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要做qRT-PCR，但是不太清楚，1：浓度梯度是用来制作标准曲线的吗？2：是不是内参和每个目的基因都要制作各自的标准曲线？也就是说如果我要作10个基因的话，就要制作内参加目的基因共11个标准曲线？3：怎么确定最适合的cDNA模板浓度呢？4：有说作3个生物学重复，是怎么做？是的，标准曲线法是绝对定量法不是，既然用到了内参，就是相对定量了反转录的时候按照试剂盒的要求转录特定质量的RNA（RNA的浓度可以通过分光光度计测定），反转完后按照推荐的比例稀释产物即可，一般确保你要的基因的Ct值在20~25比较理想对于同一类生物样本，提取三份RNA（每份RNA都应包含若干不同的生物个体）并反转录，分别Q，这叫生物学重复；Q同一个基因的时候平行3个加样孔，这叫技术重复......阅读全文
一.细胞趋化实验原理定义：趋化性（Chemotaxis，亦被称为化学趋向性）是趋向性的一种，指身体细胞、细菌及其他单细胞、多细胞生物依据环境中某些化学物质而趋向的运动。这对细菌寻找食物(如葡萄糖)十分重要，细菌以此趋进有较高食物分子浓度的地方，或远离有毒(如苯酚)的地方。在多细胞生物中，趋化性对其发
一. 细胞趋化实验原理定义：趋化性（Chemotaxis，亦被称为化学趋向性）是趋向性的一种，指身体细胞、细菌及其他单细胞、多细胞生物依据环境中某些化学物质而趋向的运动。这对细菌寻找食物 (如葡萄糖) 十分重要，细菌以此趋进有较高食物分子浓度的地方，或远离有毒 (如苯酚) 的地方。在多细胞生
动物胚胎如何由一个均一的卵裂球发育为具有头尾、背腹和左右等不对称特征的胚胎，即胚胎前后、背腹和左右体轴的建立，是发育生物学中一个重要的研究领域。为纪念创刊125周年，Science杂志于2005年7月提出了125个重要的科学问题。上述胚胎不对称性建立的机制，即属于其中的科学问题之一。图1. 爪蟾
4.9 梯度凝胶电泳梯度凝胶电泳也通常采用聚丙烯酰胺凝胶，但不是在单一浓度（孔径）的凝胶上进行，而是形成梯度凝胶。从凝胶顶部到底部丙烯酰胺的浓度呈梯度变化，如通常顶部凝胶浓度为5％，底部凝胶浓度为25％。凝胶梯度是通过梯度混合器形成的，高浓度的丙烯酰胺溶液首先加入到玻璃平板中，而后溶液浓度呈梯度下降
方法制样的方法根据所选用电泳方法的性质而定。读者可参考本卷其他章节中有关非变性凝胶电泳和等电聚焦电泳的讨论。最常用的 SDS 凝胶电泳是蛋白质纯度检测的「第一线」(front-line) 方法。由于通常纯度评价是非定量的，因此不需要关心诸如极端大小分子的非线性迁移、蛋白质修饰造成的迁移异常以
荧光定量PCR的检测是一系列从采样、保存运输、样品处理、核酸提取、扩增等一系列流程的组合，任何一个环节出现问题都会导致最终结果的错误。虽然在前面一系列的文章中讲述了提取试剂、扩增试剂的评价但是这些仍远远不够，因此我在后续的文章中会尽可能覆盖到所有的检测环节。 荧光定量PCR的检测离不开荧光定量
实验步骤在评价样品纯度之前，首先需要鉴定待测杂质的类型，如核酸、碳水化合物、脂质、无关蛋白质、同工酶类、失活蛋白质，进而确定在特定溶液条件中, 能够区分假定杂质和目标蛋白质的理化特性 (化学分析或物理特征）。而纯度则是指待测杂质含量低于某个特定水平。需要注意的是，上述说明中并没有要求描述杂质的性质。
蛋白质纯度测定实验 实验步骤 在评价样品
⑷ 洗脱当我们选定好洗脱液后，洗脱的方式可分为简单洗脱、分步洗脱和梯度洗脱三种。简单洗脱：柱子始终用同样的一种溶剂洗脱，直到层析分离过程结束为止。如果被分离物质对固定相的亲合力差异不大，其区带的洗脱时间间隔（或洗脱体积间隔）也不长，采用这种方法是适宜的。但选择的溶剂必须很合适方能使各组分的分配系数较
