如何利用透析法进行脱盐浓缩蛋白
二、蛋白质的分离纯化蛋白质的分离纯化方法很多,主要有:(一)根据蛋白质溶解度不同的分离方法1、蛋白质的盐析中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响,一般在低盐浓度下随着盐浓度升高,蛋白质的溶解度增加,此称盐溶;当盐浓度继续升高时,蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出,这种现象称盐析,将大量盐加到蛋白质溶液中,高浓度的盐离子(如硫酸铵的SO4和NH4)有很强的水化力,可夺取蛋白质分子的水化层,使之“失水”,于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。盐析时若溶液pH在蛋白质等电点则效果更好。由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水程度不同,故盐析所需的盐浓度也不一样,因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀。影响盐析的因素有:(1)温度:除对温度敏感的蛋白质在低温(4度)操作外,一般可在室温中进行。一般温度低蛋白质溶介度降低。但有的蛋白质(如血红蛋白、肌红蛋白、清蛋白)在较高的温度(25度)比0度时溶解度低,更容易盐析。(2)pH值:大多数蛋......阅读全文
平衡透析法的概念
中文名称平衡透析法英文名称equilibrium dialysis定 义用于测定溶液中小分子或离子与大分子间结合的技术。将大分子溶液和小分子溶液分别置于只允许小分子透过而不允许大分子透过的半透膜两侧,当透析达到平衡时,测定膜两侧溶液中小分子的浓度,即可分析得大分子与小分子结合的数据。应用学科生物化
平衡透析法的定义
中文名称平衡透析法英文名称equilibrium dialysis定 义用于测定溶液中小分子或离子与大分子间结合的技术。将大分子溶液和小分子溶液分别置于只允许小分子透过而不允许大分子透过的半透膜两侧,当透析达到平衡时,测定膜两侧溶液中小分子的浓度,即可分析得大分子与小分子结合的数据。应用学科生物化
平衡透析法的概念
中文名称平衡透析法英文名称equilibrium dialysis定 义用于测定溶液中小分子或离子与大分子间结合的技术。将大分子溶液和小分子溶液分别置于只允许小分子透过而不允许大分子透过的半透膜两侧,当透析达到平衡时,测定膜两侧溶液中小分子的浓度,即可分析得大分子与小分子结合的数据。应用学科生物化
电透析法的概念
电透析法亦属薄膜程序( Membrane process )之一种,早期运用于盐水( Brackish water )的去矿化处理( Demineralization )后制成为饮用水。
腹膜透析法的注意事项
腹膜透析的设备较血液透析简单,可在床边操作,又可避免体液平衡的突然变化。腹膜透析分为持续性非卧床式腹膜透析(CAPD,患者可随身携带设备自由活动)、持续性循环式腹膜透析(CCPD ,优点同CAPD,夜间依靠腹壁透析机进行透析,白天仍可工作)及间歇性腹膜透析(用于急性患者)。一般每日应进行4~6次腹透
透析法浓缩蛋白质溶液
实验方法原理 透析法主要用于更换蛋白质的缓冲溶液,如果在真空或吸湿环境中也可作为浓缩蛋白质溶液的一种方法(例如 PEG、Sephadex)。将蛋白质溶液盛在一个半透膜袋内,此膜能防止蛋白质丢失而无论在常压或减压下可与周围的缓冲溶液进行溶质交换。除小体积样品之外,根据扩散原理进行的透析法非常耗时,因此
腹膜透析法的缺点有哪些?
