PCR注意事项及解决方案
PCR 技术的敏感性极高,极微量的污染即可导致假阳性的产生,因此,了解 PCR 污染的原因,采取相应的措施预防和消除 PCR 污染就十分重要。PCR 污染主要是随机污染,包括 PCR 反应前污染及反应后污染。(1)PCR 反应前污染主要是样品 DNA 的交叉污染。提取 DNA 使用的仪器上残留的杂质 DNA 或反应管中残留的 PCR 产物、PCR 操作者皮肤或头发等均可引起样品污染。其中 PCR 产物的污染,也称残留污染(carryover),是引起样品交叉污染的主要因素。明胶、Taq DNA 聚合酶等 PCR 反应试剂等均有可能带有杂质 DNA,因此也可导致 PCR反应前污染。(2)PCR 反应后污染PCR 反应后污染主要来自于 PCR 产物检测过程,如电泳上样、点杂交点样时加样器吸头之间的污染等。(3)潜在的 PCR 污染源主要包括3个方面:①仪器设备的污染,样品收集器、微量加样器、点杂交器、离心管、离心机、切片机、pH计、......阅读全文
PCR注意事项及解决方案
PCR 技术的敏感性极高,极微量的污染即可导致假阳性的产生,因此,了解 PCR 污染的原因,采取相应的措施预防和消除 PCR 污染就十分重要。PCR 污染主要是随机污染,包括 PCR 反应前污染及反应后污染。(1)PCR 反应前污染主要是样品 DNA 的交叉污染。提取 DNA 使用的仪器上残留的杂质
PCR仪PCR注意事项及解决方案
1、PCR 污染PCR 技术的敏感性极高,极微量的污染即可导致假阳性的产生,因此,了解 PCR 污染的原因,采取相应的措施预防和消除 PCR 污染就十分重要。PCR 污染主要是随机污染,包括 PCR 反应前污染及反应后污染。(1)PCR 反应前污染主要是样品 DNA 的交叉污染。提取 DNA 使用的
PCR技术应用的注意事项及解决方案
1、PCR 污染PCR 技术的敏感性极高,极微量的污染即可导致假阳性的产生,因此,了解 PCR 污染的原因,采取相应的措施预防和消除 PCR 污染就十分重要。PCR 污染主要是随机污染,包括 PCR 反应前污染及反应后污染。(1)PCR 反应前污染主要是样品 DNA 的交叉污染。提取 DNA 使用的
PCR引物设计原则
1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因,通过序列分析软件(比如DNAman)比对(Alignment),各基因相同的序列就是该基因的保守区。2.引物长度一般在15~30碱基之间。引物长度(primer leng
PCR引物设计原则
PCR-引物设计原则 1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因,通过序列分析软件(比如DNAman)比对(Alignment),各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2.引物长度一般在15~30碱基之间。
自动电位滴定仪注意事项及常见故障解决方案
电位滴定法是在滴定过程中通过测量电位变化以确定滴定终点的方法,和直接电位法相比,电位滴定法不需要准确的测量电极电位值,因此,温度、液体接界电位的影响并不重要,其准确度优于直接电位法,普通滴定法是依靠指示剂颜色变化来指示滴定终点,如果待测溶液有颜色或浑浊时,终点的指示就比较困难,或者根本找不到合适的
实时荧光PCR技术大简析
实时荧光PCR(real-time PCR)因其全封闭扩增,简单快速,重复性好,无扩增后处理以及易于自动化等优点,广受大家欢迎。在分子诊断领域中,实时荧光PCR方法涉及的领域包括感染性疾病、肿瘤、遗传病等多方面。那么实时荧光PCR技术是如诞生的呢?下面,由小编带领大家一起了解大牛们是如何经过
余氯的危害及解决方案
余氯的危害及解决方案:1. 余氯的概念 residual chlorine 水中投氯,经一定时间接触后,在水中余留的游离性氯和结合性氯的总称。 是指氯投入水中后,除了与水中细菌、微生物、有机物、无机物等作用消耗一部分氯量外,还剩下了一部分氯量,这部分氯量就叫做余氯。2. 余氯的分类
多重PCR基因芯片检测新研究
