细胞培养传代培养的实验步骤和注意事项
实验步骤1．入无菌室之前用肥皂洗手，用75%酒精擦拭消毒双手。2．倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液置37℃下预热。3．超净台台面应整洁，用0.1%新洁尔灭溶液擦净。4．打开超净台的紫外灯照射台面20min左右，关闭超净台的紫外灯，打开抽风机清洁空气，除去臭氧。5．点燃酒精灯；取出无菌试管，巴斯德吸管和刻度吸管；安上橡皮头；过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内。6．将培养用液瓶口用75%酒精消毒，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上。7．倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用2—3mLHanks液洗去残留的旧培养基，或用少量胰酶涮洗一下。8．每个大培养瓶加入1mL胰酶，小瓶用量酌减，盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察，当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶，然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中。9．加入少量的含血清的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补......阅读全文
小鼠胚胎干细胞培养实验步骤
一般培养-保持胚胎干细胞处于未分化状态 培养基 细胞复苏 冻存细胞 明胶包被 细胞传代 体外分化 培养基 包被有多聚鸟氨酸/纤维结合蛋白的培养板（使用或不使用盖玻片） 体外分化方法 注：以下培养针对于小鼠的R1胚胎干细胞系，其它胚胎
小鼠胚胎干细胞培养实验步骤
1、一般培养——保持胚胎干细胞处于未分化状态 培养基细胞复苏冻存细胞明胶包被细胞传代 2 、体外分化 培养基：包被有多聚鸟氨酸/纤维结合蛋白的培养板（使用或不使用盖玻片） 体外分化方法 注：以下培养针对于小鼠的R1胚胎干细胞系，其它胚胎干细胞的培养可以参考。不过人的胚胎干细胞培养不可以采用下面的pr
细胞培养实验的注意事项
1、选择正确的培养基 在养细胞之前，就要了解，你所养细胞的来源以及种类和名称，查阅一定量的文献，确定所需培养液种类以及是否需要添加特殊成分，常用的细胞培养液有DMEM、RPMI1640、F12等等，一些常见的细胞基本可以使用这几种培养基中的一种来培养，有的需要加入一定其他成分，这需要根据不同的
细胞的传代培养实验
细胞的传代培养实验可以用于：（1）扩增细胞数量；（2）扩大细胞培养。内容来源：中国医科大学实验指导手册。实验方法原理体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后，由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭
细胞的传代培养实验
实验方法原理 体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后，由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭，将培养的细胞分散，从容器中取出，以1:2
细胞的传代培养实验
实验方法原理 体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后，由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭，将培养的细胞分散，从容器中取出，以1:2
细胞培养的步骤
细胞培养的步骤：1、细胞复苏将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。将融化的细胞移入离心管中，加入37℃预热的DMEM完全培养基中（其中胎牛血清约为10%），轻轻吹匀，离心，500g离心2min，弃上清液。加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。加入DMEM完全培养基，轻轻吹打混
消化法细胞传代培养的操作步骤
我们实验室是首先吸去旧培养基，加入约2ml胰蛋白酶洗一遍，吸去胰酶，再加入约1ml胰酶，消化2-3分钟（37度），吸去胰酶加入新鲜培养基越4ml，对细胞进行吹打直至打散，此时可以吸去部分细胞悬液，再补充至4ml,就OK
细胞传代培养实验
体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的延续。二氧化碳培养箱是通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞/组织在生物体内的生长环境，培养箱要求稳定的温度（37°C）、稳定的CO2水平（5%）、恒定的酸碱度（pH值：7.2-7.4）
织物透气性实验步骤和注意事项
一、实验目的与要求 1、掌握透气量仪的测试原理和各压力差的含义。2、掌握透气性的测定方法和指标。 3、对比分析各种织物透气性的差异，进一步理解影响织物透气性的因素。 二、基础知识 空气透过织物的能力称为织物的透气性。它直接影响到织物的服用性能。如夏季用的织物希望有较好的透气性，而冬天用的织物
protocol：小鼠胚胎干细胞培养实验方法和操作步骤1
1、一般培养：保持胚胎干细胞处于未分化状态培养基细胞复苏冻存细胞明胶包被细胞传代2 、体外分化培养基包被有多聚鸟氨酸/纤维结合蛋白的培养板（使用或不使用盖玻片）体外分化方法注：以下培养针对于小鼠的R1胚胎干细胞系，其它胚胎干细胞的培养可以参考。不过人的胚胎干细胞培养不可以采用下面的protocol，
protocol：小鼠胚胎干细胞培养实验方法和操作步骤3
体外分化方法第1步：ES培养基在LIF存在的条件下维持细胞培养第2步：EB培养基使用细菌培养皿去除LIF后胚状体的形成需要4天。1、分散纯化细胞（参见上面的细胞传代部分）2、纯化 2小时后将细胞转入含有ES培养基的50ml Falcon管中，计数细胞取适量体积放入15ml管中离心3分钟。3、用2ml
protocol：小鼠胚胎干细胞培养实验方法和操作步骤2
体外向心肌细胞方向分化胚胎干细胞在体外去除LIF情况下会自然向心肌细胞方向分化，小鼠的R1系一般在第7-8天自然出现搏动的心肌细胞，与胚胎发育时间线是完全一致的。培养基：EB 配制一20×不含DMEM，FBS，LIF的溶液（该溶液也能用于ES培养基--见前述）。分装在50ml 离心管中，（稀释为
