分子诊断经验篇：如何应对等温扩增时出现的假阳性问题
等温扩增技术作为一种核酸分子诊断技术，从诞生之日起就不断受到研究者的青睐，但也少不了唏嘘、质疑，甚至摒弃。引起这种截然相反的态度的原因在于等温扩增技术自身所存在的缺陷。而最为突出的一点是，在建立方法或者实际样本检测的过程中，等温扩增技术引起假阳性结果的概率相对较高，使得其实际应用范围变窄，未能真正显示出其检测优势。因此，隆地熊推出经验篇来回答“当等温扩增出现假阳性时我该怎么办？”。 需要声明的是，本篇所说“假阳性扩增”特指“没有DNA模板、只含引物的扩增体系所引发的假阳性扩增结果”。对于非目标DNA模板所引起的假阳性扩增，往往是由于引物序列不保守引起的，重新设计引物会使该问题得到解决。为了解决假阳性问题，首先得明白构成等温扩增反应体系的具体组成成分。以环介导等温扩增（LAMP）为例，反应体系所含成分主要有：商业化Bst DNA聚合酶、商业化等温扩增缓冲液、硫酸镁、甜菜碱、dNTPs、引物、DNA染料（SYBR Gre......阅读全文
环介导等温扩增技术原理
环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification)，是一个比较公认的等温扩增方法，现如今等温扩增法很多，比如RCA,NASBA,RPA...如果可以，你可以参考这篇文献：Loop-mediated isothermal amplification inte
核酸等温扩增技术及其应用
据微生物学家的估计，采用培养技术，仅有约1%的细菌可以培养。在过去的一个世纪里，以聚合酶链反应（PCR）为代表的基于核酸的检测技术发展迅速，为其他病原体的精确检测诊断提供了可能。毋庸置疑，Kary Mtlllis发明的PCR技术是20世纪80年代分子生物学领域的一项革命性突破。也许他本人当时也没有想
LAMP（环介导等温扩增）技术
PCR方法在人类及动植物疾病基因诊断、食品分析和环境监测等领域发挥着举足轻重的作用，其灵敏度高、特异性好，是目前最精准的基因诊断方法。然而PCR方法操作起来较复杂，对仪器和人员要求比较高，不适合基层或现场快速诊断，因此在国内的推广速度并不是很快。2000年日本学者Notomi在Nucleic Aci
核酸等温扩增技术有什么
环介导等温扩增技术（LAMP）。依赖于核酸序列的扩增技术（NASBA）。滚环扩增技术（RCA）。单引物等温扩增技术（SPIA）。依赖于解旋酶的等温扩增技术（HAD）。链接代扩增技术（SDA）。快速等温检测放大技术（RIDA）。切刻内切酶核酸恒温扩增技术（NEMA）。核酸等温扩增技术，无论是在实际操作
等温扩增技术的原理及应用
等温扩增技术（isothermal amplification technology，ITA）是近年来发展起来的基于恒温扩增的新型核酸扩增技术,主要包括环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP)[1]、交叉引物扩增（crossing pr
醋酸白试验的假阳性问题是什么
虽然醋酸白试验检测临床和亚临床HPV感染敏感性较好,但是这种方法特异性有时不太理想,一些慢性炎症,例如尿道炎和龟头包皮炎,上皮增厚或擦破外伤中可以出现假阳性反应。区别在于，同真阳性结果相比较时,假阳性结果中的变白现象显得界线不清和不规则，有时候甚至不明显。
如何诊断胰腺假囊肿？
临床上遇到曾有急慢性胰腺炎或上腹损伤，出现上腹疼痛、饱满、包块，伴胃肠道功能障碍的病人，体检时能触到上腹圆形或椭圆形肿物，边界不清，较固定，呈囊性感有深压痛，就应想到有胰腺囊肿的可能，经胃肠道造影、B超检查即可作出诊断。
PCR反应出现假阴性结果无扩增条带原因分析
PCR 反应的关键环节有 ： ① 模板核酸的制备; ② 引物的质量与特异性; ③ 酶的质量; ④ PCR循环条件; 寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究 ， 可能出现的原因有以下几点： 1 ) 模板： ① 模板中含有杂蛋白质; ② 模板中含有Taq酶抑制剂; ③
避免假阳性结果
