免疫组化和蛋白质印迹中抗原2抗体反应方法的改进
免疫组化和蛋白质印迹(Western blotting) 是生物医学科研和教学中鉴定目的蛋白表达的最常用手段。二者的原理基本一致,即通过抗原与抗体的特异性免疫反应来检测目的蛋白质。由于抗体的价格昂贵,因此免疫反应的效率是决定实验成本的至关因素。传统的方法是将抗体滴加到贴于载玻片的标本上(免疫组化) [1 ]或将蛋白印迹膜置于含有抗体的塑料袋中进行免疫反应[2 ] 。这些方法往往消耗大量的抗体,且操作复杂。本实验室经过反复试验,建立了一种能大大降低成本的“倒覆”反应法,现报告如下。点击这里进入下载页面：进入下载页面......阅读全文
蛋白质分析技术(WesternBlot－ELISA免疫荧光与免疫组化技术)3
（一）细胞膜蛋白分子的检测原理：细胞膜表面的抗原或受体可特异地与相应的抗体或配体结合，将针对细胞表面抗原的抗体或配体用不同的荧光素标记，根据不同荧光物质的最大激发和发射波长的不同，即可准确定量每种荧光物质的强度，从而推出相应细胞表面抗原表达量1 直接法：细胞＋荧光素标记的抗CD分子的抗体→4ºC反应
蛋白质分析技术(WesternBlot－ELISA免疫荧光与免疫组化技术)2
2 类型（1）间接法测抗体间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体，检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。 常用于临床血清中自身抗体的检测，以及杂交瘤上清特异性抗体的筛选。如血清中PDCD5自身抗体的检测。(2) 双抗体夹心法测抗原是检测抗原最常用的方法。只要获得针对受检抗原的特
蛋白质分析技术(Western－Blot、ELISA、免疫荧光与免疫组化技术)
1 原理：将通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或PVDF膜上，然后与能特异性识别待检蛋白的抗体进行反应，洗涤去除没有结合的特异性抗体后，加入标记的、能识别特异性抗体的种属特异性抗体，反应一段时间后再次洗涤去除非特异性结合的标记抗体，加入适合标记物的检测试剂进行显色或发光等，观察有无特
蛋白质分析技术(WesternBlot－ELISA免疫荧光与免疫组化技术)4
四免疫组织化学技术原理：是指酶标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的成色反应，对相应的抗原进行定性、定位和定量测定的一项技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙的结合起来，借助显微镜（包括荧光显微镜、电子显微镜等）的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质（如蛋
蛋白质分析技术(ELISA、Western－Blot、免疫荧光与免疫组化技术)
一 Western Blot1 原理：将通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或PVDF膜上，然后与能特异性识别待检蛋白的抗体进行反应，洗涤去除没有结合的特异性抗体后，加入标记的、能识别特异性抗体的种属特异性抗体，反应一段时间后再次洗涤去除非特异性结合的标记抗体，加入适合标记物的检测试剂
免疫组化
一，免疫组织化学简介免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚
免疫组化
一，免疫组织化学简介免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚
免疫组化
免疫组织化学又称免疫细胞化学，可以用于：（1）显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应；（2）是对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。实验方法原理带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的
蛋白质分析技术(ELISA、Western－Blot、免疫荧光与免疫组化技...2
（2）间接法：细胞→3％多聚甲醛固定和渗透化→封闭→针对蛋白的特异抗体→洗涤→荧光素标记的二抗→洗涤 → 荧光显微镜观察或流式细胞计分析凋亡相关蛋白TFAR19蛋白的表达和细胞定位分析TFAR19（PDCD5）是由本研究室在国际上首先报导的一个拥有自己知识产权的人类新基因，前期的功能研究表明，它是促
免疫组化准备
最重要的是选择好一抗、二抗或者还有三抗，注意抗体的特异性、效价和交叉反应，最好用单抗。其他常用试剂有：1、0.01M(pH7.4)的磷酸盐缓冲生理盐水（PBS），稀释抗体和洗片子用；2、清洁液、纯水，洗玻片用3、多聚赖氨酸处理载玻片，防止脱片4、固定液：4%多聚甲醛或冷丙酮等；5、15%~30%蔗糖
免疫组化操作
（一）、仪器设备1. 18cm不锈钢高压锅或电炉或用微波炉.2. 水浴锅（二）、试 剂1. PBS缓冲液（pH7.2―7.4）2．0.01mol/L柠檬酸钠缓冲液（CB,pH6.0,1000ml）3. 3%甲醇―H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制4. 风裱剂：a. 甘油和0.5mm
免疫组化流程
实验步骤 第一天：1、组织切片置于60℃烘烤1hr2、二甲苯1、2 分别浸泡15min，脱蜡3、水化：100% Etoh 10min X 295% Etoh 5min X 185% Etoh 5min X 170% Etoh 5min X 1注：以下步骤切勿让组织处于干燥状态！4、将切片置于修复盒，
免疫组化步骤
