关于单克隆抗体技术的细胞融合的介绍
首先制备细胞培养基、 氨基喋呤(A)贮存液、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷(HT)贮存液等各种细胞生长所需的营养物质。然后制备髓瘤细胞和脾淋巴细胞,之后进行细胞融合。在细胞融合后选择性培养过程中,由于大量骨髓瘤细胞和脾细胞相继死亡,此时单个或少数分散的杂交瘤细胞多半不易存活,通常必须加入其他活细胞使之繁殖,这 种被加入的活细胞称为饲养细胞。饲养细胞促进其他细胞增殖的机制尚不明了,一般认为它们可能释放非种属特异性的生长刺激因子,为杂交瘤细胞提供必要的生长 条件;也可能是为了满足新生杂交瘤细胞对细胞密度的依赖性。......阅读全文
关于单克隆抗体技术的细胞融合的介绍
首先制备细胞培养基、 氨基喋呤(A)贮存液、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷(HT)贮存液等各种细胞生长所需的营养物质。然后制备髓瘤细胞和脾淋巴细胞,之后进行细胞融合。在细胞融合后选择性培养过程中,由于大量骨髓瘤细胞和脾细胞相继死亡,此时单个或少数分散的杂交瘤细胞多半不易存活,通常必须加入其他活细胞使之繁
关于单克隆抗体细胞融合的过程介绍
融合的方法很多,常用的有转动法和离心法。融合时脾细胞和骨髓瘤细胞的比例为1:1至10:1不等。3:1或5:1最为常用。 1.试剂与材料 (1)供融合用的脾细胞及骨髓瘤细胞。 (2)1640培养液100ml。 (3)完全1640液100ml。 (4)2.5%FCS-1640液50ml。
单克隆抗体技术:细胞融合
实验概要本文介绍了单克隆抗体技术——细胞融合实验的操作流程。实验原理细胞融合的方法有物理法,如电融合、激光融合,化学融合法和生物融合法,如仙台病毒,此处例举化学融合法中的一种即聚乙二醇融合法。 聚乙二醇(PEG),在分子量为200~700时,呈无色、无臭的粘稠状液体,分子量大于1 000时,呈乳
单克隆抗体技术:细胞融合
实验概要本文介绍了单克隆抗体技术——细胞融合实验的操作流程。实验原理细胞融合的方法有物理法,如电融合、激光融合,化学融合法和生物融合法,如仙台病毒,此处例举化学融合法中的一种即聚乙二醇融合法。 聚乙二醇(PEG),在分子量为200~700时,呈无色、无臭的粘稠状液体,分子量大于1 000时,呈乳
单克隆抗体技术:细胞融合
融合剂 细胞融合的方法有物理法,如电融合、激光融合,化学融合法和生物融合法,如仙台病毒,此处例举化学融合法中的一种即聚乙二醇融合法。 聚乙二醇(PEG),在分子量为200~700时,呈无色、无臭的粘稠状液体,分子量大于1 000时,呈乳白色蜡状固体,能溶于水、乙醇及其他许多有机溶剂,对热稳定,与
单克隆抗体技术:细胞融合
实验概要本文介绍了单克隆抗体技术——细胞融合实验的操作流程。实验原理细胞融合的方法有物理法,如电融合、激光融合,化学融合法和生物融合法,如仙台病毒,此处例举化学融合法中的一种即聚乙二醇融合法。 聚乙二醇(PEG),在分子量为200~700时,呈无色、无臭的粘稠状液体,分子量大于1 000时,呈乳
单克隆抗体的细胞融合关键介绍
1.技术上的误差常常导致融合的失败。例如,供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。2.融合试验最大的失败原因是污染,融合成功的关键是提供一个无毒无菌的操作环境。
单克隆抗体的细胞融合
融合剂 细胞融合的方法有物理法,如电融合、激光融合,化学融合法和生物融合法,如灭活的仙台病毒,此处例举化学融合法中的一种即聚乙二醇融合法。聚乙二醇(PEG),在分子量为200~700时,呈无色、无臭的粘稠状液体,分子量大于1000时,呈乳白色蜡状固体,能溶于水、乙醇及其他许多有机溶剂,对热稳定
单克隆抗体的细胞融合
融合剂 细胞融合的方法有物理法,如电融合、激光融合,化学融合法和生物融合法,如灭活的仙台病毒,此处例举化学融合法中的一种即聚乙二醇融合法。聚乙二醇(PEG),在分子量为200~700时,呈无色、无臭的粘稠状液体,分子量大于1000时,呈乳白色蜡状固体,能溶于水、乙醇及其他许多有机溶剂,对热稳定
关于细胞融合技术的意义价值介绍
