电泳分析常用方法醋酸纤维素薄膜电泳
醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。这种薄膜对蛋白质样品吸附性小,几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象,又因为膜的亲水性比较小,它所容纳的缓冲液也少,电泳时电流的大部分由样品传导,所以分离速度快,电泳时间短,样品用量少,5μg 的蛋白质可得到满意的分离效果。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。醋酸纤维素膜经过冰醋酸乙醇溶液或其它透明液处理后可使膜透明化有利于对电泳图谱的光吸收扫描测定和膜的长期保存。⒈材料与试剂 醋酸纤维素膜一般使用市售商品,常用的电泳缓冲液为pH8.6 的巴比妥缓冲液,浓度在0.05-0.09mol/L。⒉操作要点⑴膜的预处理:必须于电泳前将膜片浸泡于缓冲液,浸透后,取出膜片并用滤纸吸去多余的缓冲液,不可吸得过干。⑵加样:样品用量依样品浓度、本身性质、染色方法及检测方法等因素决定。对血清蛋白质的常规电泳分析,每 cm加样线不超过1μl,相当于60......阅读全文
电泳分析常用方法醋酸纤维素薄膜电泳
醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。这种薄膜对蛋白质样品吸附性小,几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象,又因为膜的亲水性比较小,它所容纳的缓冲液也少,电泳时电流的大部分由样品传导,所以分离速度快,电泳时间短,样品用量少,5μg 的蛋白质可得到
电泳分析常用方法醋酸纤维素薄膜电泳法操作方法
1.仪器装置 电泳室及直流电源同纸电泳。 2.试剂 (1) 巴比妥缓冲液(pH8.6) 取巴比妥 2.76g,巴比妥钠15.45g,加水溶解使成1000ml。 (2) 氨基黑染色液 取 0.5g的氨基黑10B,溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及水40ml的混合液中。 (3) 漂洗液
醋酸纤维素薄膜电泳
醋酸纤维素薄膜是由醋酸纤维素加工制成的。醋酸纤维素薄膜作为是电泳支持体 有以下优点:①电泳后区带界限清晰;②通电时间较短(二十分钟至一小时);③它 对各种蛋白质(包括血清白蛋白,溶菌酶及核糖核酸酶)都几乎完全不吸附,因此无 拖尾现象;④对染料也没有吸附,因此不结合的染料能完全洗掉,无样品处几乎完全
醋酸纤维素薄膜电泳
醋酸纤维素薄膜是由醋酸纤维素加工制成的。醋酸纤维素薄膜作为是电泳支持体 有以下优点:①电泳后区带界限清晰;②通电时间较短(二十分钟至一小时);③它 对各种蛋白质(包括血清白蛋白,溶菌酶及核糖核酸酶)都几乎完全不吸附,因此无 拖尾现象;④对染料也没有吸附,因此不结合的染料能完全洗掉,无样品处几乎完全
醋酸纤维素薄膜电泳
6、定量(1)浸泡 将膜片上的各蛋白质分离区带分段剪下,分别置于相应的标有编号的试管内,然后各加入0.4mol/L的氢氧化钠溶液进行浸泡。浸泡淡色带所加入的0.4mol/L氢氧化钠溶液的量为4ml,深色带为8ml(此时的稀释倍数是淡色带的2倍)。室温下的浸泡时间为 30min~60min
醋酸纤维素薄膜电泳法
仪器装置电泳室及直流电源同纸电泳。 2.试剂(1) 巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥2.76g,巴比妥钠15.45g,加水溶解使成1000ml。(2) 氨基黑染色液 取0.5g的氨基黑10B,溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及水40ml的混合液中。(3) 漂洗液 取乙醇45ml、冰醋酸5m
醋酸纤维素薄膜电泳介绍
醋酸纤维素薄膜是由醋酸纤维素加工制成的。醋酸纤维素薄膜作为是电泳支持体 有以下优点:①电泳后区带界限清晰;②通电时间较短(二十分钟至一小时);③它 对各种蛋白质(包括血清白蛋白,溶菌酶及核糖核酸酶)都几乎完全不吸附,因此无 拖尾现象;④对染料也没有吸附,因此不结合的染料能完全洗掉,无样品
醋酸纤维素薄膜电泳的特点
醋酸纤维素是指纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯,由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。这种薄膜对蛋白质吸附小,能消除电泳中出现的“拖尾”现象。具有分离速度快、样品用量小的特点,适合于病理情况下异常蛋白的检测。
醋酸纤维素薄膜电泳的特点