小鼠胚胎干细胞培养实验步骤（一）
一般培养-保持胚胎干细胞处于未分化状态培养基细胞复苏冻存细胞明胶包被细胞传代体外分化培养基包被有多聚鸟氨酸/纤维结合蛋白的培养板（使用或不使用盖玻片）体外分化方法注：以下培养针对于小鼠的R1胚胎干细胞系，其它胚胎干细胞的培养可以参考。不过人的胚胎干细胞培养不可以采用下面的protocol，需要用专用
小鼠胚胎干细胞培养实验步骤（四）
第3步--ITSFn培养基在最少量培养基中选择神经前体细胞1．在胚状体接种在组织培养皿一天后将培养基换成ITSFn培养基2．并非所有胚状体在这一时期都已经发生粘附，因此在移除培养基时要小心谨慎以使大部分胚状体留在培养皿内。3．保持细胞在ITSFn中培养大约10天，根据需要更换培养基--大约每隔一天。
小鼠胚胎干细胞培养实验步骤（三）
ITSFn and N3（分化培养基）：配制一20×不含DMEM/F12的溶液。分装在15ml 离心管中，（稀释为1×，ITSFn 7.05ml，N3 12.55ml），0.2μm滤膜过滤，贮存在-20℃。将该溶液加入DMEM/F12中制备培养基，贮存于4℃。 贮存液 DMEM(高
小鼠胚胎干细胞培养实验步骤（二）
Geltin（明胶）包被准备500ml 0.1％geltin溶液1．将0.5 g明胶溶解在500ml无钙镁的PBS中（50－65℃水浴15～30分钟）。2．最好在溶液没有冷却的情况下通过0.22 μm滤膜过滤，贮存在4℃。包被培养板或培养皿1．加入足量的明胶溶液覆盖培养平面（15 cm培养皿加2ml
免疫印迹法实验的操作步骤和注意事项
操作步骤 一蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃，13,000r离心15min。取上清液作为样品。 二电泳：制备电泳凝胶，进行SDS-PAGE。 三转移：（半干式转移） 1、电泳结束后将胶条
细胞培养细胞培养的具体步骤
一、细胞复苏将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移入15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM完全培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。加入10ml DMEM培养基清洗，弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5
MTT实验原理和实验步骤
MTT原理：MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，是一种黄颜色的染料。活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTT，同时在细胞色素C的作用下，生成蓝色（或蓝紫色）不溶于水的甲臜（Formaza
细胞培养的操作步骤
一、原代培养及其操作步骤原代分离细胞培养是指从供体内取出组织后，经机械以及消化分离成单个细胞或单一型细胞群，使之在体外模拟人体生理环境，在无菌、适当温度和一定的营养条件下，生存、生长和繁殖。原代培养细胞常有不同的细胞成分，生长缓慢，但是更能代表所来源的组织细胞类型和表达组织的特异性特征。利用原代细胞
Southern－Blotting实验原理、操作步骤和注意事项1
对于大的基因组，DNA酶切图谱凭肉眼是分辨不开的（EB染色），因为大小不等的分子呈现弥散分布，只有借助灵敏的放射性同位素（或其他化学发光物质），将靶DNA在凝胶上（膜上）的带型通过特定的探针与之杂交，转换成X光片上直观的带型，才能进行相关分析。另外如果需要鉴定或寻找与已知DNA同源的 DNA片段
Southern－Blotting实验原理、操作步骤和注意事项2
按先将水和DNA 按反应体系所需的量取至一1.5毫升离心管中，混匀，短暂离心至管底，放至100℃干浴中变性10 min，变性探针迅速置于冰浴上 5 min，按反应体系将反应混合液（dNTP，Random primer，Klenow ）加入变性DNA中，在同位素操作台上，加入32P 标记的dN
人类滑膜原代细胞培养步骤和体会
1、将切下的组织在手术台上请护士将标本放入低温生理盐水中（可不要动它），在手术完成时将标本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室；2、在超净台中将标本放入培养皿中，加入α-MEM洗涤；3、获得组织切开，仔细辨认于关节反折处及增生的白色光滑的滑膜组织，附于关节软骨面的增生的血管翳也为滑膜组织（
MDCK细胞培养所需材料和操作步骤
MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。二、适用范围适用于疾控中心所有技术人员 。三、程序（一）生物安全要求实验室生物安全级别：BSL-1所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。（二）材料1. 生长成片的MDCK
elisa的原理和实验步骤
1. ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗
elisa的原理和实验步骤
ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与
wb实验的原理和步骤
WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（例如PVDF膜）上。再以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与相对应的第一抗体特异性结合，之后再与酶或同位素标记的第二抗体相结合，最终通过底物显色或放射自显影来检测特异性目的基因表达的蛋白成分。
elisa的原理和实验步骤
ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与
细胞的原代和传代培养
实验概要初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物工程在医学上的应用打下基础。实验原理1. 细胞培养(Cell culture)是模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。近年来，广泛地应