PCR假阳性的原因分析及解决办法

假阳性是指出现的 PCR 扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。产生的原因有:①引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行 PCR 扩增时,扩增出的 PCR 产物为非目的序列;②靶序列太短或引物太短;③靶序列或扩增产物的交叉污染。解决方法有:操作轻柔,防止靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外造成污染;除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或器材高压消毒;离心管及加样枪头等一次性使用。必要时,可在加标本前,将反应管和试剂用紫外光照射,以破坏存在的核酸。......阅读全文

PCR假阳性的原因分析及解决办法

假阳性是指出现的 PCR 扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。产生的原因有:①引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行 PCR 扩增时,扩增出的 PCR 产物为非目的序列;②靶序列太短或引物太短;③靶序列或扩增产物的交叉污染。解决方法有:操作轻柔,防止

PCR假阳性产生原因分析

假阳性是指出现的 PCR 扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。产生的原因有:①引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行 PCR 扩增时,扩增出的 PCR 产物为非目的序列;②靶序列太短或引物太短;③靶序列或扩增产物的交叉污染。解决方法有:操作轻柔,防止

PCR假阴性的原因分析及解决办法

假阴性是指不出现特异扩增带。可能原因:引物设计不合理,酶失活或酶量不足,模板量太少,退火温度不合适,循环次数过少,产物未及时电泳检测等。解决方法有:重新设计引物,增加酶量或调换酶,增加模板量,调整退火温度,增加循环次数,及时检测扩增产物,一般在 48h 以内进行。

PCR拖尾及假阳性的原因及对策

拖尾  现象:产物在凝胶上呈Smear状态。  原因:  1.模板不纯  2.Buffer不合适  3.退火温度偏低  4.酶量过多  5.dNTP、Mg2+浓度偏高  6.循环次数过多  对策:  1.纯化模板  2.更换Buffer  3.适当提高退火温度  4.适量用酶  5.适当降低dNTP

PCR-反应出现假阳性结果原因

1 ) 引物设计不合适: 选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而,在进行PCR扩增时,扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。 2 ) 靶序列或扩增产物的交叉污染: 这种污染有两种原因: 一是整个基因组或大片段的交叉污染,导致假

PCR仪PCR结果出现假阳性是什么原因?

假阳性假阳性是指出现的 PCR 扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。产生的原因有:①引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行 PCR 扩增时,扩增出的 PCR 产物为非目的序列;②靶序列太短或引物太短;③靶序列或扩增产物的交叉污染。解决方法有:操作轻柔

基因扩增PCR的扩增结果假阳性的原因

出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。 引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行PCR扩增时,扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。 靶序列或扩增产物的交叉污染:这种污染有两种原因:一是整个

PCR假阴性的原因分析

PCR的假阳性问题是在PCR诞生之初就被深刻认识到了,同时由于造成假阳性的因素相对单一,因此假阳性并不是困惑检验工作的主要原因。如果一个项目只是阳性率高敏感性好的话,那么可以认为其阴性结果具备很高的可排除性,仍然有相当的临床适用价值。但PCR的假阴性在检验工作中仍很严重,并且用些因素经常被人忽略,严

PCR假阴性的原因分析

PCR的假阳性问题是在PCR诞生之初就被深刻认识到了,同时由于造成假阳性的因素相对单一,因此假阳性并不是困惑检验工作的主要原因。如果一个项目只是阳性率高敏感性好的话,那么可以认为其阴性结果具备很高的可排除性,仍然有相当的临床适用价值。但PCR的假阴性在检验工作中仍很严重,并且用些因素经常被人忽略,严

PCR假阴性的原因分析

PCR假阳性问题是在PCR诞生之初就被深刻认识到了,同时由于造成假阳性的因素相对单一,因此假阳性并不是困惑检验工作的主要原因。如果一个项目只是阳性率高敏感性好的话,那么可以认为其阴性结果具备很高的可排除性,仍然有相当的临床适用价值。但PCR的假阴性在检验工作中仍很严重,并且用些因素经常被人忽略,严重

