微小差异,一般差异在1度以内都可以接受。融解曲线的纵坐标表示荧光信号对温度的一阶负导数。

扩增曲线异常,请问原因

具体要看你做什么实验,模板和扩增的基因实怎样的。1、扩增曲线:一般来说如果你做双ΔCT法那么你的扩增曲线必须是S型,有明显的四个时期,且复孔的CT值尽量一致,相差不要超过0.5个CT值(上限是1个CT值);同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增,其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。比如同一种CDN

热重分析仪TG曲线异常、TG度降低问题分析

热重分析仪是目前国产、最先进的热分析仪器。用途十分广泛,可进行物质的能得到物质的相转变,凝聚体系的相图,固体的热分解,有固体参加的化学反应,试样的要求、纯度和鉴定,无机固体的表面吸附物质的测定,催化活性和多相反应速度的研究,液晶,铁电转换--居里点,聚合物,煤及其有关的含碳物质,石油及其有关产物,纤

从qPCR溶解曲线判断PCR产物的相对大小

在做qPCR的时候,40个循环之后,都会插入一步(6):绘制溶解曲线。上图的三种颜色代表了我三种不同的PCR产物片段(3个基因)从左至右依次(产物名称,产物大小,GC含量,GC碱基对):A(蓝色),141bp,59%,84B(红色),138bp,61%,85C(绿色),169bp,58%,99结果会

原理易懂然而难做,qPCR结果分析的常见问题

  qPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即实时荧光定量核酸扩增检测系统,也叫实时定量基因扩增荧光检测系。qPCR主要是利用插入性染料或荧光探针(比如TaqMan),人们可以通过监控PCR过程中的荧光强度比较多个样品的DNA水平。

血脂异常临床用药分析(一)

  血脂异常是指由于脂肪代谢或运转异常使血液中的总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL—c)和甘油三酯(TG)升高以及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)降低。    血脂异常可表现为高胆固醇血症、高甘油三酯血症、混合型血脂异常(TC、TG均升高)及低高密度脂蛋白血症。临床上可分为两类:(1)

CAN接口异常分析指南(一)

CAN总线应用环境复杂多样,可能会出现各种异常情况。本文列举了常见的CAN接口异常情况及解决方法,帮您更加高效地分析及解决CAN接口应用问题。  常见异常及解决方法1、两个节点近距离测试,低波特率通信正常,高波特率无法通信。可能原因:未加终端电阻。由于CAN收发芯片内部CANH、CANL引脚为开漏驱

qPCR-常见问题解答

  通常来讲,real-time qPCR 的反应程序不需要像常规的 PCR 那样,要变性、退火、延伸 3 步。由于其产物长度在 80~150 bp 之间,所以只需要变性和退火就可以了。   SYBR@Green 等染料法,最好在 PCR 扩增程序结束后,加一个溶解程序,来形成溶解曲线,判断 PC

qPCR那些奇奇怪怪的曲线都代表啥

奇怪的曲线就代表基因扩增的有问题,可以检测基因的表达量、模板质量、引物有没有降解等等,其次试剂本身的灵敏度也有关系。我用的是ChamQ SYBR qPCR Master Mix,灵敏度就很高,一年前我们实验室就开始用了。

QPCR做出来溶解曲线双峰,是什么原因

可能是引物二聚体,也可能是污染了,也可能是引物的非特异性扩增

QPCR做出来溶解曲线双峰,是什么原因

可能是引物二聚体,也可能是污染了,也可能是引物的非特异性扩增

关于热分析仪器的冷却曲线异常的问题介绍

  1、冷却曲线TL明显,但共晶温度出现回升,Ts测试失败。  原因:  1)样杯中少Te或无Te;  2)铁水中微量元素干扰(Ti);  3)孕育后铁水,强烈的孕育作用抵消了白口化元素的作用。  2、冷却曲线无TL点,但Ts平台存在。  原因:  1)浇注温度低于初晶温度;  2)铁水碳当量太高或

直流充电桩充电异常分析(一)

  直流充电桩充电时可能出现哪些异常情况?我们不妨来了解一下,方便日后给充电桩系统“把脉”。  首先,我们来简单回顾一下上周的精华内容,即直流充电模型:    图1直流充电模型  左边是非车载充电机(即直流充电桩),右边是电动汽车,二者通过车辆插头、插座相连。我们可以很清楚的看到,充电模型主

qPCR结果分析经验分享

  Real-time qPCR就是在PCR扩增过程中,通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为定量的依据。由于常规的PCR的缺点,real-time qPCR由于其操作简便,灵敏度高,重复性好等优点发展非常迅速。设在

生物实验室实战经验分享(一)

  平时在实验室最常听到的一句话就是“今天某某试验没做好是为什么?今天某某试验没出结果是什么原因?今天某某试验为什么会是这样的呢?” 等等。然后仔细一查找原因,往往是由于操作上面的不认真,或是一些小小的细节没有注意到。以下是集各路朋网友的一些实战经验,在此与大家分享。   1. 跑pa

qPCR-溶解曲线没有峰出现,前端较高,是什么原因

可能是没有检测出来,你的Ct是不是很大了,比如30以后,或者扩增曲线不正常

浅谈临床常见步态异常

步态是评估骨骼肌肉系统检查的重要项目,如果发生步态异常可能与神经功能障碍或骨骼肌肉系统功能障碍的代偿表现有关,临床诊疗中对步态的评估也是十分重要,某些具有特征性的异常步态可以提示疾病病位,具有临床诊断性价值。在进行步态评估时,注意以下几点: 1.须与正常步态进行对比; 2.比较两侧动作