1。4%多聚甲醛常规灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中过夜。蜡块制作。切片，贴片。0.01MKPBS清洗5min×3后； 2。加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液（甲醇80ml＋0.01MKPBS 100ml＋30%过氧化氢）30min，以消除内源性过氧化物酶的影响，0.01MPBS清洗5m
免疫组化实验
实验方法原理 免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水
免疫组化步骤设计
你的一抗的生产商应该提供有实验方法，按照他们优化过的步骤来做最为明智。也可以网上搜索到标准的免疫组化步骤，但是所用抗体及封闭等试剂的浓度，孵育时间长度等还是要靠自己摸索，麻烦多多。如果样品是胰脏一般很容易得到阳性结果。
免疫组化的意义
意义：标记物--作用--阳性部位--临床意义。免疫组化，是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunoh
免疫组化主要步骤
免疫组化主要步骤1. 洗载玻片:将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4混合液中,目的是为了是载玻片上的硅胶等除去,同时使一些肉眼看不见的凹凸不平的表面变平整,便于组织吸附,然后置于清水中清洗,除去残余的重铬酸钾和浓H2SO4(大约冲一个小时左右),再将载玻片浸泡于酒精之中, 然后放到架子上
免疫组化技术要点
1. 固定最好用4%的多聚甲醛固定液。对于冰冻切片，甲醛固定有时比冰冻丙酮好；但对于不同的组织和抗原，可选用不同的固定液。 有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液，请于购置前注意说明书。（1）BouinS固定液：饱和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其对组织的穿透力较强，固定较
常用免疫组化方法
目前几种常用免疫组化方法简单介绍1）免疫荧光方法是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可
免疫组化实验原理
首先来谈一下免疫组织化学（IHC, Immunohistochemistry）、免疫细胞化学（ICC, Immunocytochemistry）和免疫荧光(IF, immunofluorescence technic )的共通之处和区别。 平常说的 免疫组化 就是用石蜡切片做的免疫组织
免疫组化染色步骤
石蜡切片免疫组化染色步骤1、载玻片的处理： 抗原修复过程中，由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响，极易造成脱片。为保证试验的正常进行，可选用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine 等几种试剂，对已清洗的载玻
免疫组化的分类
免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。 这些常用免疫组织化学方法的原理如下： 1. 免疫荧光细胞化学技术 将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的
免疫组化的原理
抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示
免疫组化的试剂准备
最重要的是选择好一抗、二抗或者还有三抗，注意抗体的特异性、效价和交叉反应，最好用单抗。其他常用试剂有：1、0.01M(pH7.4)的磷酸盐缓冲生理盐水（PBS），稀释抗体和洗片子用；2、清洁液、纯水，洗玻片用3、多聚赖氨酸处理载玻片，防止脱片4、固定液：4%多聚甲醛或冷丙酮等；5、15%~30%蔗糖
免疫组化的操作流程
实验概要本文介绍了免疫组织化学实验操作流程，主要有：脱蜡和水化，抗原修复及免疫组织化学染色等步骤。实验原理免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位
石蜡切片免疫组化实验
即用型(Envision)快速酶免疫组化二步法免疫组化可应用于：（1）确定组织细胞内抗原 (多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究；（2）诊断异常细胞，指导治疗。实验方法原理根据聚合酶技术把辣根过氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子结合在多聚酶上形成多聚物分子,其与待检的抗原特异性的结合后，加入
免疫组化操作规程
（一）、仪器设备 1）18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉； 2）水浴锅 （二）、试剂 1）PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L。
免疫组化操作规程
免疫组化操作规程（一）、仪器设备 1）18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉； 2）水浴锅（二）、试剂 1）PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L。
免疫组化技术规范
欧美国家相继开展了免疫组化质量控制工作，建立了一套比较完善的质量控制方法和程序。中国病理工作者委员会（CCP）免疫组化研究中心借鉴国外的先进经验并结合我国当前的实际情况开始探索一种适合我国免疫组化质控的方法，同时，发现和推广标准化的染色程序，改善和提高免疫组化实验的可靠性，使免疫组化技术更具标
免疫组化病理诊断（一）
在临床病理诊断中，免疫组织化学(IHC)是一种很重要的技术和手段，从20世纪70年代开始，免疫组化技术就应用于病理诊断，对于诊断肿瘤、肿瘤分类、判断预后产生了巨大的影响，同时也扩展了人们对于各种疾病及肿瘤形成过程的认识，提高了病理诊断与研究水平。但是，随着免疫组化的广泛应用，发现免疫组化技术存在一些