醋酸纤维素是指纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯,由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。这种薄膜对蛋白质吸附小,能消除电泳中出现的“拖尾”现象。具有分离速度快、样品用量小的特点,适合于病理情况下异常蛋白的检测。
常用的电泳分析方法介绍
常用的电泳分析方法主要有:醋酸纤维素薄膜电泳、凝胶电泳、等电聚焦电泳、双向电泳、毛细管电泳。
关于醋酸纤维素薄膜电泳的特点介绍
1.(1)醋酸纤维薄膜对蛋白质样品吸附极少,无“拖尾”现象,染色后背景能完全脱色,各种蛋白质染色带分离清晰,因而提高了测定的精确性。 (2)快速省时。由于醋酸纤维薄膜亲水性较滤纸小,薄膜中所容纳的缓冲液也较少,电渗作用小,电泳时大部分电流是由样品传导的,所以分离速度快,电泳时间短,一般电泳45
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
实验概要血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳技术实验原理 带电粒子在电场中移动的现象称为电泳。电泳技术被广泛用于蛋白质、核酸和氨基酸等物质的分离和鉴定,电泳过程中带电粒子的移动速度与粒子荷电量、电场强度、粒子重量与半径及介质的粘度等有关。其中粒子荷电量又受周围介质的pH和离子强度的影响;电场强度
关于醋酸纤维素薄膜电泳法的介绍
(1) 醋酸纤维素薄膜 取醋酸纤维素薄膜,裁成2cm×8cm的膜条,将无光泽面向下,浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中,待完全浸透,取出夹于滤纸中,轻轻吸去多余的缓冲液后,将膜条无光泽面向上,置电泳槽架上,经滤纸桥浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中。 (2) 点样与电泳 于膜条上距负极端2cm处,
电泳分析常用方法
(一)醋酸纤维素薄膜电泳 醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄 膜。这种薄膜对蛋白质样品吸附性小,几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象,又因为膜的亲水性比较小,它所容纳的缓冲液也少,电泳时电流的大部分由样 品传导,所以分离速度快,电泳时间短,样品
电泳仪基本知识
基本知识电泳仪:专为进行电泳提供外加电场的直流电源,其输出电压或电流或功率要求相对稳定或按特定规律变化。 电泳仪分类根据电泳仪原理、电泳仪功能、电泳仪的使用方法、电泳仪的用途不同可以为:琼脂糖凝胶电泳、毛细管电泳、凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、醋酸纤维薄膜电泳、高效毛细管电泳、琼脂糖电泳、SDS-P
电泳分析常用方法介绍
(一)醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。这种薄膜对蛋白质样品吸附性小,几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象,又因为膜的亲水性比较小,它所容纳的缓冲液也少,电泳时电流的大部分由样品传导,所以分离速度快,电泳时间短,样品用量少
关于醋酸纤维素薄膜电泳的注意事项介绍
1、醋酸纤维素薄膜电泳— 电量的选择 电泳过程应选择合适的电流强度,一般电流强度为0.4mA/cm—0.5mA/cm宽膜为宜。电流强度高,尤其在温度较高的环境中,可引起蛋白质变性或由于热效应引起缓冲液中水分蒸发,使缓冲液浓度增加,造成膜片干涸。电流过低,则样品泳动速度慢且易扩散。 2、醋酸纤
关于醋酸纤维素薄膜电泳的补充分析介绍
根据样品理化性质,从提高电泳速度和分辨力出发选择缓冲液的种类,pH和离子强度。选择好的缓冲液最好是挥发性强,对显色或紫外光等观察区带没有影响,若样品含盐量较高时,宜采用含盐缓冲液。例如血清蛋白电泳可选用pH8.6的巴比妥缓冲液或硼酸缓冲液;氨基酸的分离则可选用pH7.2的磷酸盐缓冲液等。电泳时先
关于醋酸纤维素薄膜电泳—缓冲液的选择
醋酸纤维薄膜电泳常选用pH8.6巴比妥溶液,其浓度为0.05mol/L—0.09mol/L。选择何种浓度与样品及薄膜的薄厚有关。选择时,先初步定下某一浓度,如电泳槽两极之间的膜长度为8 cm—10cm,则需电压25V/cm膜长,电流强度为0.4mA/cm—0.5mA/cm膜宽。当电泳达不到或超过
关于醋酸纤维素薄膜电泳—醋酸纤维薄膜的预处理的介绍
市售醋酸纤维薄膜均为干膜片,薄膜的浸润与选膜是电泳成败的重要关键之一。将干膜片漂浮于电极缓冲液表面,其目的是选择膜片厚薄及均匀度,如漂浮15s—30s时,膜片吸水不均匀,则有白斑点或条纹,这提示膜片厚薄不匀,应舍去不用,以免造成电泳后区带扭曲,界线不清,背景脱色困难,结果难以重复。由于醋酸纤维薄