尿妊娠试验假阳性原因分析

绒毛膜促性腺激素(hCG)是由胎盘绒毛膜滋养层细胞产生的一种具有促性腺发育的糖蛋白激素,由α和β两个亚基组成。    其中α亚基与垂体分泌的卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和促甲状腺激素(TSH)的α亚基相似,β亚基则是特异的,因此一般用β-hCG 抗体来测定标本中的β-hCG。    尿妊

导致尿HCG假阳性的原因分析

HCG检测应以血β-HCG检查为准。尿妊娠试验有时候受其他的因素影响,比如其他的一些激素,比如LH激素有时就可与试纸反应,导致假阳性;还有甲状腺系列的激素也有可能对它有影响。有时候无法确定到底是什么干扰因素导致的假阳性。总之尿试纸条检测的干扰因素要比血β-HCG要多一些。 HCG是胎盘绒毛膜滋养层细

导致尿HCG假阳性的原因分析

HCG检测应以血β-HCG检查为准。尿妊娠试验有时候受其他的因素影响,比如其他的一些激素,比如LH激素有时就可与试纸反应,导致假阳性;还有甲状腺系列的激素也有可能对它有影响。有时候无法确定到底是什么干扰因素导致的假阳性。总之尿试纸条检测的干扰因素要比血β-HCG要多一些。 HCG是胎盘绒毛膜滋

导致尿HCG假阳性的原因分析

应以血HCG检查为准。尿妊娠试验有时候受其他的因素影响,比如其他的一些激素,比如LH激素有时就可与试纸反应,导致假阳性;还有甲状腺系列的激素也有可能对它有影响。有时候无法确定到底是什么干扰因素导致的假阳性。总之尿试纸条检测的干扰因素要比血B-HCG要多一些。 HCG是胎盘绒毛膜滋养层细胞产生的一种具

血培养假阳性的原因及对策

 色原法血培养系统采用比色计传感器和反射光原理,监测溶于培养基中的二氧化碳(CO2)的产生和存在状况。样本中存在的微生物在新陈代谢或分解糖类过程中产生CO2导致培养基酸碱度(PH)改变,从而导致培养瓶底部的半透硅胶材料(Liquid Emulsion Sensor , LES)颜色变浅,通过

血培养假阳性的原因及对策

色原法血培养系统采用比色计传感器和反射光原理,监测溶于培养基中的二氧化碳(CO2)的产生和存在状况。样本中存在的微生物在新陈代谢或分解糖类过程中产生CO2导致培养基酸碱度(PH)改变,从而导致培养瓶底部的半透硅胶材料(Liquid Emulsion Sensor , LES)颜色变浅,通过照射感应器

什么是PCR假阳性?

假阳性是指出现的 PCR 扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。产生的原因有:①引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行 PCR 扩增时,扩增出的 PCR 产物为非目的序列;②靶序列太短或引物太短;③靶序列或扩增产物的交叉污染。解决方法有:操作轻柔,防止

ELISA法测梅毒抗体假阳性原因分析及对策

梅毒血清学试验对梅毒的诊断有很大的价值,但它存在着一定的假阳性和假阴性情况,其结果一定要结合病史和临床、体格检查综合分析考虑。近年来梅毒在我国的发病率呈上升趋势。梅毒是由梅毒螺旋体感染引起的一种性传播性疾病之一,可侵犯全身各脏器,几乎可以引起全身所有组织器官的损害和病变,导致功能障碍。梅毒螺旋体抗体

什么是菌落pcr假阳性

利用菌落作为模板进行PCR扩增,验证该菌落里是否带有目标片段。但是由于PCR是一个级联放大的过程,所以即使菌落中不含有目标片段,而是菌落表面沾有一部分之前连接,转化中用的目标DNA,也会导致PCR获得扩增条带,从而误认为这个菌落已经带有了目标片段,称之为假阳性。可以通过提质粒酶切,或者测序验证,排除

酶免法检测HBeAg假阳性原因分析

我们在应用酶免法检测乙型肝炎病毒血清学标志物时,发现有时会出现单项HBeAg(+)或HBeAg(+)、抗-HBs(+)等罕见模式。为慎重起见再将标本离心后复检 HBeAg, 结果为阴性。为此我们特做如下实验。取10份 HBeAg 阴性的献血员的不抗凝血液,每份分两管,一管静置0.5h、1h、2h;另