aluckydog9258(站内联系TA)一般来说设置等间距的五个浓度点，以被测物物质的浓度居中为佳hao1658(站内联系TA)一般来说设置等间距的五个浓度点，以被测物物质的浓度居中为佳chen_007051(站内联系TA)也可以配单浓度，控制进样量，做峰面积和纯品质量的标曲yangliu2006
抗体是自然产生用于帮助免疫系统抵御细胞内外侵害的免疫球蛋白。免疫荧光法测定细胞水平的抗体亲和力大小是评价抗体效果非常重要的指标，当前主要的测定方法是利用流式细胞仪以实现相对定量。而Countstar® FL可通过间接免疫荧光法检测不同抗原抗体反应呈现的平均荧光强度直接定量评价抗体亲和力大小，同时也可
柱层析的基本装置及基本操作目前，最常用的层析类型是各种柱层析，下面就简述柱层析的基本装置及操作方法，薄层层析的装置和操作将在后面详细讨论。(1)柱层析的基本装置柱层析的基本装置，如图2－21 。(2)柱层析的基本操作柱层析的基本操作包括以下一些步骤：①装柱柱子装的质量好与差，是柱层析法能否成功分离纯
六、SDS-PAGE1.SDS及SDS-PAGE（1）SDS：十二烷基硫酸钠（sodium decyl sulfate，SDS），一种阴离子去污剂，它能以一定的比例和蛋白质结合，形成一种SDS—protein的复合物。（2）SDS- PAGE：具有SDS的PAGE，分离SDS—protein复合物，
糖的消化和吸收：食物中的糖主要是淀粉，另外包括一些双糖及单糖。多糖及双糖都必须经过酶的催化水解成单糖才能被吸收。医学|教育|网搜集整理食物中的淀粉经唾液中的α淀粉酶作用，催化淀粉中α-1，4-糖苷键的水解，产物是葡萄糖、麦芽糖、麦芽寡糖及糊精。由于食物在口腔中停留时间短，淀粉的主要消化部位在小肠。小
作者：柳建磊,秦进 作者单位：(成都铁路中心医院,四川 成都 610081)【摘要】 目的：建立一种利用MGB-Taqman探针的快速、灵敏、特异、准确定量检测外周血PSMA mRNA的方法。方法：选择PSMA mRNA的保守区域，设计合成引
系统体积被定义为从梯度形成点到色谱柱前端的体积。系统体积用于聚焦梯度的设计。如图1所示，本试验所用仪器配置下的系统体积是3.0 mL。 设计聚焦梯度第1步在2.47分钟洗脱3号色谱峰的溶剂浓度在较早的时间点上形成。如图3所示，检测器和梯度形成点之间的偏移量等于系统体积加上柱体积。用于这台特
近期，中国科学院合肥物质科学研究院应用技术研究所研究员刘勇课题组与加拿大曼尼托巴大学教授 Francis Lin 课题组合作，基于微流控芯片技术在细胞趋化性和记忆效应研究中取得新进展，相关成果以封底文章形式发表在 Integrative Biology 杂志上（2017， DOI：10.1039
细胞迁移在血管再生、伤口愈合、炎症反应、胚胎发育等多种生理和病理过程中起到关键作用. 细胞迁移研究中, 传统的研究方法无法满足高通量的需求, 且大多是单因素检测, 难以综合考虑细胞基质、浓度梯度等多参数对细胞迁移的影响.微流控芯片分析是当前的科技前沿领域之一, 其作为细胞迁移研究新的技术平台, 一方
细胞迁移在血管再生、伤口愈合、炎症反应、胚胎发育等多种生理和病理过程中起到关键作用. 细胞迁移研究中, 传统的研究方法无法满足高通量的需求, 且大多是单因素检测, 难以综合考虑细胞基质、浓度梯度等多参数对细胞迁移的影响. 微流控芯片分析是当前的科技前沿领域之一, 其作为细胞迁移研究新的技术平台
非损伤微测技术在细胞生物学研究中的应用——生殖健康方面应用作者：旭月（北京）科技有限公司 美国扬格非损伤技术中心摘要：本文介绍了非损伤微测技术在生殖健康研究领域的应用。关键词：非损伤微测技术，生殖健康近年来，环境中的生殖毒性物质对人类生殖健康的危害突显出来，严重地影响了人口素质，促使生殖健康方面的研