细胞融合不仅可用于基础研究,而且还有重要的应用价值,在植物育种方面已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。细胞融合另一个重要应用就是制备单克隆抗体。单克隆抗体可以用作诊断试剂,治疗疾病和运载药物,具有准确,高效,简易,快速等优点。 ⒈理论上说任何细胞,都有可能通过体细胞杂
关于单克隆抗体技术的介绍
一种免疫学技术,将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞进行细胞融合, 获得既能产生抗体, 又能无限增殖的杂种细胞,并以此生产抗体。是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体,对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。 单克隆抗体技术(monoclonal antibody t
单克隆抗体细胞融合的融合剂的介绍
细胞融合的方法有物理法,如电融合、激光融合,化学融合法和生物融合法,如灭活的仙台病毒,此处例举化学融合法中的一种即聚乙二醇融合法。聚乙二醇(PEG),在分子量为200~700时,呈无色、无臭的粘稠状液体,分子量大于1000时,呈乳白色蜡状固体,能溶于水、乙醇及其他许多有机溶剂,对热稳定,与许多化
单克隆抗体技术的方法细胞融合操作过程
首先制备细胞培养基、 氨基喋呤(A)贮存液、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷(HT)贮存液等各种细胞生长所需的营养物质。然后制备髓瘤细胞和脾淋巴细胞,之后进行细胞融合。在细胞融合后选择性培养过程中,由于大量骨髓瘤细胞和脾细胞相继死亡,此时单个或少数分散的杂交瘤细胞多半不易存活,通常必须加入其他活细胞使之繁殖,
单克隆抗体细胞融合
单克隆抗体细胞融合(一)融合剂 细胞融合的方法有物理法,如电融合、激光融合,化学融合法和生物融合法,如仙台病毒,此处例举化学融合法中的一种即聚乙二醇融合法。聚乙二醇(PEG),在分子量为200~700时,呈无色、无臭的粘稠状液体,分子量大于1 000时,呈乳白色蜡状固体,能溶于水、乙醇及其他许多有机
关于单克隆抗体技术的细胞筛选的介绍
杂交瘤细胞在融合后2周左右即可筛选,即把分泌所需抗体的杂交瘤孔从众多的孔中选出来,通常也称为抗体检测。抗体检测的方法很多,通常根据所研究的抗原和 实验室的条件而定。但作为杂交瘤筛选的抗体检测方法必须具有快速、准备、简便,便于一次处理大量样品等特点。因为往往有几百个样品需要在短短几个小时就报 告结
关于细胞融合的基本介绍
细胞融合(cell fusion),细胞遗传学名词,是在自发或人工诱导下,两个细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。基本过程包括细胞融合形成异核体(heterokaryon)、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。细胞融合可作为一种实验方法被广泛适用于单克隆抗体的制备,膜蛋白的
关于细胞融合的过程介绍
细胞膜有内外两层,细胞融合首先发生在外层,然后再到内层,由此就出现了两种融合通道,细胞体内物质通过这两种通道转移。病毒膜与目标细胞融合时,只出现一种融合通道,即导致融合的基因只能在病毒中找到,而在目标细胞中却找不到。但是,通过EFF-1发生的细胞融合则是一个双向融合过程,需要EFF-1出现在两个
关于细胞融合的方法介绍
同种细胞在培养时2个靠在一起的细胞自发合并,称自发融合;异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合,称诱发融合。 一、仙台病毒法融合 ①两种细胞在一起培养,加入病毒,在4℃条件下病毒附着在细胞 膜上。并使两细胞相互凝聚; ②在37℃中,病毒与细胞膜发生反应,细胞膜受到破环,此时需 要Ca2+
单克隆抗体的细胞融合(cell-fusion)过程
融合的方法很多,常用的有转动法和离心法。 融合时脾细胞和骨髓瘤细胞的比例为1:1至10:1不等。3:1或5:1最为常用。 1.试剂与材料 (1) 供融合用的脾细胞及骨髓瘤细胞。 (2) 1640培养液100ml。 (3) 完全1640液100ml。 (4) 2.5%FCS-1640液50ml。 (5
单克隆抗体细胞融合剂
