PCR清理时的注意事项

PCR 净化其实并不是 DNA 提取技术本身,但它是一种效率高且简单的技术,它只是添加高浓度的结合盐(通常每体积 PCR 反应 3-5 体积盐)和离心来过滤。在实验过程中,PCR Clean-up 试剂盒出现故障也会导致整个实验功亏一篑。因为在PCR 反应中有较多吸收 260 度紫外线的物质,比如:核苷酸、去污剂、盐和引物。所以,PCR 净化试剂盒经常无法正常工作可能是由于 PCR 反应失败所造一般成较难清理。......阅读全文

PCR-清理时的注意事项

 PCR 净化其实并不是 DNA 提取技术本身,但它是一种效率高且简单的技术,它只是添加高浓度的结合盐(通常每体积 PCR 反应 3-5 体积盐)和离心来过滤。在实验过程中,PCR Clean-up 试剂盒出现故障也会导致整个实验功亏一篑。因为在PCR 反应中有较多吸收 260 度紫外线的物质,比如

荧光定量pcr仪的日常清理和保养

   常规维护保养    1.仪器外部清洁    用洁净毛巾擦拭仪器外壳,将仪器挪开原先的位置,清理仪器下面的桌面,以免桌面上积攒的灰尘等杂物堵住通风口。    检查仪器进风口以及出风口是否通畅(具体位置可参见仪器厂家的说明书),以免通风口被灰尘、纤维等杂物堵塞而造成散热不好,从而影响仪器升降温速度

时荧光定量PCR技术

   时荧光定量PCR技术即是在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号实时监测整个PCR进程,zui后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR避免了传统PCR以终产物检测定量产生的偏差,提高实验的重复性。该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化;比较不同组织的 mRNA

PCR操作时应注意的事项

 PCR检测微量感染因子时,容易因为污染的而导致各种问题,因此,进行PCR操作时,操作人员应该严格遵守一些操作规程,zui大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。(1)划分操作区:目前,普通PCR尚不能做到单人单管,实现完全闭管操作,但无论是否能够达到单人单管,均要求实验操作在三个不同的区

配置PCR液时的注意方法

在做克隆鉴定的时候经常需要在酶切鉴定前进行PCR鉴定,每次配置PCR反应液很繁琐,可以将其配置类似kit的形式,按你需要的反应体系列表,然后放大100倍配置100×主反应液(100次反应),其中含buffer,Mg2+,dNTPs,但不含引物和Taq酶,然后可以10×分装或一管储存在-20度,在需要

PCR操作时应注意的事项

PCR检测微量感染因子时,容易因为污染的而导致各种问题,因此,进行PCR操作时,操作人员应该严格遵守一些操作规程,最大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。(1)划分操作区:目前,普通PCR尚不能做到单人单管,实现完全闭管操作,但无论是否能够达到单人单管,均要求实验操作在三个不同的区域内进

PCR操作时应注意的事项

PCR检测微量感染因子时,容易因为污染的而导致各种问题,因此,进行PCR操作时,操作人员应该严格遵守一些操作规程,zui大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。(1)划分操作区:目前,普通PCR尚不能做到单人单管,实现完全闭管操作,但无论是否能够达到单人单管,均要求实验操作在三个不同的区域

PCR电泳时maker条带很暗的原因

这样的话除了Maker加的量少的话,还有可能就是你的样品浓度较高,适当稀释一下样品看看。

PCR时cDNA浓度过大会影响PCR结果吗

浓度大会影响,一般试剂说明都有推荐浓度的。最好按试剂说明选取适当的浓度

荧光PCR时ct值大于30

看了你空间里的溶解曲线,你可以看到溶解峰的温度都很低,全在80以下,你扩出来的东西多半只是引物,你跑定量的时候有做NTC的孔吗,如果有做,可以对照NTC组和加了模板的组,溶解峰还是一样的话,那你扩出来的产物100%是引物了。再有,你的扩增曲线问题,CT太了,一般做定量认为CT=25时,是一个模板扩出

PCR注意事项

 PCR注意事项PCR产物的电泳检测时间  一般为48h以内,有些于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性,不出现扩增条带  PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。  模板:①模板中含有杂蛋

混凝土搅拌机的注意事项与清理事项

  注意事项  1、混凝土搅拌机应设置在平坦的位置,用方木垫起前后轮轴,使轮胎搁高架空,以免在开动时发生走动。  2、混凝土搅拌机应实施二级漏电保护,上班前电源接通后,必须仔细检查,经空车试转认为合格,方可使用。试运转时应检验拌筒转速是否合适,一般情况下,空车速度比重车(装料后)稍快2~3转,如相差