转染可谓是做生物学实验的大家经常会考虑的一项实验技术，大致原理也都是明白的。实验室的师妹也一直在进行这个实验，最近她却一直愁眉苦脸，问了才知道，原来她转染完的细胞，去跑qpcr验证的结果一直不行，转染效率太低以至于无法进行后续的实验。到底转染是什么呢，为什么转染效率不高呢，今天我们就来一起讨论一
药敏试验 用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。但由于药敏试验要求比较严格，条件比较高。目前，临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法（包括琼脂和肉汤稀释法），抗生素浓度梯度法（E-test法），和自动化仪器等。一、 纸片扩散法&
基本方案 一 种 抗 原 加 工 处 理 和 呈 递 的 检 测 体 系材 料具有增殖能力的（如转化的 B 细胞）或非增殖的且与 T 杂交瘤细胞 M H C 匹配的抗原呈递细胞（单 元 7.1)D M E M -1 0 完全培养基， 37°C对数生长期的 T 杂交瘤细胞抗原：溶解于水的蛋白质或多肽（
实验步骤基本方案 一 种 抗 原 加 工 处 理 和 呈 递 的 检 测 体 系材 料具有增殖能力的（如转化的 B 细胞）或非增殖的且与 T 杂交瘤细胞 M H C 匹配的抗原呈递细胞（单 元 7.1)D M E M -1 0 完全培养基， 37°C对数生长期的 T 杂交瘤细胞抗原：溶解于水的蛋白质
2020年2月12日，国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心发布通告，发布《2019新型冠状病毒核酸检测试剂注册技术审评要点》。本审评要点适用于进行首次注册申报的产品。企业应提交在符合质量管理体系的生产环境下生产的试剂盒进行的所有性能验证的研究资料，包括具体研究方法、实验方案、实验数据、统计分析
分析测试百科网讯 国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心发布了《2019新型冠状病毒核酸检测试剂注册技术审评要点》的通告（2020年第4号）。 以下是公告全文：关于发布《2019新型冠状病毒核酸检测试剂注册技术审评要点》的通告（2020年第4号） 为应对新型冠状病毒感染的肺炎疫情，按照“统
49. 运输ATPase(transport ATPase)能够水解ATP,并利用ATP水解释放出的能量驱动物质跨膜运输的运输蛋白称为运输ATPase, 由于它们能够进行逆浓度梯度运输, 所以有称为泵。共有四种类型的运输ATPase:① P型离子泵(P-type ion pump),或称P型ATPa
四、氧化磷酸化的偶联机制 有关氧化磷酸化的偶联机理已经作了许多研究，目前氧化磷酸化的偶联机理还不完全清楚，50年代Slater及Lehninger提出了化学偶联学说，1964年Boear又提出了构象变化偶联学说，这两种学说的实验依据不多，支持这两种观点的人已经不多了。目前多数人支持化
一、ATP的生成方式 体内ATP生成有两种方式 (一)底物水平磷酸化(substrate level phosphorylation) 底物分子中的能量直接以高能键形式转移给ADP生成ATP，这个过程称为底物水平磷酸化，这一磷酸化过程在胞浆和线粒体中进行，包括有： (二)氧化磷酸化(oxid
实验原理 DNA 双链分子在全长不断增加温度或用化学变性剂条件处理下，两条链就会开始分开（即解链）。首先解链的区域由解链温度较低的碱基组成。GC碱基对比AT碱基对结合得要牢固，因此GC含量高的区域具有较高的解链温度。同时影响解链温度的因素还有相邻碱基间的吸引力。解链温度低的区域，通常位于端