荧光定量PCR实验时，荧光基团如何选择？
原则一 每个反应只检测一个基因的，方法就比较简单，对5’端荧光基团的选择以及3’端淬灭基团的选择余地都是比较大的。比如5’-FAM + 3’-BHQ，就是比较常见的方案。 下表为常用荧光染料（基团）的颜色及波长参数，供参考。 原则二 如果在每个反应中要检测的目的基因不止一个，那么尽量选择波长区别较大的发光基团。 一般荧光定量PCR仪常有数个不同的荧光通道。理论上可以通过设置不同的荧光基团、从而达到在一个孔里内同时检测多个基因的目的。 上表中给出的数值只是波长峰值，事实上每种荧光都是呈正态分布的，都有一定的带宽，互相之间都会一些或大或小的交集（见下图）。也就是说，如果两个通道峰值波长相差不是很大的话，是有......阅读全文
荧光定量PCR实验时，荧光基团如何选择？
原则一 每个反应只检测一个基因的，方法就比较简单，对5’端荧光基团的选择以及3’端淬灭基团的选择余地都是比较大的。比如5’-FAM + 3’-BHQ，就是比较常见的方案。 下表为常用荧光染料（基团）的颜色及波长参数，供参考。 原则二 如果在每个反应中要检测的目的
双重荧光定量PCR探针荧光基团该怎么选择
有干扰的话，在仪器上面就可以看出来，比如说，FAM和VIC，FAM有信号，单独看VIC也肯定有信号，只是低点而已
如何选择荧光定量PCR仪？
荧光定量PCR 因操作方便、运行速度快、实验结果准确，受到越来越多的分子生物学研究者青睐。在实验技术成熟的今天，也许对你来说，最难得不是实验技术上的问题——而是选择哪一种荧光定量PCR仪——你要征询实验室成员的意见、分析实验室目前乃至将来的需求、平衡实验室的预算，更要详细研究各种极富诱惑力的宣传
荧光标记基团的选择及其在荧光定量PCR中的应用
PCR实验室产品选择指南 荧光 基团是吸收一定波长的光子后发射特定波长的光波，可以作为抗体等分子的标记物，实时荧光定量PCR中的Taqman探针常用荧光基团FAM标记荧光基团和TAMRA标记。 荧光基团 吸收特定波长的光子后荧光染料(通常称为“荧光基团”或简称为“荧光素”)的化
时荧光定量PCR技术
时荧光定量PCR技术即是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号实时监测整个PCR进程，zui后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR避免了传统PCR以终产物检测定量产生的偏差，提高实验的重复性。该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的 mRNA
如何正确的选择荧光定量PCR仪
定量PCR仪主要由两部分组成，一个是PCR系统，一个是荧光检测系统。选择定量PCR仪的关键——由于定量PCR必需借助样本和标准品之间的对比来实现定量的，对于定量PCR系统来说，重要的参数除了传统PCR的温控精确性、升降温速度等等，更重要的还在于样品孔之间的均一性，以避免微小的差别被指数级放大。至于荧
如何做好荧光定量PCR实验
荧光定量PCR实验指南 一、基本步骤： 1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对； 2、引物、探针的设计； 3、引物探针的合成； 4、反应体系的配制； 5、反应条件的设定； 6、反应体系和条件的优化； 7、荧光曲线和数据分析；
如何做好荧光定量PCR实验
荧光定量PCR实验指南一、基本步骤：1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对；2、引物、探针的设计；3、引物探针的合成；4、反应体系的配制；5、反应条件的设定；6、反应体系和条件的优化；7、荧光曲线和数据分析；8、标准品的制备；二、技术关键：1、 目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对；从
如何做好荧光定量PCR实验？（六）
其他问题：1）、文献上找到的引物和探针序列能否直接使用？通常国外的文献可信度比较高，可直接使用；但为了保险起见，最好用blast对引物探针的序列进行必要的验证；或者再进一步用primer软件对引物探针的二级结构和退火温度进行分析，这样更有利于您对整个实验的把握。2）、在实验之前要进行哪些准备工作？首
如何做好荧光定量PCR实验？（二）
2.4 实时多重PCR探针的选择：多重实时PCR的多种含意有两种：一为选择保守的探针和引物，利用不同的染料标记探针，在检测时可根据荧光的颜色来判定不同的产物。另一种为选择保守的引物，扩增不同长度的目的片段，反应中加入SYBRN染料，最后根据不同目的片段的Tm值来判定不同的物品。多重实时PCR的荧光探
如何做好荧光定量PCR实验？（五）
5、反应体系配制：ð A2010A0101试剂盒：（探针体系）FQ-PCR MasterMix-UNG混合物(2X) 25ul（终浓度为1×）；上游引物（终浓度为50~900nM），下游引物（终浓度为50~900nM）；探针（终浓度为200nM）；待检样品 5ul（终浓度为10~100ng）；无菌
如何做好荧光定量PCR实验？（四）
3.7 模板浓度起始模板的量对于获得高产量很重要。对大多数PCR扩增和荧光PCR扩增，104到106个起始目的分子就足以观测到好的荧光曲线（或在溴化乙锭染色胶上观察到）。所需的最佳模板量取决于基因组的大小（下表）。举例说，100ng到1μg的人类基因组DNA，相当于3×104到3×105个分子，足以
如何做好荧光定量PCR实验？（三）
3.3 引物、探针的纯度和稳定性定制引物的标准纯度对于大多数PCR应用是足够的。部分应用需要纯化，以除去在合成过程中的任何非全长序列。这些截断序列的产生是因为DNA合成化学的效率不是100％。这是个循环过程，在每个碱基加入时使用重复化学反应，使DNA从3'到5'合成。在任何一个循环都
如何做好荧光定量PCR实验？（一）
