实验室分析仪器色谱柱的常见问题一
键合硅胶固定相的稳定性硅烷键合相的流失是由于硅烷键合于硅胶基质上的Si—O—Si键的水解,在高温、长值及水比例高的流动相中,离解加剧。因此稳定性与键合相的类型、流动相pH、所用缓种与有机改性剂的种类等有关,键合硅胶正相、反相、离子对和离子交换色谱柱的稳定差异。在相同条件下应用时,长链的烷基(如C18与C8)键合相固定相一般比短链的键合更稳定;交联型键合硅烷固定相可改善低pH值时键合相的稳定性,改善空间保护官能因色能够有效改善硅烷固定相在低pH值时的稳定性。两个异丙基、异丁基等体积较大的基团接于硅烷Si原子上,可以对Si—O—Si键有一定保护作用,这种固定相比常规的二甲基购硅烷键合相的含碳量少(表面覆盖率低),保留值小。在PH≥7时稳定使用HPLC柱应遵循以下原则:①使用致密键合的长链烷基(如C18、C8等)并经封尾的固定相②使用以硅溶胶工艺制得的硅胶基质( Hypersil、 KromasilSpherisorb、 Zorbax......阅读全文
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二十五
“水相” 指的是什么?纯水?CN 基柱保存在 40% 的乙腈里面,这个有不良后果吗?答:水相就是纯水。CN 基不适合保存在中等极性的溶剂中,除了可以低温保存在极性较大的纯水中外,还有可以保存在非极性溶剂如正己烷中。40% 乙腈水,属于中等极性溶剂,短期过夜保存可能问题不大,长期保存不太好,后果就是可
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题六十七
四烷基季铵盐(如四丁基硫酸氢铵、四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵等)在水中电离后,也形成了类似 N+H(CH2CH3)3 的结构 N+(CH2CH2CH2CH3)4,这种结构也能有效的与 Si-O-产生较强的静电作用,此类离子对用的比较少,但它的作用仅是掩藏 Si-O-吗,它对物质的保留性能有何影响,实
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二十一
请问怎么测柱效?柱子填料是 SinoChrom ODS-BP 5um ,规格 4.6mm*200mm答:测定柱效不同公司不一样,有用甲苯,也有用萘的。一般柱子里面有检测报告,你按照报告里的方法做一遍就可以。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二十八
一台 waters1525 色谱仪,最近基线总是呈现波浪形很有规律,波长越小越明显,梯度洗脱时向上飘逸而且后一段时间呈现波浪形,很影响分析,我想问一下,是不是柱子的原因？答:应该是流动相组成变引起吸收本底变化造成的,特别是在波长小的时候,乙腈的截止波长低于 200nm,但甲醇和水相对比较高,在低波长
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题四十三
采用国标用 C18 柱测定辣椒精辣度,将辣椒精中添加吐温系列乳化剂做成水溶辣椒精,请问乳化剂对 C18 柱是否有影响?答:乳化剂和离子对试剂类似,有极性端和非极性端,肯定会对 C18 柱有影响。不过如果辣椒精是极性物质,乳化剂的存在到可以提高其在 C18 柱上的保留能力。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题四十五
“样品与离子对生成紧密的结合物,离子对试剂掩藏化合物中的极性基团” 这句话是什么意思?离子对怎么样掩蔽化合物中极性基团?不就是通过静电引力的作用形成离子缔合物,来降低其极性的吗?答:离子对色谱是解决强极性物质在反相色谱中保留能力不足的一个有效的途径。有些碱性极性物质,即使用 100% 水相做流动相,
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题八十二
色谱柱的技术都有哪些?比如封尾等,这些技术在应用时都体现在哪里?答:色谱柱技术包括填料技术和装柱技术,填料技术自不待言,填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。装柱技术也没有想象中的这么简单,不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度,装柱工艺都有所不同,要装出紧密、稳定、均一的柱床,更多是一
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题四十九
因为不知道流动相已走完,液相色谱柱空走了大概一晚上,请问这种情况下柱子还能用吗?如果可以应该如何再生?答:能用的!可能柱子里会有气泡进去,但之后多用流动相冲冲,看到基线稳定,就没问题了。用色谱柱的保存液低流速长时间冲洗,然后再检测一下柱效,看柱子是否恢复,液相最好设置一下最低压限,这样就不怕流动相走
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题八十七
