PCR方法—常用的10种策略
PCR实验包括三大主要的热循环步骤 ，在这个过程中需要多种必要的反应成分 ，通过对PCR的设置做相应的调整，便可以获得一些特殊的实验结果，如产率提高，特异性增强或反应时间缩短等。 表 1.常用PCR方法及其核心优势热启动PCR常用于增强PCR扩增的特异性。该方法主要利用抗体、亲合配体、适体或化学修饰物等酶修饰酶，来抑制室温下的DNA聚合酶的活性。这种修饰使得在PCR体系配制阶段引物与模板、引物与引物之前的结合能力降低，从而避免了非特异性扩增。由于DNA聚合酶在室温下的活性被抑制，所以，热启动技术为在室温下配制多个PCR反应体系提供了极大的便利，且不会影响特异性和扩增能力。什么是热启动PCR？当反应体系配制好后，在反应初始加热阶段或“热启动”阶段，酶修饰物在高温下（通常高于90 ℃）被释放，使得DNA聚合酶被激活。具体激活时间和温度取决于DNA聚合酶以及热启动修饰物的性质。对某些DNA聚合酶而言，有时激活和起始变性步骤可......阅读全文
常用的分离方法升华的方法
常压升华在一个标准大气压（1.013×10^5 Pa）下固体的升华。常温升华在室温（25 ℃）下固体的升华。真空升华又称减压升华，由于升华与固体蒸气压和外压的相对大小有关，降低外压可以降低升华温度，在常压下不能升华或升华很慢的物质可以采用真空升华。真空升华还可防止被升华的物质因温度过高而分解或在升华
不同的方法需要不同的策略
图1. 保留因子、拖尾因子、分离度及理论板数的计算。几乎每一个色谱工作者都做过液相方法开发的工作。不管你的工作是要对一个常规的方法进行偶尔的调整，进而建立一个一次性的方法来支持化学合成，还是需要采用一个成熟的方法来进行生产过程的检测，对液相方法开发原则的深刻理解都是很有价值的。 根
PCR实验功能区扩增区的功能及常用仪器
PCR3区功能：cDNA合成、DNA扩增及检测。常用仪器设备：低温冰箱，移液器，荧光定量PCR仪，紫外灯及安全防护装备。
常用的细胞转染方法
转染是将外源性基因导入细胞内的一种技术，是实验室工作中经常涉及的基本方法。常规转染技术可分为两大类：瞬时转染和稳定转染（永久转染）。前者外源 DNA /RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析；后者外源DNA
学涂片常用的方法
学涂片常用的方法是点片法。根据查询相关公开信息显示：学涂片的方法有拉片法，推片法，刮片法，涂抹法，点片法，其中最常用的是点片法。
几种常用的转染方法
一、物理-化学方法 脂质体转染法：采用脂质体转染试剂，将遗传物质如质粒, siRNA等转移至细胞内。 此种方法易于操作且不需要许多步骤或特殊的专业知识。通常情况下，你只需要一种转染试剂和一种兼容的生长培养基 (通常是低血清且具有良好的缓冲作用，使细胞在转染过程中保持活性)。不同的厂商有自己的
常用的色谱分离方法
在生物大分子纯化分析特别是蛋白质纯化分析中，色谱是非常重要而且常用的一种技术。 一、凝胶过滤 凝胶过滤又叫分子筛色谱，其原因是凝胶具有网状结构，小分子物质能进入其内部，而大分子物质却被排除在外部。当一混合溶液通过凝胶过滤色谱柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。 二、离子交换色谱
常用菌种的保藏方法
菌种，多是指国家指定的几个菌种保藏中心的成品菌种，在液氮状态下，盛放在安瓿管中。企业生产按国家要求，必须要国家指定的菌保中心购买菌种，不得采用外来菌种。 一、常用菌种保藏方法 1、菌种保藏原理 根据微生物的菌种生理、生化特性，在人工创造的条件下尽量降低微生物细胞的代谢强度，使细胞基
常用的脱气方法介绍
1.抽真空脱气法：此法可使用真空泵，降压至0.05～0.07MPa即可除去溶解的气体。但是由于真空脱气会使混合溶剂组成发生变化，从而影响到实验的重现性，因此多用于单溶剂体系的简单分析。2.吹氦脱气法：利用氦气在液体中溶解度比空气低的特性，在0.1MPa压力下，以约60 mL/min流速通入流动相储液
动物实验的常用方法