荧光定量PCR实验指南一、基本步骤：1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对；2、引物、探针的设计；3、引物探针的合成；4、反应体系的配制；5、反应条件的设定；6、反应体系和条件的优化；7、荧光曲线和数据分析；8、标准品的制备；二、技术关键： 1、 目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对；从h
荧光定量PCR实验步骤
1、总RNA抽提（枪头和离心管均经过湿热灭菌，无RNA酶） 1）取匀浆器，加入1ml的Trizol Reagent，置冰上预冷。 2）取100mg组织，加入到匀浆器中。 3）充分研磨直至无可见组织块。 4）12000rpm离心10min取上清。 5）加入250 μl三氯甲烷，颠倒离心管
荧光定量PCR仪选择要点
荧光定量PCR 因操作方便、运行速度快、实验结果准确，受到越来越多的分子生物学研究者青睐。在实验技术成熟的今天，也许对你来说，最难得不是实验技术上的问题——而是选择哪一种荧光定量PCR仪——你要征询实验室成员的意见、分析实验室目前乃至将来的需求、平衡实验室的预算，更要详细研究各种极富诱惑力的宣传
荧光定量PCR仪选择要点
光定量PCR 因操作方便、运行速度快、实验结果准确，受到越来越多的分子生物学研究者青睐。在实验技术成熟的今天，也许对你来说，最难得不是实验技术上的问题——而是选择哪一种荧光定量PCR仪——你要征询实验室成员的意见、分析实验室目前乃至将来的需求、平衡实验室的预算，更要详细研究各种极富诱惑力的宣传资
如何进行兽医检测荧光定量PCR实验？
实时荧光定量PCR技术（real-time fluorescent quantitative PCR，后文简称qPCR）作为目前核酸检测和定量中最主要的分子生物学工具之一，以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、自动化程度高、速度快等多个优点在疾病快速检测、食品安全检测、靶向用药基因检测等多种应
荧光定量PCR实验设计
设置对照组：荧光定量PCR检测一般流程如下图，选择检测靶标基因，进行引物筛选及体系构建，后续进行样本处理核酸提取，检测分析结果。对照组是实验的监控系统，监测实验是否有存在异常，也是排除实验异常关键所在；实验对照设置: 通常有阳性对照，阴性对照组等。 具体可根据实验类型进行对照组的设置；对
荧光定量PCR具体实验步骤
荧光定量PCR具体实验步骤，1 样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色
荧光定量PCR实验指南5
您可以选择荧光染料SYBGREEN体系，具体请参照说明书。您可灵活使用20-50ul间其他体积，注意保证终浓度相同。A2010A0106试剂盒:反应体系终浓度(自配热启动荧光系统)：1-2U的hotstartTaq酶、3-5.5mM的Mg2+ 、0.2mM的dNTPs、1×PCRbuffer（A
荧光定量PCR实验指南4
3.8 防止残余（Carry-over）污染PCR易受污染的影响，因为它是一种敏感的扩增技术。小量的外源DNA污染可以与目的模板一块被扩增。当前一次扩增产物用来进行新的扩增反应时，会发生共同来源的污染。这称之为残余污染。从其他样品中纯化的DNA或克隆的DNA也会是污染源（非残余污染）。可以在PCR过
荧光定量PCR实验基本步骤
1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对；2、引物、探针的设计；3、引物探针的合成； 4、反应体系的配制； 5、反应条件的设定； 6、反应体系和条件的优化； 7、荧光曲线和数据分析； 8、标准品的制备；
荧光定量PCR实验指南1
第一部分一、基本步骤：1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对；2、引物、探针的设计；3、引物探针的合成；4、反应体系的配制；5、反应条件的设定；6、反应体系和条件的优化；7、荧光曲线和数据分析；8、标准品的制备； 二、技术关键： 1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对；
荧光定量PCR实验指南2
2.3TaqmanMGB探针设计介绍MGB探针的优点：²MGB探针较短(14-20bp)，更容易找到所有排序序列的较短片段的保守区。²短片段探针(14-20bp)加上MGB 后，Tm值将提高10℃，更容易达到荧光探针Tm值的要求。²MGB探针的设计原则²探针的5’端避免出现G，即使探针水解为单个碱基
荧光定量PCR实验指南3
3.3 引物、探针的纯度和稳定性定制引物的标准纯度对于大多数PCR应用是足够的。部分应用需要纯化，以除去在合成过程中的任何非全长序列。这些截断序列的产生是因为DNA合成化学的效率不是100％。这是个循环过程，在每个碱基加入时使用重复化学反应，使DNA从3'到5'合成。在任何一个循环都
荧光定量PCR
荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结
实时荧光定量PCR仪【实时荧光定量PCR仪】
【FT-PCR】实时荧光定量PCR仪【实时荧光定量PCR仪】_风途厂家_Kgaoletšo ya dikarolo tše bopago seswantšho tša kgole ya PCR 具体来讲扑杀无害化处理染疫动物，禁止泔水饲喂生猪，加强生猪养殖运输屠宰等各个环节的清洗和消毒，包括养
荧光定量PCR技术的荧光定量PCR的方法
接下来我们就来了解一下荧光定量的主要方法，我们如何选择合适的方法？荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。而荧光定量 PCR 的方法相应的可分为特异类和非特异类两类，特异性检测方法是在PCR反应中利用标记荧光染料的基因特异寡核苷酸探针来检测产物；而非特异性检测方法是在在PCR反
如何看荧光定量PCR的结果
按公式计算：对照组-ΔΔCt ＝对照组（Ct 目的基因－Ct 内参基因）－对照组（Ct 目的基因－Ct 内参基因）