PCR方法—常用的10种策略

PCR实验包括三大主要的热循环步骤 ,在这个过程中需要多种必要的反应成分 ,通过对PCR的设置做相应的调整,便可以获得一些特殊的实验结果,如产率提高,特异性增强或反应时间缩短等。 表 1.常用PCR方法及其核心优势热启动PCR常用于增强PCR扩增的特异性。该方法主要利用抗体、亲合配体、适体或化学修饰物等酶修饰酶,来抑制室温下的DNA聚合酶的活性。这种修饰使得在PCR体系配制阶段引物与模板、引物与引物之前的结合能力降低,从而避免了非特异性扩增。由于DNA聚合酶在室温下的活性被抑制,所以,热启动技术为在室温下配制多个PCR反应体系提供了极大的便利,且不会影响特异性和扩增能力。什么是热启动PCR?当反应体系配制好后,在反应初始加热阶段或“热启动”阶段,酶修饰物在高温下(通常高于90 ℃)被释放,使得DNA聚合酶被激活。具体激活时间和温度取决于DNA聚合酶以及热启动修饰物的性质。对某些DNA聚合酶而言,有时激活和起始变性步骤可......阅读全文

菌种保藏的几种常用方法

基本原理   微生物具有容易变异的特性,因此,在保藏过程中,必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态,才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。    低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素,所以,菌种保藏方法虽多,但都是根据这三个因素而设计的。 保藏方法大致可

常用的分离与纯化方法

稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法、平板划线分离法、稀释摇管法、液体培养基分离法、单细胞分离法、选择培养分离法等。其中前三种方法最为常用,不需要特殊的仪器设备,

几种常用的蛋白鉴定方法

几种常用的蛋白鉴定方法 传统的蛋白鉴定方法,如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的 comigration分析,或者在一个有机体中有意义的基因的过表达通常耗时、耗力,不适合高流通量的筛选。 目前,所选用的技术包括对于蛋白鉴定的图象分析、微量测序、进一步对肽片段进行鉴定的氨基

细胞凋亡试验常用的方法

细胞凋亡试验常用的方法(MTT法、荧光法、DNA琼脂糖凝胶电泳法与流式细胞仪检测法)(一)药物对肿瘤细胞的抑制效应的MTT法:用培养基将肿瘤细胞调整至2 X108个/L,在96孔板中每孔加入100ul细胞悬液于37℃、5% CO2下培养过夜。次日每孔加入不同浓度的药物100mg/L作为试验组,设加完

常用的浓缩方法有哪些

常用的浓缩方法就是加热蒸发法,使水分蒸发,使溶液浓缩

目前细胞计数的常用方法

Countstar自动细胞计数仪技术特点:1.宽泛的样本检测范围:测量浓度范围:1×104—3×107/ml;直径范围:5-180µm,可检测各种传代细胞及原代细胞,干细胞,藻类,浮游生物,酵母细胞,白细胞等。2.经济节约的配套耗材成本:每个样品测量盘可检测5个样品,提供实验结果的平行性及可重复性检

痕量分析的常用方法

化学光谱法常用于测定高纯材料中痕量杂质,对分析99.999~99.9999%纯度材料,效果好,测定下限可达μg至ng级。此法须先用液-液萃取、挥发、离子交换等技术分离主体,富集杂质,再对溶液干渣用高压电火花或交流电弧光源进行光谱测定;或在分离主体后,把溶液浓缩到2~5ml,用高频电感耦合等离子体作光

常用的层析分析方法

  在分离分析特别是蛋白质分离分析中,层析是相当重要、且相当常见的一种技术,其原理较为复杂,对人员的要求相对较高,这里只能做一个相对简单的介绍。  一、 吸附层析  1、 吸附柱层析  吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相,以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。  2、 薄层层析  薄层层析是

常用纯化制备纯水的方法

  实验室纯水的制备方法有多种,最常用的为离子交换、活性炭吸附、微孔过滤、超滤、反渗透、紫外线照射等六种。  1 .离子交换法  离子交换法是以圆球形树脂(离子交换树脂)过滤原水,水中的离子会与固定在树脂上的离子交换。常见的两种离子交换方法分别是硬水软化和去离子法。硬水软化主要是用在反渗透(RO)处