一例患者胸片异常病例分析

患者男,42岁,胸片和CT偶发异常。诊断:波兰综合征(Poland Syndrome)影像学表现胸片显示左肺有轻度透明(图1)。CT扫描显示胸大肌和小肌缺失。简评波兰综合征是一种特征为单侧胸肌先天发育不良或缺失(少见双侧)并伴发同侧手部畸形罕见的先天性缺陷症。此症状发生情况一般多发于身体右侧。患此症

一例胸部CT异常病例分析

男,76岁,腹部CT异常时偶见胸部CT异常,因肾病综合征使用糖皮质激素治疗6个月。以下为患者胸部和脑部影像学结果。医脉通编译自韩国胸部读片会 899根据以上信息请大家讨论:如何描述相关的影像学结果?患者的最可能诊断是?=========================================

污水处理好氧池常见异常原因分析

图片来源于网络  一、好氧池发生污泥膨胀现象的原因  ①好氧池溶解氧长期偏低或者长期偏高有可能  ②原水或厌氧出水的硫化物含量过高导致硫细菌大量繁殖  ③好氧池负荷长期偏低或偏高  ④好氧池水温偏高  ⑤营养料不均衡或缺乏营养N、P偏低  ⑥进水pH值问题  ⑦好氧池污泥的泥龄过长耗氧量增加导致溶解

离心机常见异常检测

离心机常见异常检测    离心机运转前应先切断电源并先松开离心机刹车,可以手试转动转鼓,看有无咬煞情况。检查其他部位有无松动及不正常情况。    接通电源依顺时针方向开车启动(通常从静止状态到正常运转约需40-60秒左右)。通常每台设备到厂后均须空车运转3小时左右,无异常情况即可工作。   物料尽可

离心机常见异常检测

离心机常见异常检测    离心机运转前应先切断电源并先松开离心机刹车,可以手试转动转鼓,看有无咬煞情况。检查其他部位有无松动及不正常情况。    接通电源依顺时针方向开车启动(通常从静止状态到正常运转约需40-60秒左右)。通常每台设备到厂后均须空车运转3小时左右,无异常情况即可工作。   物料尽可

离心机常见异常检测

离心机运转前应先切断电源并先松开离心机刹车,可以手试转动转鼓,看有无咬煞情况。检查其他部位有无松动及不正常情况。接通电源依顺时针方向开车启动(通常从静止状态到正常运转约需40-60秒左右)。通常每台设备到厂后均须空车运转3小时左右,无异常情况即可工作。物料尽可能要放置均匀。必须专人操作,容量不得超过

离心机常见异常检测

离心机运转前应先切断电源并先松开离心机刹车,可以手试转动转鼓,看有无咬煞情况。检查其他部位有无松动及不正常情况。  接通电源依顺时针方向开车启动(通常从静止状态到正常运转约需40-60秒左右)。通常每台设备到厂后均须空车运转3小时左右,无异常情况即可工作。  物料尽可能要放置均匀。必须专人操作,容量

一例咳嗽伴皮肤异常病例分析

1名50岁白人女性主诉咳嗽和呼吸苦难,虽然口服抗菌素治疗可能的慢阻肺急性加重,但仍无效,于是就诊。患者中度咳痰,偶尔轻度咯血。否认近期与病人接触或近期旅行。此外,她报告频繁和经常鼻出血。否认发热、盗汗或无意识的体重降低。最近无腹泻、黑便,或便血。患者除了有癫痫发作、季节性过敏、高血压、胃动力障碍、焦

一例患者偏瘫、感觉异常病例分析

79岁女性,表现为左侧偏瘫、感觉异常并麻木。颈椎的矢状位T2WI和T1WI序列(A和B)和轴位T2 梯度回声序列(D)显示起源于颈髓C4水平后方(白色箭头)的等信号外生性病变。矢状位后对比T1WI序列(C)未见强化。注意皮肤凹陷,棘上韧带的压痕和假定的窦道(A,蓝色箭头)。诊断:中线脊髓错构瘤背景:

荧光定量PCR扩增曲线形状异常的原因

A.扩增效率过高    出现非特异扩增或引物二聚体:反应体系内模板浓度太高以及模板核酸质量较差,可能导致出现抑制PCR反应的现象。在绝对定量时表现扩增效率大于110%。    解决方案:去除模板浓度最高的反应孔并重新分析标准曲线;对目的基因做标准曲线,一般用质粒做梯度稀释,或用PCR产物做梯度稀释,

常见滤波电路分析技巧(一)

在整流电路输出的电压是单向脉动性电压,不能直接给电子电路使用。所以要对输出的电压进行滤波, 消除电压中的交流成分,成为直流电后给电子电路使用。在滤波电路中,主要使用对交流电有特殊阻抗特性的器件,如:电容器、电感器。本文对其各种形式的滤波电路进行分析。    滤波电路种类    滤波电路主要有下列几种