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分子诊断经验篇:如何应对等温扩增时出现的假阳性问题

等温扩增技术作为一种核酸分子诊断技术,从诞生之日起就不断受到研究者的青睐,但也少不了唏嘘、质疑,甚至摒弃。引起这种截然相反的态度的原因在于等温扩增技术自身所存在的缺陷。而最为突出的一点是,在建立方法或者实际样本检测的过程中,等温扩增技术引起假阳性结果的概率相对较高,使得其实际应用范围变窄,未能真正显示出其检测优势。因此,隆地熊推出经验篇来回答“当等温扩增出现假阳性时我该怎么办?”。 需要声明的是,本篇所说“假阳性扩增”特指“没有DNA模板、只含引物的扩增体系所引发的假阳性扩增结果”。对于非目标DNA模板所引起的假阳性扩增,往往是由于引物序列不保守引起的,重新设计引物会使该问题得到解决。为了解决假阳性问题,首先得明白构成等温扩增反应体系的具体组成成分。以环介导等温扩增(LAMP)为例,反应体系所含成分主要有:商业化Bst DNA聚合酶、商业化等温扩增缓冲液、硫酸镁、甜菜碱、dNTPs、引物、DNA染料(SYBR Gre......阅读全文

分子诊断经验篇:如何应对等温扩增时出现的假阳性问题

等温扩增技术作为一种核酸分子诊断技术,从诞生之日起就不断受到研究者的青睐,但也少不了唏嘘、质疑,甚至摒弃。引起这种截然相反的态度的原因在于等温扩增技术自身所存在的缺陷。而最为突出的一点是,在建立方法或者实际样本检测的过程中,等温扩增技术引起假阳性结果的概率相对较高,使得其实际应用范围变窄,未能真正显

等温扩增时出现假阳性的应对策略

等温扩增技术作为一种核酸分子诊断技术,从诞生之日起就不断受到研究者的青睐,但也少不了质疑,甚至摒弃。引起这种截然相反的态度的原因在于等温扩增技术自身所存在的缺陷。而最为突出的一点是,在建立方法或者实际样本检测的过程中,等温扩增技术引起假阳性结果的概率相对较高,使得其实际应用范围变窄,未能真正显示出其

等温扩增,存在“假阳性”的Bug?

等温扩增技术作为一种核酸分子诊断技术,从诞生之日起就不断受到研究者的青睐,但也少不了质疑,甚至摒弃。引起这种截然相反的态度的原因在于等温扩增技术自身所存在的缺陷。而最为突出的一点是,在建立方法或者实际样本检测的过程中,等温扩增技术引起假阳性结果的概率相对较高,使得其实际应用范围变窄,未能真正显示出其

基因扩增PCR的扩增结果假阳性的原因

出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。 引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行PCR扩增时,扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。 靶序列或扩增产物的交叉污染:这种污染有两种原因:一是整个

防癌筛查中的“过度诊断”和“假阳性”问题

什么是"过度诊断"? 过度诊断是指医生对于个体(患者)的诊断是准确的,没有问题的,但是对于该患者所患的疾病,即便医生没有诊断出来、患者也没有接受相关治疗,该疾病也不会在该患者的有生之年出现症状或者对患者的生命造成威胁。由于疾病本身的复杂性,过度诊断在临床上是无法避免的,只能尽可能的降低过度

现行Hp检测可能出现的假阳性

  现行Hp检测可能出现的假阳性是检验技师考试中所包含的内容。医学教育网收集整理了部分相关信息供学员参考。  意大利Brandi等报告,在低酸患者胃液及胃黏膜中发现非幽门螺杆菌(Hp)尿素酶阳性细菌。该结果表明,在临床上对低酸患者采用胃黏膜快速尿素酶试验(RUT)及尿素呼气试验(C-UBT)诊断Hp

无创产前诊断的假阳性和假阴性

  尽管无创产前诊断能够让医生和患者在孕期评估胎儿非整倍体的风险,但在最近召开的美国医学遗传学和基因组学学院(ACMG)年会上,专家们提醒,有时筛查会得到假阳性或假阴性的结果。   目前,美国有四家公司提供无创产前筛查,它们分别是Ariosa Diagnostics、Natera、Sequenom

菌落pcr会出现假阳性结果吗

最近做酶切连接转化,最后做鉴定时,以菌落为模板进行PCR时可以见到有目的条带;当把菌落接种到LB液扩菌后,以菌液为模板进行PCR时却什么东东都没有?请问会是什么原因啊?多多指教啊!建议重新以菌落为模板进行PCR检测,再重新以菌液为模板进行PCR检测,因为菌落或者菌液PCR假阳性的几率还是比较高的。但

PCR 反应出现假阳性结果原因

1 ) 引物设计不合适: 选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而,在进行PCR扩增时,扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。 2 ) 靶序列或扩增产物的交叉污染: 这种污染有两种原因: 一是整个基因组或大片段的交叉污染,导致假

PCR的假阳性和假阴性如何解释

假阳性假阳性是指出现的 PCR 扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。产生的原因有:①引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行 PCR 扩增时,扩增出的 PCR 产物为非目的序列;②靶序列太短或引物太短;③靶序列或扩增产物的交叉污染。解决方法有:操作轻柔