电泳分析常用方法凝胶电泳
以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法 称为凝胶电泳。其中聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大,对一般蛋白质不起分子筛作用,但适用于分离同工酶及其亚型,大分子核酸等应用较广,介绍如下:⒈琼脂糖凝胶电泳的原理概述 琼脂糖是由琼脂分离制备的链状多糖。其结构单元是 D-半乳糖和3.6-脱水-L-半乳糖。许多琼脂糖链依氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束,构成大网孔型凝胶。因此该凝胶适合于免疫复合物、核酸与核蛋白的分离、鉴定及纯化。在临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的检测。⒉琼脂糖凝胶电泳分离核酸的基本技术 在一定浓度的琼脂糖凝胶介质中,DNA 分子的电泳迁移率与其分子量的常用对数成反比;分子构型也对迁移率有影响,如共价闭环 DNA>直线DNA>开环双链DNA。......阅读全文
电泳分析常用方法凝胶电泳
以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法 称为凝胶电泳。其中聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大,对一般蛋白质不起分子筛作用,但适用于分离同工酶及其亚型,
电泳分析常用方法
(一)醋酸纤维素薄膜电泳 醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄 膜。这种薄膜对蛋白质样品吸附性小,几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象,又因为膜的亲水性比较小,它所容纳的缓冲液也少,电泳时电流的大部分由样 品传导,所以分离速度快,电泳时间短,样品
电泳分析常用方法琼脂糖凝胶电泳法操作方法
1.仪器装置 电泳室及直流电源同纸电泳。 2.试剂 (1) 醋酸-锂盐缓冲液(pH3.0) 取冰醋酸 50ml,加水800ml混合后,用氢氧化锂调节pH**3.0,再加水** 1000ml。 (2) 甲苯胺蓝溶液 取甲苯胺蓝 0.1g,加水100ml使溶解。 3.操作法 (1)
电泳分析常用方法介绍
(一)醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。这种薄膜对蛋白质样品吸附性小,几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象,又因为膜的亲水性比较小,它所容纳的缓冲液也少,电泳时电流的大部分由样品传导,所以分离速度快,电泳时间短,样品用量少
常用的电泳分析方法介绍
常用的电泳分析方法主要有:醋酸纤维素薄膜电泳、凝胶电泳、等电聚焦电泳、双向电泳、毛细管电泳。
电泳分析常用方法SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法操作方法
SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白分子量,是根据大多数蛋白都能与阳离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复合物,使蛋白分子所带的负电荷远远超过天然蛋白分子的负电荷,消除了不同蛋白分子的电荷效应,使蛋白分子相对迁移率(R'')的大小完全取决于分子量的高低,因此可从已知
电泳分析常用方法其他电泳技术
⒈IEF/SDS-PAGE双向电泳法 1975年O′Farrall等人根据不同组份之间的等电点差异和分子量差异建立了 IEF/SD S-PAGE双向电泳。其中IEF电泳(管柱状)为**向,SDS-PAGE 为第二向(平板)。在进行**向IEF电泳时,电泳体系中应加入高浓度尿素、适量非离子型去污剂NP
电泳分析仪双向凝胶电泳方法介绍
双向凝胶电泳 双向凝胶电泳又称二维凝胶电泳,主要用于分离和分析混合的蛋白质组分,是优于其它方法能够连续地在一块胶上分离数千种蛋白质的方法。 该方法第一向采用等电聚焦,根据复杂的蛋白质成分中各个蛋白质等电点不同,将蛋白质进行分离。第二向采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,按蛋白质分子量的
UVP的凝胶电泳分析软件使用方法
在各个论坛上看以过许多凝胶电泳分析的软件,但没有UVP使用的Labwork的介绍。如果你购买了UVP的凝胶电泳拍摄及分析系统,上面就会带一个labwork分析软件。打开这个软件你就可以发现其界面非常熟悉,原来这就是Media Cybernetics公司利用Imageproplus程序的内核专门应用于
