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DNA 或 RNA 片段能识别特定序列基因的 DNA 片段,能与互补的核苷酸序列特异结合,这种用同位素或非同位素标记的单链 DNA 片段即为核酸探针。核酸探针技术是将双链 DNA 经加热或碱处理,使碱基对间的氢链被破坏而变性,解开成两条互补的单链。它们在一定温度和中性盐溶液条件下,又可按 A-T、G-C 碱基配对的原则重新组合成双链为复性。这种重新组合只是在两股 DNA 是互补(同源)或部分互补(部分同源)的条件下才能实现。正是由于双链 DNA 的这种可解离与重新组合的性质,才可用一条已知的单链 DNA,用放射性同位素或其他方法标记后制备成核酸探针,与另一条固定在硝酸纤维素滤膜上的变性单链 DNA 进行杂交(另一条 DNA 链与核酸探针是配对碱基,称为靶),再用放射自显影或其他显色技术检测,以确定有无与探针 DNA(或 RNA)同源或部分同源的 DNA(或RNA)存在。因为探针只与靶病原体的 DNA 或 RNA 杂交,而不与标本......阅读全文
DNA 或 RNA 片段能识别特定序列基因的 DNA 片段,能与互补的核苷酸序列特异结合,这种用同位素或非同位素标记的单链 DNA 片段即为核酸探针。核酸探针技术是将双链 DNA 经加热或碱处理,使碱基对间的氢链被破坏而变性,解开成两条互补的单链。它们在一定温度和中性盐溶液条件下,又可按 A-T、G
切口平移(nick translation)是制备核酸探针的常用方法之一。该方法用 DNase Ⅰ在双链 DNA 内部切开若干个单链切口形成3'-OH 末端,而不打断 DNA 的双链结构;用大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ的5'→3'核酸外切酶活性,从游离5'端降解双链 D
转录标记(transcription labeling)是利用启动子(oromoter)结合 RNA 聚合酶启动转录的特性设计的一种标记方法。Melotn(1984)等将目的 DNA 片段克隆到含 SP 启动子的载体上,目的基因位于启动子下游,加上 RNA 聚合酶,转录合成了 RNA 探针。与切口平
PCR 技术是1985年 KarryMullis 等首先创建的可在体外迅速、大量地扩增一定长度的核苷酸序列的技术。PCR问世以来已广泛应用于分子生物学研究和疾病诊断中。此技术还应用于核酸探针的制备。Girgsi 等(1988)应用 PCR 从多序列制备了 DNA 探针。Shcow-aletr 和 S
末端标记(end labeling)是利用酶学方法或化学方法将标记物,如同位素、生物素、荧光素等标记到核苷酸链的5'或3'端制备探针。酶学方法中常用的酶有:经枯草杆菌蛋白酶水解大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ形成具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性
随机引物标记(random primer labeling)是利用单链 DNA 与六核苷酸(hexamer)退火结合,以六核苷酸为引物,加入4种 dNTP,其中1种标有同位素或生物素,用 Klenow 片段催化合成带有标记的互补 DNA 链,标记率高而且不受琼脂糖影响。该法不适于标记 RNA。Fei
光敏生物素标记(photobiotin labeling)是Forster(1985)等报道的核酸探针制备方法。光敏生物素是一种可用光照活化的生物素衍生物,它的乙酸盐很容易溶于水,在水溶液中将光敏生物素乙酸盐与需要标记的核酸混合,用强的可见光照射,就可将生物素标记在单链或双链的 DNA 或 RNA
原理：碱基互补配对。。探针：DNA单链－化学连接的标记基团探针和目标DNA（经过加热，分成单链）混合，探针结合的目标DNA就会被标记
一、核酸探针预杂交预杂交的目的是用非特异性 DNA 分子(鲑精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其他高分子化合物(Denhart’s溶液)将待测核酸分子中的非特异性位点封闭,以避免这些位点与探针的非特异性结合。杂交反应是使单链核酸探针与固定在膜上的待测核酸单链在一定温度和条件下进行复性反应的过程。杂交
离子探针(IMA)的基本原理是，用高能负氧离子轰击样品表面，测定被飞溅活化出来并发生电离的原子（即离子）的同位素组成，以获得年龄。为一种得到迅猛发展的新型质谱计，它具有许多其他测年方法所没有的优点：不需要化学处理；具有高的分辨率，可同时获得几组年龄以确定被测对象同位素体系是否封闭，有无铅丢失；可对样