1.诱发感染:由于腹膜透析专用的导管在换液时须和透析袋连接,故有腹腔感染的可能,所以在做任何和腹膜透析治疗相关的步骤时,都要先彻底地洗净双手。以目前的技术,腹膜炎的发生率已大幅降低。 2.体重和血中甘油三酯增加:由于透析液是利用葡萄糖来排除多余水分,所以可能在透析时吸收了部分的葡萄糖,可能使病
腹膜透析法的原理和优势
腹膜透析是利用腹膜作半透膜,通过腹透管向腹腔注入腹透液,通过弥散原理清除毒素,纠正电解质及酸碱平衡紊乱,通过渗透原理(向腹透液内加葡萄糖以提高腹透液的渗透压)以达到超滤脱水,替代肾脏的排泄功能。腹膜透析优势:不仅可降低血清肌钙蛋白含量,降低心血管事件发生可能,而且可更好地控制尿毒症患者的钙磷代谢,保
透析法浓缩蛋白质溶液
实验方法原理透析法主要用于更换蛋白质的缓冲溶液,如果在真空或吸湿环境中也可作为浓缩蛋白质溶液的一种方法(例如 PEG、Sephadex)。将蛋白质溶液盛在一个半透膜袋内,此膜能防止蛋白质丢失而无论在常压或减压下可与周围的缓冲溶液进行溶质交换。除小体积样品之外,根据扩散原理进行的透析法非常耗时,因此蛋
透析法浓缩蛋白质溶液
透析法 实验方法原理 透析法主要用于更换蛋白质的缓冲溶液,如果在真空或吸湿环境中也可作为浓缩蛋白质溶液的一种方法(例如 PEG、Sephadex)。将蛋白质溶
电透析法的原理和方法介绍
盐类溶解于水中将分解产生离子,且盐类溶液属电解质( Electrolyte ),电透析法系将无数的阴/阳离子薄膜,交错的串联在一起,电解质溶液则在膜间流动,两侧施以直流电电压后,阳离子将移向阴极而阴离子将移向阳极。其中阴离子可顺利通过阴离子薄膜,但是再往前时却会被邻近的阳离子膜阻挡,反之,阳离子也仅
微透析法测定血浆蛋白结合率
微透析技术是一种活体细胞外液的生化物质采样分析技术。因其独有的微创性和取样的连续性,现已被广泛应用于脑组织各种病理生理现象的探索性实验、神经生物化学的检测和药物代谢研究 。微透析法用于药物血浆蛋白结合率测定,基于药物与大分子蛋白结合后不能穿透具有一定相对分子质量截留值的微透析的半透膜,而游离药物
如何利用透析法进行脱盐浓缩蛋白
二、蛋白质的分离纯化蛋白质的分离纯化方法很多,主要有:(一)根据蛋白质溶解度不同的分离方法1、蛋白质的盐析中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响,一般在低盐浓度下随着盐浓度升高,蛋白质的溶解度增加,此称盐溶;当盐浓度继续升高时,蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出,这种现象称盐析,将大量盐加到蛋白质溶液中
关于平衡透析法的基本内容介绍
平衡透析法是用于测定溶液中小分子或离子与大分子间结合的技术。将大分子溶液和小分子溶液分别置于只允许小分子透过而不允许大分子透过的半透膜两侧,当透析达到平衡时,测定膜两侧溶液中小分子的浓度,即可分析得到大分子与小分子结合的数据。 平衡透析法的透析动力是扩散压。扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的
采用透析法进行蛋白质脱盐的原理
透析袋有一定的截留分子量,高于此分子量的大分子物质比如蛋白质不能通过,而一些小分子物质比如无机盐、单糖可以通过半透膜,这样可以使得蛋白质分子和小分子物质分开。透析时把待纯化的蛋白质溶液装在半透膜的透析袋里,放入透析液(蒸馏水或缓冲液)中进行的,透析液可以更换,直至透析袋内无机盐等小分子物质逐渐降低到
采用透析法进行蛋白质脱盐的原理
透析袋有一定的截留分子量,高于此分子量的大分子物质比如蛋白质不能通过,而一些小分子物质比如无机盐、单糖可以通过半透膜,这样可以使得蛋白质分子和小分子物质分开。透析时把待纯化的蛋白质溶液装在半透膜的透析袋里,放入透析液(蒸馏水或缓冲液)中进行的,透析液可以更换,直至透析袋内无机盐等小分子物质逐渐降低到
平衡透析法测定血浆蛋白结合率的介绍
平衡透析法是定量研究蛋白质与小分子结合平衡的一种传统且成熟的膜分离技术。平衡透析法的工作原理是基于分子大小或者重量不同,将大分子溶液和小分子溶液分别置于只允许小分子透过而不允许大分子透过的半透膜两侧,它是在无外力驱动条件下,药物分子扩散透过半透膜,当透析达到平衡时,测定膜两侧溶液中小分子的浓度,
平衡透析法测定血浆蛋白结合率原理及装置
药物血浆蛋白结合率(plasma protein binding, PPB)是药物在动物体内重要的药理学参数之一,影响着药物体内游离浓度进而影响药物的处置过程。药物在进入血液后与血浆蛋白会有不同程度结合,血液中游离药物的比例会影响其在体内吸收、分布、代谢和排泄的过程,与血浆蛋白结合的药物可能会有更长