什么样的色谱柱可以反冲,什么不可以。反冲后是正者用,还是反着用。具体到各型号柱子不仅是 ODS 柱？答:一般的正相反相柱应该都能反冲,只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲,不过目前这样的柱子已经比较少见了。反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉,反冲后还是正着用比较好,以免柱子的两头都被污染。我们一直提倡的
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题八十三
氨基柱在进酸性样品时,很伤柱子,如使用一段时间后,柱效降低,峰形改变,如何恢复?答:氨基柱测酸性样品,应该是用氨基柱的 HILIC 模式。酸的存在可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化,导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议:用 5-10 倍的柱体积的含 0.5-1
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题四十四
使用的氨基柱时,有时候峰型突然变宽,有拖尾,用一段时间就又好了,不明白是什么原因造成的,如果要再生氨基柱的时候应该怎么做呢?是像您先前回答的问题中提到的,用一定比例的氨水冲洗吗?氨基柱可以直接用纯水冲洗吗?记得当时买的氨基柱那个使用说明书上说不能用纯水冲?是这样的吗?如果可以冲的话,一般冲多久?答:
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题四十二
按照国标测定辣椒红色素中苏丹红含量,标品分离很好,峰也不错,但是辣椒红色素由于跟苏丹红性质很相似,且颜色较深,分离效果很差,收得率很低,测定结果偏差很大。该如何处理样品?色素是否会降低柱效?答:色素不会降低柱效,但辣椒红色素主峰浓度过大,会影响与临近杂质峰的分离。可考虑稀释样品,或试试用柱效更高的柱
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题八十六
用乙腈和水作为流动相, 在调整梯度的时候发现, 刚开始用 60% 乙腈, RT 为 2.5 分钟,调到 40% 乙腈,RT 没有变化,30% 也没有变化, 一直调到 20% 的时候,RT 突然变到了约 13 分钟,请问这是什么原因?我用的是离子交柱。答:离子交换柱的保留时间主要由洗脱液的离子强度和
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题四十八
在梯度洗脱的时候,如果整个时间程序越长,保留时间的重现性越差,尤其是后出的峰重现性差更明显,我猜估计是流量本身的误差引起的,但是怎么尽量避免这种情况的出现,使保留时间重现性更好?答:这个要控制好环境温度和柱温,易挥发的流动相要适当密封,同时保留时间的漂移与仪器的精度也有关系。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二十四
CN 基柱应该怎样维护才好呢?比如做完实验用什么流动相冲柱子、短期用什么溶剂保存、长期用什么溶剂保存等等。答:CN 可作正相柱,也可作反相柱用,除了保存溶剂有特殊要求外,其它维护办法和一般正相和反相柱没有多大区别。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题四十一
通常我们在分析天然药物成分的时候结构复杂,无法考察组分的 PKa 值,哪我们如何去选择最合适的流动相或者是拖尾该怎么改善呢?答:如果天然产物中没有易电离的极性基团,就不需要用缓冲盐调节 pH。如果天然产物中既有酸性基团,也有碱性基团,譬如有 pKa=6.2 的羧基和 pKa=9.0 的氨基的两性物质
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二十七
做农药残留分析的,用的是 UV2487 检测器,想问一下,C18 色谱柱用什么缓冲液比较好,我以前做三聚氰胺是用柠檬酸,辛烷磺酸钠,也用农药检测行不行?还有用 HLB 柱能不能去除蔬菜和水果中的杂质?答:C18 色谱柱用用磷酸盐,醋酸盐就比较好啊,离子对试剂不是个好东东,你要慎用。我们做三聚氰胺用三
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二十二
为了节约成本我们自己填保护柱,用废的同型号柱子填。但填完以后做标样定量分析有所改变。请问其原因。答:不建议自己填保护柱柱芯,填得不好的柱芯会影响分离效果,也会影响定量分析结果。你不知道废柱子里的填料是不是受了污染,另外你填的柱芯肯定没有厂商填得好,如果影响到峰形,峰面积积分结果有所改变是可能的。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题六十一
现在色谱柱和仪器的接口还没有标准化吗,除了检测池的出入管较小外,色谱柱的接口与PEEK头不匹配的有哪个型号的色谱柱,以后使用的时候需要注意一点。同时发现使用过金属接头的色谱柱再换成PEEK头,常易漏液,这是因为金属头易使色谱柱接口变形吗?答:色谱柱接头其实大都不是色谱柱厂商自己生产的,供货商有多个,