免疫PCR(IMPCR)注意事项

免疫PCR(IM-PCR)注意事项     (1)固相载体的选择:主要取决于抗原在固相载体上的吸附程度。如果抗原吸附良好,可以进行IM-PCR。如果抗原吸附不良,则需选用双抗体夹心IM―PCR。另外选用的固相载体要和PCR仪器相匹配。一般用0.5ml的塑料反应管,也可以用微量滴定板。     (2)

PCR的操作注意事项

实验操作注意事项:尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意:(1)戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套。(2)使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长

PCR的操作注意事项

实验操作注意事项:尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意:(1)戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套。(2)使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长

实时定量PCR时用的ROXrefence有什么作用

ROX是一种荧光染料,能够作为qRT-PCR的基准,也就是说在进行qRT-PCR时,扩增片段的荧光信号(一般用SYBR-Green)要根据ROX的荧光信号作标准化。ROX能够消除由于蒸发等原因导致的反应体系的变化造成的误差。

PCR实验时需要设置阳性内参照的目的

保证你检测的每个样品的均一性,保证检测结果的可比性,如果某一个样品中对PCR扩增有干扰作用,那么就会体现在阳性内参照的结果上,阳性内参照做出来是阴性或者比正常阳性内参照的值要低。

PCR注意事项(一)

PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性,不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板:①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq

PCR注意事项(二)

3)如果没有回收到目的片段,还需要作什么对照实验?A)涂布未转化的感受态细胞。如有菌落,表明氨苄失效,或污染上带有氨苄抗型的质粒,或产生氨苄抗型的菌落。B)转化完整质粒,计算菌落生长数,测定转化效率。例如,将1ug/ul质粒1:100稀释,1ul用于100ul感受态细胞转化。用SOC稀释到1000u

PCR注意事项(三)

⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。引物量: 每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以最低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。酶及其浓度 目前有两种Taq DNA聚合酶供应, 一种是从栖热水生

霉菌培养箱时维护时的注意事项

  霉菌培养箱维护过程中需要的注意事项:   1.插上电源插座(电源应有良好接地),按下电源开关,显示屏亮,此时显示屏所显示的是培养箱室内的实际温度和湿度。   2.用霉菌培养箱底部调节螺钉调节高度,使箱体安置平稳。   3.加湿器的安装:将加湿器的电源插头插在仪器背面的电源插座上,再将

载玻片的清理方法

清理方法:用清水洗或用酒精洗,然后再用棉花或纱布擦干净(最好用擦镜纸,手指避免接触载玻片,以免在其上留下指纹,影响下次观察使用)

荧光定量PCR实验时,荧光基团如何选择?

 原则一    每个反应只检测一个基因的,方法就比较简单,对5’端荧光基团的选择以及3’端淬灭基团的选择余地都是比较大的。比如5’-FAM  +  3’-BHQ,就是比较常见的方案。    下表为常用荧光染料(基团)的颜色及波长参数,供参考。        原则二    如果在每个反应中要检测的目的

PCR实验操作的注意事项

 尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意:    1.戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套;    2.使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间

PCR仪使用的注意事项

PCR仪的使用应该按照说明书上的来!尽量不要保存过夜,能经常使用就不容易坏!

RTPCR的注意事项

一、防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用lv 仿冲洗(注意:有机玻璃器具因可被lv 仿腐蚀,故不能使用)。3. 有机玻璃的电泳槽等,可先用去污剂洗涤,双蒸水冲洗,乙醇干燥,再浸泡在3% H2O2

PCR仪PCR注意事项及解决方案

1、PCR 污染PCR 技术的敏感性极高,极微量的污染即可导致假阳性的产生,因此,了解 PCR 污染的原因,采取相应的措施预防和消除 PCR 污染就十分重要。PCR 污染主要是随机污染,包括 PCR 反应前污染及反应后污染。(1)PCR 反应前污染主要是样品 DNA 的交叉污染。提取 DNA 使用的

解答使用荧光定量pcr仪时的常见问题

解答使用荧光定量pcr仪时的常见问题荧光定量pcr仪实时荧光定量pcr仪,由荧光定量系统和计算机组成,用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表。原始数据收集后可以开始分析。实时设备的软件能使收集

解答使用荧光定量pcr仪时的常见问题

 解答使用荧光定量pcr仪时的常见问题荧光定量pcr仪实时荧光定量pcr仪,由荧光定量系统和计算机组成,用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表。原始数据收集后可以开始分析。实时设备的软件能使收

使用自吸泵时的注意事项

  1 . 先检查各处螺栓有无松动,电源线及插头是否完好,电机绝缘电阻应大于2兆欧。  2、为防触电事故,必须安装漏电断电路器或触电保安器等相应保安措施,并要进行可靠接地  3、泵工作电压使用范围须在额定电压的+5%,-12%这间,否则会使电机使用寿命减短或烧坏。电泵如使用地距电源较远,电源输送线应