基因转移常用的方法介绍

外源基因的转移:基因转移(gene transfer)是将外源基因导入细胞内,其转移方法较多,常用的要有下列几类:1)化学法:将正常基因DNA(及其拷贝)与带电荷物质和磷酸钙、DEAE-葡萄糖或与若干脂类混合,形成沉淀的DNA微细颗粒,直接倾入培养基中与细胞接触,由于钙离子有促进DNA透过细胞有作用

比浊法的常用方法

(1)目视比浊法目视比浊法就是指用眼睛观, 比较悬浊液浊茺以确定物质含量的方吱。其操作是先配制一系列浊度逐渐增加的标准,然后在同样的实验条件下,将被测液的浊度与标准进行比较比而获得测量结果。(2)免疫比浊法免疫比浊法包括透射比浊法和散射比浊法两种。(3)光电比浊法当光束通过悬浊液时, 由于被散射或吸

菌种保存的几种常用方法

微生物具有容易变异的特性,因此,在保藏过程中,必须使微生物的代谢处于zui不活跃或相对静止的状态,才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。 低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素,所以,菌种保藏方法虽多,但都是根据这三个因素而设计的。 保藏方法大致可分为以下几种:

痕量分析的常用方法

  化学光谱法  常用于测定高纯材料中痕量杂质,对分析99.999~99.9999%纯度材料,效果好,测定下限可达μg至ng级。此法须先用液-液萃取、挥发、离子交换等技术分离主体,富集杂质,再对溶液干渣用高压电火花或交流电弧光源进行光谱测定;或在分离主体后,把溶液浓缩到2~5ml,用高频电感耦合等离

血氨测定的常用方法

(1)直接显色测定法:在床旁取静脉血2ml,以钨酸沉淀蛋白后,用酚——次氯酸盐显色,参照标准计算氨含量。如严格掌握实验条件,本法分析结果能满足临床要求。(2)谷氨酸脱氢酶速率法:血浆中的氨在足量的α-酮戊二酸和NADPH存在时,经谷氨酸脱氢酶作用生成谷氨酸,并消耗NADPH,NADPH的下降速率与血

常用的层析分析方法

 在分离分析特别是蛋白质分离分析中,层析是相当重要、且相当常见的一种技术,其原理较为复杂,对人员的要求相对较高,这里只能做一个相对简单的介绍。  一、 吸附层析  1、 吸附柱层析  吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相,以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。   2、 薄层层析  薄层层析是

常用的干燥方法有哪些

1、常压干燥即在一个大气压条件下的干燥称常压干燥,常压干燥法应用最广泛,操作以及设备都简单,而且有相当高的精确度。2、减压干燥减压干燥是在密闭容器中抽真空后进行干燥的方法,此法优点是温度较低,产品质松易粉碎。温度升高,可加快蒸发速度,加大蒸发量,有利于干燥进行。但应视干燥物料的性质适当选择干燥温度,

涂层厚度测量的常用方法

覆层厚度测量已成为加工工业、表面工程质量检测的重要一环,是产品达到优等质量标准的必备手段。为使产品国际化,我国出口商品和涉外项目中,对覆层厚度有了明确的要求。覆层厚度的测量方法主要有:楔切法,光截法,电解法,厚度差测量法,称重法,X射线荧光法,β射线反向散射法,电容法、磁性测量法及涡流测量法等。这些

常用的pH值测定方法

在实际生产中,为了快速方便地掌握进入废水处理场废水的pH值变化情况,最简单的方法是用pH试纸粗略测定。对于无色、无悬浮杂质的废水,还可以使用比色法。目前,我国测定水质pH值的标准方法是电位法(GB/T 6920-1986玻璃电极法),它通常不受颜色、浊度、胶体物质以及氧化剂、还原剂的影响,既

真菌毒素检测常用的方法

真菌毒素检测仪、真菌毒素测量仪采用酶联免疫(ELISA)检测技术,适用标准48T或96T检测试剂盒进行定性或定量检测。主要用于检测各种饲料、饲料原材料、乳制品、油脂等样品中B1、M1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、T2毒素、赭曲霉毒素等真菌毒素的含量。真菌毒素检测常用的方法:一、薄层层析法:TLC法是针对