细胞融合的方法有物理法,如电融合、激光融合,化学融合法和生物融合法,如仙台病毒,此处例举化学融合法中的一种即聚乙二醇融合法。 聚乙二醇(PEG),在分子量为200~700时,呈无色、无臭的粘稠状液体,分子量大于1 000时,呈乳白色蜡状固体,能溶于水、乙醇及其他许多有机溶剂,对热稳定,与许
细胞融合技术的融合方法介绍
同种细胞在培养时2个靠在一起的细胞自发合并,称自发融合;异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合,称诱发融合。仙台病毒法融合①两种细胞在一起培养,加入病毒,在4℃条件下病毒附着在细胞膜上。并使两细胞相互凝聚;②在37℃中,病毒与细胞膜发生反应,细胞膜受到破环,此时需要Ca2+和Mg2+,最适PH为8.0
细胞融合技术的诱导物介绍
细胞融合的诱导物种类很多.常用的主要有生物法用灭活的仙台病毒(Sendai virus),化学法如用聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)和物理法如电脉冲,振动、离心、电激。目前应用最广泛的是聚乙二醇,因为它易得、简便,且融合效果稳定。PEG的促融机制尚不完全清楚,它可能引起细胞膜
关于单克隆抗体技术的重要意义介绍
单克隆抗体(monoclonal antibody,Mab)技术是20世纪免疫学技术的一项里程碑式突破。该技术将免疫小鼠的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合生成杂交瘤细胞,这种杂交瘤细胞核内含有双亲细胞的染色体,继承了亲代细胞的特征。它既具有瘤细胞在体外培养中迅速增殖的能力,又具备免疫脾细胞合成和分
关于细胞融合技术的历史发展简介
19世纪30年代,科学家们相继在肺结核,天花,水痘,麻疹等疾病患者的病理组织中观察到多核细胞。 19世纪70年代,科学家们在蛙的血细胞中也看到了多核细胞的现象,但是当时科学发展水平的限制,没有给予足够重视。 1962年,日本科学家发现日本血凝型病毒能引起艾氏腹水瘤细胞融合的现象。 1965
单克隆抗体技术的介绍
单克隆抗体技术(monoclonal antibody technique) 1975年英国科学家Milstein和Kohler所发明,并获得1984年诺贝尔医学奖。 1984 德国人G. J. F.Kohler、阿根廷人C. Milstein[3]和丹麦科学家N. K. Jerne由于发展了单
关于细胞融合的发展简史介绍
19世纪30年代,科学家们相继在肺结核,天花,水痘,麻疹等疾病患者的病理组织中观察到多核细胞。 19世纪70年代,科学家们在蛙的血细胞中也看到了多核细胞的现象,但是当时科学发展水平的限制,没有给予足够重视。 1962年,日本科学家发现日本血凝型病毒能引起艾氏腹水瘤细胞融合的现象。 1965
关于细胞融合的应用价值介绍
细胞融合不仅可用于基础研究,而且还有重要的应用价值,在植物育种方面已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。细胞融合另一个重要应用就是制备单克隆抗体。单克隆抗体可以用作诊断试剂,治疗疾病和运载药物,具有准确,高效,简易,快速等优点。
关于细胞融合实验的步骤介绍
1. DMEM或1640基础培养基、PEG溶液置于37℃水浴中预温; 2. 将Balb/c小鼠摘眼球处死后,浸入75%洒精; 3. 无菌取免疫小鼠的脾脏; 4. 脾脏用PBS洗涤后,放入无菌过滤的网筛,再把网筛放在盛有完全培养基的玻璃平皿中用研磨棒(或注射器针管)轻轻研磨或挤压,使其通过网
关于细胞融合的诱导物的介绍
细胞融合的诱导物种类很多.常用的主要有生物法用灭活的仙台病毒(Sendai virus),化学法如用聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)和物理法如电脉冲,振动、离心、电激。目前应用最广泛的是聚乙二醇,因为它易得、简便,且融合效果稳定。PEG的促融机制尚不完全清楚,它可能引起细
细胞融合技术的基本内容介绍
有性繁殖时发生的精卵结合是正常的细胞融合,即由两个配子融合形成一个新的二倍体。而细胞融合为在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。其中人工诱导的细胞融合,在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。由于它不仅能产生同种细胞融合,也能产生种间细胞的