在医学教学、科研和医学工作中，不论是从事基础医学的还是临床医学、预防医学，都需要用实验动物来进行各种实验。通过对动物的实验的观察和分析，来研究和解决医学上存在的许多问题，动物实验方法已成为医学科学研究和教学工作中必不可少的重要手段。动物实验方法是多种多样的，在医学的各个领域内都有其不同的应用，其中一
预处理常用的方法
一、混凝－絮凝混凝是指向水中投加一定剂量的化学药剂，这些化学药剂在水中发生水解，和水中的胶体粒子互相碰撞，发生电性中和，产生吸附、架桥和网捕作用，从而形成大的絮体颗粒，并从水中沉降，起到了降低颗粒悬浮物和胶体的作用。二、介质过滤介质过滤是指以石英砂或无烟煤等为介质，使水在重力或压力下通过由这些介质构
常用的灭菌方法介绍
常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类：即：物理方法如干热（烘烧和灼烧）、湿热（常压或高压蒸煮）、射线处理（紫外线、超声波、微波）、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施；化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏水、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。这些方法和药剂要根据工作中的不同材料
仲裁分析的常用方法
通过适当的方法如沉淀、挥发、电解等使待测组分转化为另一种纯的、化学组成的固定的化合物而与样品中其他组分得以分离，然后称其质量，根据称得到的质量计算待测组分的含量，这样的分析方法称为重量分析法。重量分析法适用于待测组分含量大于1%的常量分析，其特点是准确度高，因此此法常被用于仲裁分析。 步骤重量分析的
常用的粒度测试方法
常用的粒度测试方法有筛分法、显微镜（图象）法、重力沉降法、离心沉降法、库尔特（电阻）法、激光衍射 /散射法、电镜法、超声波法、透气法等。
基因克隆的常用方法
基因克隆的常用方法 基因(gene)是遗传物质的最基本单位,也是所有生命活动的基础。不论要揭示某个基因的功能,还是要改变某个基因的功能,都必须首先将所要研究的基因克隆出来。特定基因的克隆是整个基因工程或分子生物学的起点。本文就基因克隆的几种常用方法介绍如下。
常用的涂片染色方法
（1）巴氏染色法：本法染色特点是细胞具有多色性颜色，色彩鲜艳多彩。涂片染色的透明性好，胞质颗粒分明，胞核结构清晰，如鳞状上皮过度角化细胞胞质呈橘黄色；角化细胞显粉红色；而角化前细胞显浅绿色或浅蓝色，适用于上皮细胞染色或观察阴道涂片中激素水平对上皮细胞的影响。此方法的缺点是染色程序比较复杂。（2）苏木
检测黏度的常用方法
1、 GB 2794—81 胶粘剂黏度测定方法（旋转黏度计法）本测定方法在环氧树脂生产及应用中已使用多年。多采用同济大学机电厂生产的NDJ-97型旋转式黏度计。适用于测量各种牛顿液体的绝对黏度和非牛顿液体的旋转表观黏度。它有三种单元测定器，每单元包括一个测定容器。附有若干只转子。根据试样黏度大小选用
乳剂的常用制备方法
a.油中乳化剂法——又称干胶法，先将乳化剂（胶）分散于油相研匀后加水相制备成初乳，然后稀释至全量。在初乳中比例：植物油为4：2：1，挥发油为2：2：1，液体石蜡为3：2：1。本法适用于阿拉伯胶与西黄蓍胶。b.水中乳化剂法——又称湿胶法，先将乳化剂分散于水中研匀，再将油加入，用力搅拌成初乳，加水至全量
PCR检测方法
PCR反应的zui大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。污染原因一、标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染
其它PCR方法
· Standard PCR Protocol (Molecular Biology Techniques Manual)The followings are described in detailRecommended Reagent ConcentrationsRecommend