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题及分析汇总
1、网上对柱子是否可以反冲一直有争论,那什么样的柱子可以反冲,什么不可以。反冲后是正者用,还是反着用。具体到各型号柱子不仅是 ODS 柱,其他如正向柱、氨基柱、离子交换柱等最好都有解释。答:一般的正相反相柱应该都能反冲,只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲,不过目前这样的柱子已经比较少见了。反冲是为
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题六十四
苯基柱,氰基柱该什么时候考虑用?答:苯基柱用于含苯环的芳香族化合物的测定时,具有较高的选择性。CN 柱可作为一个保留能力最弱的反相柱使用,也可作为一个活性降低的正相柱使用(保留时间比硅胶柱和氨基柱低很多)。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题八十五
对于一根常用的 c18 柱,拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护?为什么要这样做?答:新柱活化,实际上是一个平衡的过程,除了用流动相平衡外,有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡,特别是测定分子量比较高的多肽,尤其重要。因为分子量高的物质分子,扩散速度慢,平衡所需时间也相应较长。具体平衡方式也很简
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题六十二
新的 C18 柱,在进样之前我用 100% 的甲醇冲了半个多小时。刚才看到上面写的要活化什么的?不知道我只冲洗半小时就开始用对柱子有没有影响?对出峰什么的有没有影响呢?答:不是所有的测定,都需要对新柱子用所测样品老化。但先按方法程序进样几针,观察到峰面积保留时间不再有明显变化,再开始正式测定,这是一
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题四十六
1、分离效果与 ODS 比较,是相当呢,还是更胜一筹,或是更差?2、我原以为它是整体住,但看过资料后发现也是颗粒的比如 5u,请问该类型的柱是否符合速率理论、是不是粒径越小分离效果会几何级的增加?3、问什么没有 1.7u 的这种柱出现呢?答:聚合物基质色谱柱的优点主要是它耐高温、耐酸碱。缺点有:对小
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题八十一
色谱柱技术的技术要点在哪里?答:色谱柱技术包括填料技术和装柱技术,填料技术自不待言,填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。装柱技术也没有想象中的这么简单,不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度,装柱工艺都有所不同,要装出紧密、稳定、均一的柱床,更多是一门艺术,需要经验积累。国内和国外想比
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题六十八
反相离子对色谱法中,离子对是如何起作用的,是离子对试剂的非极性端溶解在填料的非极性端里,解离端伸向流动相,对含胺化合起离子交换作用,还是样品与离子对生成紧密的结合物,离子对试剂掩藏化合物中的极性基团,还是这种结合物是在解离与结合的动态平衡之中? 答:首先离子对试剂的解离端和目标离子形成离子缔合物,降
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二十三
色谱柱的接头,出口处用的是 peek 接头,请问都用 peek 接头不行么,为什么?答:都用 PEEK 接头我认为都可以的,当然 PEEK 接头的质量要过关。有人认为 PEEK 接头不耐压,估计是针对品质不好的产品说的。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题六十三
同样类型柱子还有长度,粒径等差异,这些该怎么去选择?答:长度和粒径都是用来改变柱效的,选择原则是够用就好。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题六十九
磷酸盐缓冲盐渗透力强,为什么,是因为与醋酸盐,枸椽酸盐相比,基团小吗,使用磷酸盐缓冲液与其它缓冲液相比,会使色谱柱寿命缩短多少?答:经常用磷酸盐,在其它条件差不多一样的情况下,柱子寿命肯定比不用磷酸缓冲盐相对短一些。但用磷酸盐也有不可取代的优点吧,否则不可能现在大部分人还在用。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二十六
液相色谱柱一般使用寿命多长?不同类型的色谱柱是否寿命也不一样?液相色谱柱与气相的柱子有何区别呢?答:液相色谱柱一般使用寿命多长!我有一根柱子,用了大约 1 年半左右,发现同样浓度的样品它的峰展宽了。说明柱效下降。但是不影响结果。因为峰面积还是接近。所以做色谱之前先做下柱子性能测试。第一次的图谱要保留