醋酸纤维素薄膜电泳法的操作法的介绍
(1) 醋酸纤维素薄膜 取醋酸纤维素薄膜,裁成2cm×8cm的膜条,将无光泽面向下,浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中,待完全浸透,取出夹于滤纸中,轻轻吸去多余的缓冲液后,将膜条无光泽面向上,置电泳槽架上,经滤纸桥浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中。 (2) 点样与电泳 于膜条上距负极端2cm处,
关于醋酸纤维素薄膜电泳—加样量的基本介绍
醋酸纤维素薄膜电泳—加样量:加样品的多少与电泳条件、样品的性质、染色方法与检测手段灵敏度密切相关。作为一般原则,检测方法越灵敏,加样量则越少,对分离更有利。如加样量过大,则电泳后区带分离不清楚,甚至互相干扰,染色也较费时。如电泳后用洗脱法定量时,每厘米加样线上需加样品0.1μl—0.5μl约相当
关于醋酸纤维素薄膜电泳的基本原理介绍
醋酸纤维薄膜电泳(cellulose acetate membrane electrophoresis)以醋酸纤维薄膜为支持物。它是纤维素的醋酸酯,由纤维素的羟基经乙酰化而制成。 一、醋酸纤维素薄膜电泳的原理: 它溶于丙酮等有机溶液中,即可涂布成均一细密的微孔薄膜,厚度以0.1mm—0.15
醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白原理和实验方法
一、原理醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法。带电颗粒在电场力作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。由于各种蛋白质都有特定的等电点,如将蛋白质置于pH值低于其等电点的溶液中,则蛋白质将带正电荷而向负极移动。反之,则向正极移动。因为蛋白质分子在电场中移动的速度与其带电量、
乙酸纤维素薄膜电泳
中文名称乙酸纤维素薄膜电泳英文名称cellulose acetate film electrophoresis定 义用乙酸纤维素薄膜作支持介质的一种区带电泳。常用于蛋白质电泳分析。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
电泳分析常用方法凝胶电泳
以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法 称为凝胶电泳。其中聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大,对一般蛋白质不起分子筛作用,但适用于分离同工酶及其亚型,
乙酸纤维素薄膜电泳的定义和应用
中文名称乙酸纤维素薄膜电泳英文名称cellulose acetate film electrophoresis定 义用乙酸纤维素薄膜作支持介质的一种区带电泳。常用于蛋白质电泳分析。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
醋酸纤维素薄膜电泳法的操作过程和所需仪器
1.仪器装置电泳室及直流电源同纸电泳。2.试剂(1) 巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥 2.76g,巴比妥钠15.45g,加水溶解使成1000ml。(2) 氨基黑染色液取 0.5g的氨基黑10B,溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及水40ml的混合液中。(3) 漂洗液取乙醇 45ml、冰醋酸5ml及
关于电泳法—醋酸纤维素薄膜电泳法的操作法介绍
(1)醋酸纤维素薄膜电泳法— 醋酸纤维素薄膜 取醋酸纤维素薄膜,裁成2cm×8cm的膜条,将无光泽面向下,浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中,待完全浸透,取出夹于滤纸中,轻轻吸去多余的缓冲液后,将膜条无光泽面向上,置电泳槽架上,经滤纸桥浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中。 (2) 醋酸纤维素薄膜
醋酸纤维素薄膜电泳法分离鉴定三种腺苷酸
一、目的掌握醋酸纤维素薄膜电泳法分离带电颗粒原理;观察核苷酸类物质的紫外吸收现象。二、原理带电粒子在电场中向着与其自身带相反电荷的电极移动的现象,称为电泳。控制电泳条件(如pH 等),使混合试样中的不同组分带有不同的净电荷,各组分在电场中移动的速度或方向各不相同,从而达到分离各组分的目的,这就是