荧光定量PCR技术的荧光定量PCR的方法
接下来我们就来了解一下荧光定量的主要方法，我们如何选择合适的方法？荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。而荧光定量 PCR 的方法相应的可分为特异类和非特异类两类，特异性检测方法是在PCR反应中利用标记荧光染料的基因特异寡核苷酸探针来检测产物；而非特异性检测方法是在在PCR反
菌落PCR（Colony－PCR）具体方法
菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。建议使用载体上的通用引物。通常利用此方法进行重组体的筛选或者DNA测序分析。最后的PCR产物大小是载体通用引物之间的插入片断大小。具体方法：1、PCR混合物的制
PCR技术（十）：PCR产物克隆方法
平端连接 通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效 率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能 在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为 3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR
PCR测序的方法过程
PCR测序根据标记的方式不同和循环的次数不同可分为直接测序法和循环测序法。
原位PCR的基本方法
①固定组织或细胞:将组织细胞固定于预先用四氟乙烯包被的玻片上，并用多聚甲醛处理，再灭活除去细胞内源性过氧化物酶.②蛋白酶K消化处理:用60ug/ml的蛋白酶K将固定好的组织细胞片55℃消化处理2h后，96℃2min以灭活蛋白酶K.③PCR扩增:在组织细胞片上，加PCR反应液，覆盖并加液体石蜡后，直接
PCR污染的监测方法
1.阳性对照:在建立PCR反应实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照，它是PCR反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志。阳性对照要选择扩增度中等、重复性好，经各种鉴定是该产物的标本，如以重组质粒为阳性对照，其含量宜低不宜高(100个拷贝以下)，但阳性对照尤其是重组
多重PCR反应的方法
一)选择目标基因由于多重PCR在同一个反应体系中需要加入多对引物,而模板直接影响扩增的结果分析,这就导致了扩增模板的选择至关重要。同时,扩增区域的选择必须符合分析的目的,如通常对于致病微生物,需要选择其保守序列,如16sRNA,或者毒力基因、毒力相关基因,以防止检测到非致病突变体而无法解释结果;对于
荧光PCR的分析方法
对荧光定量PCR结果的分析方法我们分为两种：绝对定量分析法和相对定量分析法。1、绝对定量分析方法，起始浓度的对数跟循环数的线性关系，标准曲线由已知拷贝数的标准品绘制，根据样品的Ct值，可求样品的模板量。（1）标准品的制备：1V的样品原液（i）+9V稀释缓冲液，得到ii；1Ｖ的ii +9V稀释缓冲液，
PCR污染的防止方法
(一)合理分隔实验室:将样品的处理、配制PCR反应液、PCR循环扩增及PCR产物的鉴定等步骤分区或分室进行，特别注意样本处理及PCR产物的鉴定应与其它步骤严格分开。最好能划分①标本处理区;②PCR反应液制备区;③PCR循环扩增区;④PCR产物鉴定区。其实验用品及吸样枪应专用，实验前应将实验室用紫外线
知晓PCR，定量PCR与数字PCR的实验方法与选择
从1985年至今的30多年时间里，PCR分析经历了三代技术的发展。一代传统PCR技术，采用琼脂糖凝胶电泳的方法对PCR产物进行定性分析。第二代荧光定量PCR技术，通过在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控PCR进程，最后用Cq值对基因进行定量分析。第三代数字PCR技术，通过将PC