透析法除N-十二烷基肌氨酸钠实验
试剂、试剂盒 冰醋酸三氟乙酸(TFA)乙腈溶剂 A(0.1%TFA)溶剂 B(80% 乙腈+0.086%TFA)仪器、耗材 反相高效液相色谱(HPLC) 仪C18 反相 HPLC 柱实验步骤 材料与设备反相高效液相色谱(HPLC) 仪C18 反相 HPLC 柱(VYDAC?,4.6x250 mm)冰
透析法除N-十二烷基肌氨酸钠实验
试剂、试剂盒冰醋酸三氟乙酸(TFA)乙腈溶剂 A(0.1%TFA)溶剂 B(80% 乙腈+0.086%TFA)仪器、耗材反相高效液相色谱(HPLC) 仪C18 反相 HPLC 柱实验步骤材料与设备反相高效液相色谱(HPLC) 仪C18 反相 HPLC 柱(VYDAC?,4.6x250 mm)冰醋酸三
透析法除N-十二烷基肌氨酸钠实验
试剂、试剂盒 冰醋酸 三氟乙酸(TFA) 乙腈 溶剂 A(0.1%TFA) 溶剂 B(80% 乙腈+0.086%TFA)
血浆蛋白结合率的经典测定方法之平衡透析法
药物在血浆中会不同程度地与血浆蛋白结合,其结合的程度能够影响药物的体内的吸收、分布、代谢和排泄,进而会影响药物的药效学行为。一般来说,药物在吸收进入血液之后,仅游离的药物能够到达作用部位,产生药理学活性。平衡透析法是基于药物结合的平衡原理来测定药物游离浓度最常用的方法,也是研究药物血浆蛋白结合率的经
血浆蛋白结合率的经典测定方法之平衡透析法
药物在血浆中会不同程度地与血浆蛋白结合,其结合的程度能够影响药物的体内的吸收、分布、代谢和排泄,进而会影响药物的药效学行为。一般来说,药物在吸收进入血液之后,仅游离的药物能够到达作用部位,产生药理学活性。平衡透析法是基于药物结合的平衡原理来测定药物游离浓度最常用的方法,也是研究药物血浆蛋白结合率的经
平衡透析法检测血浆蛋白结合率原理及注意事项
药物血浆蛋白结合率(Plasma Protein Binding, PPB)即血液中与蛋白结合的药物占总药量的百分数,可以反映药物与血浆蛋白结合的程度。药物血浆蛋白结合率是药物在动物体内重要的药理学参数之一,影响着药物体内游离浓度进而影响药物的分布与排泄。药物在进入血液后与血浆蛋白会有不同程度结合,
什么叫透析法纯化蛋白质?为什么要用缓冲液?
透析是利用半透性膜将待纯化蛋白质包裹,沉浸在缓冲液中;由于缓冲液浓度低于膜内部的浓度,因此在半透膜上会发生物质交换;但蛋白质不能通过半透膜,只有盐离子等小分子物质可以通过;因此,待纯化蛋白质中的盐杂质就通过半透膜交换到外面了。使用缓冲液有两个原因,一是不用缓冲液蛋白质可能会变性;二是因为在以后的使用
蛋白质脱盐有哪些方法
常用的脱盐方法有透析法、电透析法和凝胶过滤法。透析法及电透析法耗时长,样品稀释度大,不易放大进行大规模生产,所以工业生产中应用较少。凝胶过滤层析脱盐过程中盐分子和蛋白质分子大小差异巨大,蛋白质溶液中小分子的盐分子随着层析流动相进入孔径较小的固定相,使其在层析中的迁移速率小,而蛋白质因分子尺寸较大,不
蛋白质脱盐有哪些方法
常用的脱盐方法有透析法、电透析法和凝胶过滤法。透析法及电透析法耗时长,样品稀释度大,不易放大进行大规模生产,所以工业生产中应用较少。凝胶过滤层析脱盐过程中盐分子和蛋白质分子大小差异巨大,蛋白质溶液中小分子的盐分子随着层析流动相进入孔径较小的固定相,使其在层析中的迁移速率小,而蛋白质因分子尺寸较大,不
蛋白质浓度很低,应该用什么方法来浓缩?
蛋白质的浓缩有很多方法。大致有超滤法,沉淀法和透析法。超滤比较温和,对蛋白质不会有修饰和改变,蛋白的种类一般不会有丢失。它的缺点是总样品的量可能会减少(被膜所吸附)。另外超滤对样品的要求比较高。甘油,去垢剂都会堵塞滤膜,影响超滤的效果。沉淀法比较快速,容易操作,对盐,甘油,去垢剂的耐受性好。缺点是可
电透析的发展历程
1980 年代因使用脂肪质阴离子薄膜( Aliphatic anion membrane )之缘故,往复式电透析法更得以有效解决各种问题,包括悬浮物质、有机物、含矿物质之排放等。盐类溶解于水中将分解产生离子,且盐类溶液属电解质(Electrolyte ),电透析法系将无数的阴/阳离子薄膜,交错的
概述超滤法的测定血浆蛋白结合率
超滤法与平衡透析法相似,也是研究蛋白质与小分子结合作用的常用方法。该方法是在压力差的驱动下,药物分子扩散透过半透膜。超滤法的最大优点是实现血浆中游离小分子的快速分离、用时短,与平衡透析法相比,大大提高了分离速率。但该方法也同样存在Gibbs-Donna效应、非特异性的透析设备表面的药物吸附效应以