电泳分析常用方法纸电泳法操作方法
1.仪器装置 包括电泳室及直流电源两部分。 常用的水平式电泳室装置如图,包括两个电泳槽 A和一个可以密封的玻璃(或相应材料)盖B;两侧的电泳槽均用有机玻璃(或相应材料)板 C分成两部分;外格装有铂电极(直径0.5~0.8cm)D;里格为可放滤纸 E的有机玻璃电泳槽架F,此架可从槽中取出;两侧电泳
电泳分析常用方法等电聚焦电泳技术
等电聚焦(isoelectric focusing,IEF)是60年代中期问世的一种利用有pH 梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。由于其分辨率可达0.01pH单位,因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。⒈IEF的基本原理 在IEF的电泳中,具有pH梯度的介质其分布是从阳极到
DNA琼脂糖凝胶电泳分析
可能是DNA提纯浓度不够,所以会出现拖尾,也有可能是配胶浓度不对,比如1.5%的gel你配成1%,也有可能是电泳时间或者电压、电流调的不对,条带还没有跑到指定位置。建议看相关文献,看别人跑相同的DNA或RNA的条件是什么,然后再根据自己的实验进行优化。
植物DNA的提取及凝胶电泳分析
实验概要利用基因组DNA较长的特性,可以将其余细胞器或质粒等小分子DNA分离。当加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团漂浮其中,可用玻璃棒将其取出,而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部,从而达到分离提取的目的。分离基因组DNA应尽量在温和的条件下操作。琼脂糖或聚
电泳分析常用方法醋酸纤维素薄膜电泳
醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。这种薄膜对蛋白质样品吸附性小,几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象,又因为膜的亲水性比较小,它所容纳的缓冲液也少,电泳时电流的大部分由样品传导,所以分离速度快,电泳时间短,样品用量少,5μg 的蛋白质可得到
单细胞凝胶电泳分析(single-cell-gel-eletrophoresis,SCGE)
单细胞凝胶电泳分析(single cell gel eletrophoresis,SCGE)是由Ostling等(1984)首创,后经Singh等(1988)进一步完善并逐渐发展起来的一种快速检测单细胞 DNA损伤的实验方法,适用于多种细胞,能够灵敏地检测DNA断裂,在检测诱变剂、射线等
电泳分析法琼脂糖凝胶电泳原理
琼脂糖凝胶电泳是一种用于生物化学,分子生物学,遗传学和临床化学的凝胶电泳方法,用于分离琼脂糖基质中的大分子(例如DNA,RNA或蛋白质)的混合群体。 琼脂糖是从海藻中提取的天然线性聚合物,当在缓冲液中加热并冷却后,可通过氢键形成凝胶基质。 它们是用于分离中型和大型核酸的最受欢迎的介质,并且具
电泳分析常用方法醋酸纤维素薄膜电泳法操作方法
1.仪器装置 电泳室及直流电源同纸电泳。 2.试剂 (1) 巴比妥缓冲液(pH8.6) 取巴比妥 2.76g,巴比妥钠15.45g,加水溶解使成1000ml。 (2) 氨基黑染色液 取 0.5g的氨基黑10B,溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及水40ml的混合液中。 (3) 漂洗液
彗星分析法[单细胞凝胶电泳分析法]
治愈癌症(cancer)是一个难题,长期以来研究人员们一直在苦苦探索。我们目前知道,致癌的过程与许多因素有关,但如果我们能阻止其中的任何一个步骤,癌细胞便无法形成。因此,探测致癌物质的技术与癌细胞的及时发现就显得尤其重要!然而截至目前为止,研究人员们仍无法研究出一种简易基因测试法或综合的方法来检测出
彗星分析法(单细胞凝胶电泳分析法)
如果我们能阻止其中的任何一个步骤,癌细胞便无法形成。因此,探测致癌物质的技术与癌细胞的及时发现就显得尤其重要!然而截至目前为止,科学家们仍无法研究出一种简易基因测试法或综合的方法来检测出可能的致癌物。因此,致癌物对DNA的作用仍是癌症研究的一个重要课题。遗传毒物学为一专门研究化学及各类物质对人体遗传
电泳分析法琼脂糖凝胶电泳的应用
琼脂糖凝胶电泳是分离蛋白质,DNA或RNA的常规方法。 DNA分子大小的估计 分析PCR产物,例如在分子遗传学诊断或遗传指纹分析中 在进行Southern分析之前,先对限制性基因组DNA进行分离,在进行Northern分析之前,先对RNA进行分离。 琼脂糖凝胶电泳广泛用于评估限制酶消化后
实验室分析仪器电泳仪电泳分析常用方法