PCR的假阳性和假阴性如何解释

假阳性假阳性是指出现的 PCR 扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。产生的原因有:①引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行 PCR 扩增时,扩增出的 PCR 产物为非目的序列;②靶序列太短或引物太短;③靶序列或扩增产物的交叉污染。解决方法有:操作轻柔

PCR实验中假阳性和假阴性的防治

1,标本采集必须合格,否则不做。2,严格按照操作规程,避免人为实验误差。3,用于操作的各种仪器,加样器,必须通过审核验收,仪器选贵的,进口的!4,最主要的就是试剂,选择公认的,优质试剂

化学发光假阳性本底产生的原因分析

近期收到有小伙伴提问,关于如何解决发光试剂盒研发过程中的本底偏高和假阳性问题。解决问题最重要的是了解问题产生的原因,本微信平台分类汇总了化学发光试剂产生假阳性本底的原因,由于问题本身并没有很具体的描述,因此本文也只广泛的汇总,不包含具体的项目或者方法学方面的内容。希望对大家的工作有所帮助。抗原/抗体

化学发光假阳性本底产生的原因分析

 近期收到有小伙伴提问,关于如何解决发光试剂盒研发过程中的本底偏高和假阳性问题。解决问题最重要的是了解问题产生的原因,本微信平台分类汇总了化学发光试剂产生假阳性本底的原因,由于问题本身并没有很具体的描述,因此本文也只广泛的汇总,不包含具体的项目或者方法学方面的内容。希望对大家的工作有所帮助。   

PCR假阴性的原因

假阴性是指不出现特异扩增带。可能原因:引物设计不合理,酶失活或酶量不足,模板量太少,退火温度不合适,循环次数过少,产物未及时电泳检测等。解决方法有:重新设计引物,增加酶量或调换酶,增加模板量,调整退火温度,增加循环次数,及时检测扩增产物,一般在 48h 以内进行。

PCR假阴性的原因

造成PCR假阴性的原因是复杂的,也是多样的。主要有: 1.PCR仪本身的质量问题。PCR仪设计原理上的差异和经常出现的质量问题(如:温控不准等)给临床带来了诸如非特异性扩增(假阳性)、扩增效率下降(假阴性)等问题. 2.离心机问题。离心机的质量或使用不正确,造成离心标本模板没有分离出来造成假阴性,窃

导致PCR假阳性的污染源

 PCR反应的特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。一、标本交叉污染源:收集标本的容器:标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;吸样枪:标本核酸模板在提取过程中,由于污染导致标本间污染;气溶胶:zui可能

尿液分析仪检测出现假阳性的原因

 假阳性。即尿液分析仪潜血反应阳性,镜检阴性,其常见原因有:  (1)血红蛋白(Hb) 尿液分析仪潜血反应既能与完整的RBC发生阳性反应,也可与RBC溶解释放的Hb发生阳性反应,而显微镜只能检出尿中未溶解的RBC。健康人尿中Hb含量极微,定性为阴性。疾病时,尿中Hb有两个来源:一是发生血管内溶血,血

HBsAg假阳性和假阴性原因分析之ELISA法和金标法

ELISA法ELISA法假阴性原因1、标本用肝素或EDTA等抗凝处理易造成HBsAg检测结果假阴性,肝素抗凝血浆会增加OD值,可能与高浓度肝素具有强大的负电荷,能吸附酶标记物不易洗脱有关;EDTA、酶抑制剂可抑制ELISA系统中的辣根过氧化物酶活性,造成假阴性。2、标本保存不当,在冰箱内保存过久的标

造成PCR假阴性的原因

PCR的假阴性在检验工作中仍很严重,并且用些因素经常 被人忽略,严重的影响了PCR的使用。可以想象一种假阳性和假阴性都很高的项目,有什么样的诊断价值。造成PCR假阴性的原因是复杂 的,也是多样的。主要有:1.PCR仪本身的质量问题。PCR仪设计原理上的差异和经常出现的质量问题(如:温控不准等)给临床