2008年9月美国应用生物系统公司推出超高灵敏度的5500三重四极杆串联质谱系统和Qtrap5500三重四极杆串联质谱-线性离子阱质谱复合系统。这为要求超高灵敏度的药物研发、食品安全残留检测、环境激素分析、毒物分析等相关领域提供了可靠的技术平台。该系统以独特的质谱数据采集方式——四极杆-
被指出具“假阳性”报告，和合诊断表示否认
据财经报道，针对合肥核酸检测实验室被指出具“假阳性”报告一事件，涉事公司和合诊断予以否认；和合诊断总经理刘志刚否认了自家实验室出具“假阳性”报告，其表示，2022年该实验室在合肥只碰到过两例阳性样本，后经确认均为确诊病例，“我们正在向政府进行申诉”；针对“严重超时”的指控，刘志刚认为，旗下实验室
等温扩增到底行不行？
最近又看到一些同行写的关于等温扩增的文章。不禁想起几年前看到的RPA技术介绍。当时第一次看到这个技术的时候，简直可以用“震惊”、“惊艳”来形容。扩增速度真快啊，十几分钟就能出结果，比现在吭哧吭哧做PCR岂不是方便多了！可是几年过去了，似乎也没看到基于RPA技术的临床产品上市。说真的是有点失望的。就像
环介导等温扩增反应(LAMP)－基因诊断技术及产品简介
PCR方法在人类及动植物疾病基因诊断、食品分析和环境监测等领域发挥着举足轻重的作用，其灵敏度高、特异性好，是目前最精准的基因诊断方法。然而PCR方法操作起来较复杂，对仪器和人员要求比较高，不适合基层或现场快速诊断，因此在国内的推广速度并不是很快。 2000年日本学者Notomi在Nucle
环介导等温扩增反应(LAMP)－基因诊断技术及产品简介
PCR方法在人类及动植物疾病基因诊断、食品分析和环境监测等领域发挥着举足轻重的作用，其灵敏度高、特异性好，是目前最精准的基因诊断方法。然而PCR方法操作起来较复杂，对仪器和人员要求比较高，不适合基层或现场快速诊断，因此在国内的推广速度并不是很快。 2000年日本学者Notomi在Nucle
气相色谱仪出现基线问题时该如何检修
基线问题：基线问题可使测量误差增大，有时甚至会导致仪器无法正常使用。 1.遇到基线问题时应先检查仪器条件是否有改变，近期是否新换气瓶及设备配件。 2.如果有更换或条件有改变，则要先检查基线问题是不是由这些改变造成的，一般来说，这种变化往往是产生基线问题的原因。 3.当排除了以上可能造成基线问题
循环水真空泵出现问题时应如何维修
循环水真空泵是大家在提取分离过程中必备的仪器，是不可或缺的，如：真空过滤、真空蒸发、真空浓缩等。循环水真空泵（以下简称真空泵），顾名思义，采用的是循环水，也就是要有进水口和出水口，而且二者要达到平衡，如果进水口的进水量大于出水口的出水量，就会冒水；反之，水量跟不上，泵就会发热，压力跟不上。平时使用时
搞定恒温扩增分子诊断（RPA/RAA）
分子诊断技术今日不同以往，着实借力突飞猛进，恒温扩增技术由于其扩增期间不需要特殊的仪器设备而更受瞩目。恒温扩增方法有多种，今天就回顾RPA/RAA，让大家一文通俗搞定！为了确保大家所认知的基本概念是一致的，请先了解以下名词解释重组酶聚合酶扩增技术，RPA, recombinase polymeras
磁敏电子双色液位计出现假液位现象时应该如何处理
磁敏电子双色液位计是选用不锈钢及进口电子元件制造，显示部位采用高亮度LED双色发光管，组成柱状显示屏，通过LED光柱的红绿变化，可实现液位上、下限报警和控制；选 配液位变送器，可将液位信号转换成4～20mADC模拟未准信号，可实现远距离检测、指示、记录与控制，亦与计算机系统直接通讯。电力、冶金、
如何诊断假膜性肠炎？
1.腹泻前有某些抗生素使用史。 2.有典型的临床表现如腹泻、腹胀、发热、白细胞计数增加，严重时有便血、中毒性肠麻痹、肠穿孔、中毒性休克。 3.粪便细菌学分离，鉴定有难辨梭状芽胞杆菌。 4.粪便过滤液或分离菌株培养的过滤液有毒素，在组织培养中具有细胞病理效应，且能被难辨梭状芽胞杆菌抗毒素或污
如何诊断肺炎性假瘤？
1.病史症状 多有呼吸道感染病史，可无临床症状或有间歇发作的发热、咳嗽、喀痰等表现，偶有咯血。 2.体检发现 多数无阳性体征，有呼吸道感染时，可有发热，肺部听诊有干或湿性啰音。 3.辅助检查 胸部X线片及CT扫描，有直径1～6cm圆或椭圆形孤立块影，中等密度，质地均匀，边缘不甚清楚，少
如何应对临床血样的溶血问题