来自中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病诊断室的研究人员建立并初步评价了一种针对重要肠道病原菌的多重PCR基因芯片检测方法,这一方法具有较高的特异性,并且混合PCR可以分别按照种属内和种属间的引物组合方案用于多病原的筛检。 感染性腹泻在我国发病率居各类传染病之首,长期以来严重危害人民
多重PCR基因芯片检测新研究
来自疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病诊断室的研究人员建立并初步评价了一种针对重要肠道病原菌的多重PCR基因芯片方法,这一方法具有较高的特异性,并且混合PCR可以分别按照种属内和种属间的引物组合方案用于多病原的筛检。 感染性腹泻在我国发病率居各类传染病之首,长期以来严重危害人民健康。其中绝大
氧弹漏气原因及解决方案
氧弹漏气原因及解决方案全自动氧弹量热仪常常会出现氧弹漏气的现象,导致实验不能进行或测试结果不稳定,那么是什么原因造成的呢?全自动氧弹量热仪的氧弹漏气的主要原因是各部件连接部分橡皮圈弹性不好或部件磨损造成的接触不严密所致。 既然找到了漏气原因,那么又该如何解决这一问题呢?氧弹的橡皮圈失去弹性:一是由于
ELISA常见问题及解决方案
一.背景高或者非特异性染色 原因解决方案抗体的非特异性结合更换封闭液(例如,使用酪蛋白替代BSA);封闭结束后不要清洗;倒出封闭液,吸水纸上吸干残留液体后直接进行下一步。未充分清洗酶标板确保在清洗过程中每个微孔都充满缓冲液、清洗仪器正常工作。各步骤之间清洗3~5次,不要增加清洗次数。清洗完成后,将
ELISA常见问题及解决方案
一.背景高或者非特异性染色 原因 解决方案 抗体的非特异性结合 更换封闭液(例如,使用酪蛋白替代BSA);封闭结束后不要清洗;倒出封闭液,吸水纸上吸干残留液体后直接进行下一步。 未充分清洗酶标板 确保在清洗过程中每个微孔都充满缓冲液、清洗仪器正常工作。各步
PCR常见问题及解决方案
PCR常见问题及解决方案 1没有扩展条带 可能的原因及对应的解决方案如下: 酶失活或在反应体系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或运输不当而失活,往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。 模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸,造成DNA脱嘌呤而影响PCR
ICP常见问题及解决方案
1、Q射频发生器的频率有40.68和27.12MHz两种哪中更好?A单就两种频率本身来说,都可以满足作为热源的需要,但是由于所谓趋肤效应的存在,频率越高趋肤效应越大,这样有两个好处:等离子体厚度小,光强会更大;中心孔道大,样品对等离子体的影响小(等离子体也是电导体),不容易导致灭火,尤其切换到高盐、
ELISA常见问题及解决方案
一.背景高或者非特异性染色 原因 解决方案 抗体的非特异性结合 更换封闭液(例如,使用酪蛋白替代BSA);封闭结束后不要清洗;倒出封闭液,吸水纸上吸干残留液体后直接进行下一步。 未充分清洗酶标板 确保在清洗过程中每个微孔都充满缓冲液、清洗仪器正常工作。各步
酶标仪常见故障及解决方案
1、 打印机不工作⑴ 酶标仪后部DIL开关设置不正确。DIL标准设置:左 下下下下下下上下 上上下下上下上上 右(人站在仪器后部,面向仪器)。⑵ 酶标仪内置打印机开关处于开的位置。应在总参数中设置内置打印机为关。⑶ 打印机接口接错(接在了计算机接口上了)。应将打印机接在DIL开关正下方的打印机接口上
酶标仪常见故障及解决方案
任何仪器在使用时往往都会出现一些小故障,酶标仪也一样,在使用过程中往往会出现开机后无反应、测量的吸收值与目测结果相差很大、酶标仪打印机出现异常等等。1、 打印机不工作⑴ 酶标仪后部DIL开关设置不正确。DIL标准设置:左 下下下下下下上下 上上下下上下上上 右(人站在仪器后部,面向仪器)。⑵ 酶标仪
酶标仪常见故障及解决方案
任何仪器在使用时往往都会出现一些小故障,酶标仪也一样,在使用过程中往往会出现开机后无反应、测量的吸收值与目测结果相差很大、酶标仪打印机出现异常等等。1、 打印机不工作⑴ 酶标仪后部DIL开关设置不正确。DIL标准设置:左 下下下下下下上下 上上下下上下上上 右(人站在仪器后部,面向仪器)。⑵ 酶
溶藻弧菌核酸检测试剂盒(PCR荧光探针法)实验注意...
