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是real-time PCR吗？在复制循环刚开始的时候，荧光还很低，有波浪线很正常。在扩增曲线呈指数上升的时候，一般曲线就会很平滑了。在取阈值的时候，将阈值线取在指数上升的时期，就好了。如果整条线都是波浪形的话，那就是PCR失败了，原因需要你一一排查。......阅读全文
近几年，从科学研究到临床检测，从“非洲猪瘟”检测到“新冠病毒”检测，荧光定量PCR仪器已成为分子生物学研究的常规设备。检测方法的迅速发展，检测任务的紧急也对检测人员提出了更高的要求，需要他们具备熟练判断数据结果的能力。对于荧光定量PCR的结果的判断，最直观的判断就是看扩增曲线是否正常。很多老师在平时
近几年，从科学研究到临床检测，从“非洲猪瘟”检测到“新冠病毒”检测，荧光定量PCR仪器已成为分子生物学研究的常规设备。检测方法的迅速发展，检测任务的紧急也对检测人员提出了更高的要求，需要他们具备熟练判断数据结果的能力。对于荧光定量PCR的结果的判断，最直观的判断就是看扩增曲线是否正常。很多老师在平时
在PCR实验过程中，我们经常会遇到各种奇特的扩增曲线，如何正确解读这些曲线并且做出恰当的解决方案是我们一线实验者需要练就的基本功。今儿，小编将多年累积的功力编成“武功秘籍”奉上，助你PK掉那些令人犯晕的异常曲线。异常曲线1：PCR扩增抑制原因分析：H07存在扩增抑制解决方案：将样本稀释后进行扩增（抑
Real Time PCR(qPCR)，即实时荧光定量核酸扩增检测系统，是一种利用荧光染剂检测每次PCR循环后产物总量的方法技术，是常规PCR的衍生反应。主要是通过荧光信号的变化实时监测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。因其具有灵敏、特异、
临床使用PCR定量检测核酸，由于手工操作多、影响因素多，质量控制比较困难，在增强操作能力和仪器设备的基础上，选择好的PCR试剂是保证检测质量非常重要的关键。一、通过实时荧光PCR扩增曲线评价【扩增曲线图解读】实时荧光PCR由于每个循环要监测荧光信号值，因此都有拟合好的扩增曲线，通过扩增曲线可以很直观
假如您从事新冠核酸检测体系的开发和评估，想问问您是否遇到过以下问题：? 非特异性扩增、引物二聚体？? 灵敏度上不去，检出率低？? Taq酶性能不稳定，qPCR线性关系差？遇到这些问题莫要慌，翊圣Hieff? Taq酶单克隆抗体来救驾！ Hieff?&
实时荧光定量PCR扩增曲线包括基线期，指数扩增期，线性扩增期和扩增平台期，标准的曲线应该呈典型的S型。 不规则曲线可以根据曲线的具体情况来分析： 1）曲线呈斜线上升 原因：热盖失灵或热盖没盖紧，导致控温不准、液体挥发。 解决办法:更换仪器热盖或将热盖盖紧。 图1 曲
实时荧光定量PCR扩增曲线包括基线期，指数扩增期，线性扩增期和扩增平台期，标准的曲线应该呈典型的S型。 不规则曲线可以根据曲线的具体情况来分析： 1）曲线呈斜线上升 原因：热盖失灵或热盖没盖紧，导致控温不准、液体挥发。 解决办法:更换仪器热盖或将热盖盖紧。 图1 曲
实时荧光定量PCR扩增曲线包括基线期，指数扩增期，线性扩增期和扩增平台期，标准的曲线应该呈典型的S型。 不规则曲线可以根据曲线的具体情况来分析： 1）曲线呈斜线上升 原因：热盖失灵或热盖没盖紧，导致控温不准、液体挥发。 解决办法:更换仪器热盖或将热盖盖紧。 图1 曲
图九：试剂蒸发引起扩增曲线抬升4确定实验过程中的操作细节如果以上都正常，还要确定下实验过程中的操作细节。比如在做标准曲线的时候是否是梯度稀释的标准品，如果不是梯度稀释标准品，可能会引起标准曲线扩增效率或者R2值异常；从冰箱冷冻中取出的试剂是否有混匀，如果试剂融化后没有混匀，这时候取出的试剂不是均一的
在qPCR 技术中重要的参数指标有哪些？ 扩增及溶解曲线：扩增曲线是PCR过程中，以循环数为横坐标，以荧光强度为纵坐标所绘制的曲线。主要用于反映qPCR的动态进程；溶解曲线是用来
第三步：寻找一家信赖的公司合成引物和探针，一般引物合成大家比较熟悉，而且价格也比较便宜（特别是这两年便宜了许多），而探针则相对来说贵了许多，一般 Taqman探针合成在1000到5000元不等（不同的合成要求价钱不同）——而这只是标记价钱，序列合成基本上和引物合成价钱相似。 第四、五、六步：一般
各位老师在做荧光定量PCR实验的时候，是否遇到过非标准“S”型曲线的问题呢？俗话说的好，完美的PCR扩增曲线“千篇一律”，而有问题的PCR扩增曲线则是“千姿百态”。今天给大家分享一个案例：客户反映做绝对定量过程中，扩增曲线在线性增长期出现荧光信号突然下降的情况，在多组分图（Multicomponen
2）未选择跟仪器加热模块规格匹配的耗材目前Applied BiosystemsTM系列荧光定量PCR 仪加热模块分0.2ml跟0.1ml两种，实验前一定要确定自己的仪器是哪一种加热模块，再来选择对应的耗材。如果0.1ml加热模块用成0.2ml耗材，则会造成耗材压扁，甚至造成机器故障；如果0.