(一)醋酸纤维素薄膜电泳 醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。这种薄膜对蛋白质样品吸附性小,几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象,又因为膜的亲水性比较小,它所容纳的缓冲液也少,电泳时电流的大部分由样品传导,所以分离速度快,电泳时间短,样
电泳分析法琼脂糖凝胶电泳的要求/仪器
进行琼脂糖凝胶电泳所需的设备和用品相对简单,包括:电泳仪和电源 凝胶浇铸托盘,有各种尺寸,由紫外线透明塑料制成。在浇铸凝胶时,用胶带封闭托盘的开口端,然后在电泳之前将其除去。 样品梳子,将熔融的介质倒在梳子周围,以在凝胶中形成样品孔。 电泳缓冲液,通常是Tris-acetate-EDTA(
电泳分析法琼脂糖凝胶电泳的优缺点
琼脂糖凝胶电泳的优点 对于大多数应用,仅需要单组分琼脂糖,不需要聚合催化剂。因此,琼脂糖凝胶制备简单,快速。 凝胶易于倒入,不会使样品变性。 样品也可以回收。 琼脂糖凝胶电泳的缺点 凝胶在电泳过程中会融化。 缓冲区可能耗尽。 不同形式的遗传物质可能以不可预测的形式运行。
用琼脂糖凝胶电泳分析核酸有哪些影响因素
核酸电泳中所用到的eb能用sybrgreen,goldview替代。GoldViewⅠ是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型DNA染料,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同。在紫外灯下双链DNA呈现绿色荧光,而单链DNA呈红色荧光。通过小鼠皮下注射实验,尚未发现GoldViewⅠ有致癌作用;而溴化乙
电泳分析法琼脂糖凝胶电泳涉及的步骤
为了制备凝胶,将琼脂糖粉与电泳缓冲液混合至所需浓度,并在微波炉中加热使其熔化。 琼脂糖凝胶浓度 所用琼脂糖的百分比取决于要分离的片段的大小。 琼脂糖的浓度是指琼脂糖相对于缓冲液体积的百分比(w / v),琼脂糖凝胶通常在0.2%至3%的范围内。 琼脂糖浓度越低,DNA片段迁移越快。 通
电泳分析法聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)
通过琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是用于分离,鉴定和纯化生物聚合物的标准方法,因为这两种凝胶本质上都是多孔的。 聚丙烯酰胺凝胶是通过丙烯酰胺与交联剂(通常为N,N'-亚甲基双丙烯酰胺)的聚合反应而形成的化学交联凝胶。 该反应是自由基聚合,通常以过硫酸铵为引发剂和N,N,N′,N′-四甲基
表达蛋白的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析
一、原理 细菌体中含有大量蛋白质,具有不同的电荷和分子量。强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用,通过加热使蛋白质解离,大量的SDS结合蛋白质,使其带相同密度的负电荷,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)上,不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。采用考马斯亮兰快速染色,可及时观察电泳分离效果。因而根据预
表达蛋白的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析
一、原理细菌体中含有大量蛋白质,具有不同的电荷和分子量。强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用,通过加热使蛋白质解离,大量的SDS结合蛋白质,使其带相同密度的负电荷,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)上,不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。采用考马斯亮兰快速染色,可及时观察电泳分离效果。因而根据预计表达蛋
人类基因组DNA提取及琼脂糖凝胶电泳分析
实验目的: 1. 熟悉分子生物学实验的操作特点。 2.掌握人类基因组DNA提取的基本原理。 3.熟悉人类基因组DNA提取的基本方法。 4.熟悉琼脂糖凝胶电泳的原理和操作。 实验原理: 用细胞裂解液裂解细胞膜,收集细胞核,加入SDS破裂核膜,用蛋白酶K使核蛋白降解成小片段并从DNA上解离下来,经苯酚
人类基因组DNA提取及琼脂糖凝胶电泳分析
实验目的: 1.熟悉分子生物学实验的操作特点。 2.掌握人类基因组DNA提取的基本原理。 3.熟悉人类基因组DNA提取的基本方法。 4.熟悉琼脂糖凝胶电泳的原理和操作。实验原理: 用细胞裂解液裂解细胞膜,收集细胞核,加入SDS破裂核膜,用蛋白酶K使核蛋白降解成小片段并从DNA上解离下来,经