溶藻弧菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)实验注意事项溶藻弧菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)实验注意事项:1) 溶藻弧菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;2) 客户尽可能提供
夹心法ELISA检测白介素8操作步骤及注意事项
羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒操作步骤: 1. 包被:pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1μg/ml,加入96孔板,100μl/孔,放4℃,36小时。 2. 封闭:0.1%吐温PBS(Buffer A)冲洗96孔板三次,加3%BSA Buffer A(Buffer B
PH计常见问题及解决方案
1.同一样品,两次测量的 pH值不一样? 温度变化或样品本身发生了化学反应,都会引起 pH值的变化。所以,应尽量保持温度一致,并且避免化学反应。 2.同一样品,同时在两台 pH计上测量,读数不一致? 由于两台 pH计的校正条件不一样(如,不同时间做的校正),造成测量值有差异。所以要用同一缓冲液
新型节能球磨机发热原因及解决方案
新型节能球磨机发热的常见原因及排除办法: 1、蜗轮蜗杆过热,轴承损坏,异物侵入,蜗轮、蜗杆过度磨损导致节能球磨机发热故障;排除办法: 更换或维修,更换轴承,去除异物并更换润滑油,更换过度磨损的蜗轮或蜗杆。 2、油封损伤,密封垫破损,油量过多,油塞松脱,油标破损致使球磨机发热;排除办法:更换油
pH计常见问题及解决方案
1.同一样品,两次测量的pH值不一样? 温度变化或样品本身发生了化学反应,都会引起pH值的变化。所以,应尽量保持温度一致,并且避免化学反应。 2.同一样品,同时在两台pH计上测量,读数不一致? 由于两台pH计的校正条件不一样(如不同时间做的校正),造成测量值有差异。所以要用同一缓冲液在同一
ELISA实验常见问题及解决方案
指南。以下是影响ELISA检测的关键因素,也是众多ELISA 用户在实验中经常遇到的问题及解决方案,希望能对您的ELISA检测有帮助:为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作? 温度是ELISA结合反应的重要影响因素。为了使所有样本在一致的温度下反应,实验前务必将所有试剂平衡至室温,包
TA克隆常见问题及解决方案
TA克隆方法(Original TA Cloning Kit)把PCR片断与一个具有3-T突出的载体DNA连接起来的方法。因为PCR反应中所适用的聚合酶具有末端转移的活性,通常在3加上A。例如:Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能,PCR反应时在每条PCR扩增产物的3端自动添加一个3-A突
高纯水PH值测量及解决方案
高纯水中 pH 值测量是较困难的,其困难在于如下几个方面: 一. 由于是纯水,本身缓冲能力特别弱,极其容易受到污染,极容易改变本身的 pH 值。若在纯水中混入2ppm杂质, pH 变化特别明显。例如:混入2ppmNaoH pH 值从7→10,2ppm CO2 pH 值从7→6,2pp
氘灯常见问题及解决方案
光源问题Q&AQ1:什么时候应该更换氘灯? A1:氘灯质保寿命都在1000小时或2000小时使用时间;当您发现仪器系统计时器氘灯使用时间达到质保时间后就应当更换氘灯;从经济的角度考虑,如果氘灯能量信噪比符合实际使用需求,便无须更换。Q2:购买氘灯应该提供哪些信息?A2:提供使用氘灯的仪器品牌和型号以
核酸电泳常见问题及解决方案
核酸电泳常见问题及解决方案
Western-Blotting常见问题及解决方案
Western Blotting常见问题及解决方案问题原因解决方案胶不平玻璃板不干净胶板洗刷干净;催化剂或加速剂的量不合适加入过硫酸铵和TEMED的量要合适;试剂未混均,致使部分胶块聚合不均匀加入试剂后摇匀,使其充分混合;受热不均匀导致胶聚合不均匀温度合适凝胶漏液玻璃板未对齐两块玻璃板底部要对齐条带