LUMEX实时荧光定量PCR应用---肉类掺假快速鉴别应用研究编者按中国农科院质标所陈爱亮教授，研究方向主要为基于现代生物分析技术的食品质量安全快速检测、鉴别与溯源方法研究及产品研发等， 利用我司生产的微芯片实时荧光定量PCR仪在食品安全领域进行了大量科学研究，建立了一种基于芯片PCR的快速
全球大爆发的新型冠状病毒肺炎或新型冠状病毒感染疾病的诊断有多种方法，其中针对其病毒核酸的实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测是病原学诊断的金标准。PCR 方法是所有核酸（RNA、DNA）定量检测的重要方法，对于新冠病毒等RNA核酸首先需要逆转录为cDNA，而后PCR方法则基本一致，下面
1、扩增曲线（如果做双ΔCT法）：（1）扩增曲线必须是S型，有明显的四个时期，且复孔的CT值尽量一致，相差不要超过0.5个CT值（上限是1个CT值）；（2）同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出CT值属正
1、扩增曲线（如果做双ΔCT法）：（1）扩增曲线必须是S型，有明显的四个时期，且复孔的CT值尽量一致，相差不要超过0.5个CT值（上限是1个CT值）；（2）同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出CT值属正
简介 目的：本文用于实时逆转录-聚合酶链反应（real-time RTPCR, rRT-PCR）试剂盒体外定性检测呼吸道和血清标本中2019新型冠状病毒（2019-nCoV）。针对2019新型冠状病毒设计引物和探针组合，用于SARS样冠状病毒的通用检测和2019新型冠状病毒的特异检测。 方案
简介 目的：本文用于实时逆转录-聚合酶链反应（real-time RTPCR, rRT-PCR）试剂盒体外定性检测呼吸道和血清标本中2019新型冠状病毒（2019-nCoV）。针对2019新型冠状病毒设计引物和探针组合，用于SARS样冠状病毒的通用检测和2019新型冠状病毒的特异检测。 方案应用
1确认软件设置是否正确对照试剂盒说明书，检查时间、温度、循环数、荧光采集等是否设置正确。有一个比较容易忽略的设置问题是，需要看下所选用的试剂中是否含有ROX来作为参比荧光染料。2确定耗材及配件是否使用正确
同学们又是做qPCR实验的一天，有没有怀着忐忑又期待的心情去点开“analysis”的呢？点开之后，发现扩增曲线不正常，或者Cq值过大，又或者SD值太高，那这样的实验结果还靠谱吗？现在让小编来告诉你，qPCR实验的成功与否，关键在于各组数据是否达到判定标准以及是否符合实验预期，小小的qPCR实验
案例发生比较典型，为了避免发生类似的问题，梳理原因分析过程并整理实验验证资料，与大家进行分享。 案例经过与原因分析 9月21日下午16:00接班时，值班老师称当日新冠核酸RT-PCR扩增失败致使检验报告全部未发，正在准备对标本重新复查。实验室使用的新型冠状病毒（201
Ct值是荧光定量PCR最重要的结果呈现形式。它被用于计算基因表达量差异或者基因拷贝数。那么荧光定量的Ct值多大可被认为是合理？如何保证Ct值的有效范围呢？今天就让小编来为大家解答这个问题。Ct值是什么？ qPCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值时的所对应的扩
同学们又是做qPCR实验的一天，有没有怀着忐忑又期待的心情去点开“analysis”的呢？点开之后，发现扩增曲线不正常，或者Cq值过大，又或者SD值太高，那这样的实验结果还靠谱吗？现在让小编来告诉你，qPCR实验的成功与否，关键在于各组数据是否达到判定标准以及是否符合实验预期，小小的qPCR实验它可
荧光定量PCR原理和过程已经非常清楚，为方便初学者更加清晰的学习，QIAGEN为大家汇总了荧光定量PCR常用术语，供您查阅参考使用。基线：基线是早期循环的噪点水平，通常在第3和第15循环之间测量，这是因为在此期间还检测不到扩增产物引起的荧光值增加。用于计算基线的循环数量是可以改变的，如果使用高模板量
基线：基线是早期循环的噪点水平，通常在第3和第15循环之间测量，这是因为在此期间还检测不到扩增产物引起的荧光值增加。用于计算基线的循环数量是可以改变的，如果使用高模板量或者靶标基因的表达水平高则循环数量需要减少。设置基线需要查看线性度扩增曲线的荧光数据。设置基线，使得扩增曲线的增长所开始
基线：基线是早期循环的噪点水平，通常在第3和第15循环之间测量，这是因为在此期间还检测不到扩增产物引起的荧光值增加。用于计算基线的循环数量是可以改变的，如果使用高模板量或者靶标基因的表达水平高则循环数量需要减少。设置基线需要查看线性度扩增曲线的荧光数据。设置基线，使得扩增曲线的增长所开始的循环圈数大
聚合酶链式反应 ( PCR) 可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增 。在扩增反应结束之后，我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析，也可以通过 放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析 。无论定性还是定量分析，分析的都是 PCR 终产物。但是在许多情况下，我们所感兴趣的是未经
相关专题Q-PCR定量分析CHIP最近做了CHIP，用Q-PCR方法进行定量分析，现将我对一些文献资料的总结传上，希望对大家有帮助！i. Normalizeeach ChIP DNA fractions’ Ct value to the Input DNA fraction Ct