色谱柱的常用填充方法

固定相填充的好坏,将直接影响柱效率。通常多用泵抽填充法,即把色谱柱的一端塞上玻璃棉,接真空泵,另一端接一漏斗,在抽吸下加入固定相,边装边敲打色谱柱,至固定相不再进入为止。装好后,塞上玻璃棉。装柱要求要填充得均匀,紧密,切忌有空隙。

常用的层析分析方法

  在分离分析特别是蛋白质分离分析中,层析是相当重要、且相当常见的一种技术,其原理较为复杂,对人员的要求相对较高,这里只能做一个相对简单的介绍。   一、 吸附层析   1、 吸附柱层析   吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相,以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。   2、

几种常用的灭菌方法汇总

物理灭菌法(一)加热灭菌法加热可破坏微生物中酶、蛋白质和核酸,导致微生物死亡。加热灭菌又分干热灭菌法和湿热灭菌法。在同一温度下,湿热灭菌的效果比干热灭菌好。主要是因湿热灭菌时,有水分存在,蛋白质容易变性。水分又易使微生物膜壁润湿,湿热的穿透力比干热大。干热灭菌法  常用的有火焰灭菌法与干热空气灭菌法

常用的废水中和方法

  选择中和方法时应考虑以下因素:  ①含酸或含碱废水所含酸类或碱类的性质、浓度、水量及其变化规律。  ②首先应寻找能就地取材的酸性或碱性废料,并尽可能地加以利用。  ③本地区中和药剂或材料(如石灰、石灰石等)的供应情况。  ④接纳废水的水体性质和城市下水管道能容纳废水的条件。  此外,酸性污水还可

RCT中常用的对照方法

随机对照RCT1.随机对照试验(英语:r andomized c ontrolled t rial,RCT)是一种对医疗卫生服务中的某种疗法或药物的效果进行检测的手段,特别常用于医学、药学、护理学研究中,在司法、教育、社会科学等其他领域也有所应用。随机对照试验的基本方法是,将研究对象随机分组,对不同

概述仲裁分析常用的方法

  重量分析  通过适当的方法如沉淀、挥发、电解等使待测组分转化为另一种纯的、化学组成的固定的化合物而与样品中其他组分得以分离,然后称其质量,根据称得到的质量计算待测组分的含量,这样的分析方法称为重量分析法。重量分析法适用于待测组分含量大于1%的常量分析,其特点是准确度高,因此此法常被用于仲裁分析。

酶活力测定常用的方法

酶活力测定常用的方法有终点法和动力学方法两类。终点法测定完成一定量反应所需的时间,如α-淀粉酶的活力测定。因为碘对淀粉呈现蓝色反应,当淀粉溶液中加入淀粉酶后,碘的蓝色反应消失而呈现红棕色;碘对淀粉颜色反应消失的时间可表示淀粉酶活力的大小。碘对淀粉颜色反应消失花的时间越短,表示酶的活力越高。动力学方法

残留溶剂的常用检测方法

早期用来测定药品中残留溶剂的方法是干燥失重测定法。也就是通过加热过程中,样品的质量减失来测定残留溶剂的含量。这种方法的最大缺点就是非专属性。只能对其总量分析而无法对定性鉴别,而且水分也会干扰残留溶剂的测定。分光光度法也通常利用特定溶剂和特定化学试剂的反应测定药品中的残留溶剂,虽然专属性尚可,但灵敏度

常用的干燥方法有哪些

1、常压干燥即在一个大气压条件下的干燥称常压干燥,常压干燥法应用最广泛,操作以及设备都简单,而且有相当高的精确度。2、减压干燥减压干燥是在密闭容器中抽真空后进行干燥的方法,此法优点是温度较低,产品质松易粉碎。温度升高,可加快蒸发速度,加大蒸发量,有利于干燥进行。但应视干燥物料的性质适当选择干燥温度,

沉淀溶解平衡的常用方法

根据溶度积规则,沉淀溶解的必要条件是Qc

多肽常用的几种水解方法

虽然多肽合成的氨基酸组成分析方法较多,且趋向更灵敏、更精确、更简便、更快速,但还没有一种方法可以单独适用于所有氨基酸残基的检测,并且很多因素如温度、时间、水解试剂、水解方法及多肽合成样品中添加剂等对水解程度均有影响。常用的水解方法作简要介绍如下: 1.酸性水解酸性水解是应用最为广泛水解方法,可以使大