[返回]前言近十年随着实验室诊断技术和方法的发展，目前的临床实验室检测不仅包括病理学诊断，还包括对疾病风险（预防）和治疗过程（治疗）的监测。基因组学、药物基因组学、蛋白组学和治疗诊断学使得实验室检测成为复杂的综合过程。但是，以上这些进步还不能避免实验室检测中一直存在的问题，即产生检测错误以致诊断推理
离心机出现腐蚀应如何应对
离心机出现腐蚀现场一定需要进行及时处理，否则不仅引起操作安全隐患，对设备的损害进一步加剧，更是影响数据统计的准确性和生产质量和效率的控制。湖南凯达离心机厂家对设备出现腐蚀损伤的几个表现进行分析，帮助客户准确把握离心机的运作状态。 离心机的金属腐蚀形态主要分为均匀腐蚀和局部腐蚀两大类，前者因为表观现
什么是PCR假阳性？
假阳性是指出现的 PCR 扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，亮度更高。产生的原因有：①引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行 PCR 扩增时，扩增出的 PCR 产物为非目的序列；②靶序列太短或引物太短；③靶序列或扩增产物的交叉污染。解决方法有：操作轻柔，防止
PCR实验中假阳性和假阴性的防治
1，标本采集必须合格，否则不做。2，严格按照操作规程，避免人为实验误差。3，用于操作的各种仪器，加样器，必须通过审核验收，仪器选贵的，进口的！4，最主要的就是试剂，选择公认的，优质试剂
抗TP抗体筛查试验的假阳性问题及其对策
一、梅毒体外诊断试验 1.梅毒的体外诊断试验分类 梅毒的体外诊断试验按试验所用抗原分为非密螺旋体抗体试验(nontreponemal antibody test, NTrAT)和密螺旋体抗体试验(treponemal antibody test, TrAT)。NTrAT包括快速血浆反应素环状
如何诊断幽门螺杆菌阳性？
Hp感染缺乏典型特异的临床表现，诊断Hp感染需借助诊断性试验。主要检测方法有： 1.呼气试验（碳13或碳14呼气试验） 碳13呼气试验是最新、快速、无痛苦而且无辐射的幽门螺杆菌检测技术，不需要做胃镜，只需轻松呼气，测定呼气成分，立即能检测出是否有幽门螺杆菌感染，结果准确度很高。 2.金标法
环介导等温扩增技术的原理与应用
原理与应用环介导等温扩增（Loop-Mediated Isothermal Amplification，LAMP）技术是日本学者Notomi T于2000年发明的一种新的DNA扩增技术，该方法能够高效、特异、快速的在等温条件下完成。通过一系列的链置换扩增反应，该方法能够在1h内就可以将靶基因
环介导等温扩增技术的原理与应用
环介导等温扩增（Loop-Mediated Isothermal Amplification，LAMP）技术是日本学者Notomi T于2000年发明的一种新的DNA扩增技术，该方法能够高效、特异、快速的在等温条件下完成。通过一系列的链置换扩增反应，该方法能够在1h内就可以将靶基因扩
分子生物学标准化现状
基因技术可给人类巨大的利益，但也给医学、伦理、法律和经济带来巨大冲击。基因检验滥用造成了资源浪费及不必要的医疗纠纷，基因隐私导致用人和保险歧视，但限制基因检验又对基因检验技术的发展造成负面影响。 美国卫生部(DHHS)为解决对基因检验安全和有效性的评估及了解有无必要进行更多的监督和管理。于19
等温多自配引发扩增技术简介
等温多自配引发扩增(IMSA)即isothermal multiple self-matching-initiatedamplification，是对目前核酸分子检测技术手段的改进和补充，具有简单、快速、高灵敏性高特异性的优势。IMSA最大特点就是，在等温核酸扩增过程中会产生多倍数的能自我配
ELISA假阳性结果和细胞假阴性结果
假阳性结果和假阴性结果1、标本的采集与保存ELISA试剂盒当标本采集保存不当产生溶血时，红细胞中的血红蛋白释放到血清中，血红蛋白具有过氧化物酶的性质，其通过吸附或“PP效应"（蛋白质间相互吸附的现象）结合后，可催化A、B液显色而造成假阳性标本采集保存不当致细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，会产生