将各种生物大分子从凝胶转移到一种固定基质上的过程称为印迹技术(blotting)。 Southern在1975年首先提出了分子印渍的概念。他将琼脂糖凝胶电泳分离的 DNA片段在凝胶中进行变性使其成为单链,然后将一张硝酸纤维素(nitrocellulose, NC)膜放在凝胶上,上面放上吸水纸巾,利用毛细管作用原理使凝胶中的DNA片段转移到 NC膜上,使之成为固相化分子。载有DNA单链分子的 NC膜就可以在杂交液与另一种带有标记的 DNA或RNA分子(即探针)进行杂交,具有互补序列的RNA或DNA结合到存在于NC膜的 DNA分子上,经放射自显影或其他检测技术就可以显现出杂交分子的区带。由于这种技术类似于用吸墨纸吸收纸张上的墨迹,因此称为“blotting”,译为“印迹技术”。 生物大分子印迹技术发展极为迅速,己广泛用于 DNA、RNA、蛋白质的检测。通常人们将DNA印迹技术称为Southern blotting,将RNA印......阅读全文
将各种生物大分子从凝胶转移到一种固定基质上的过程称为印迹技术(blotting)。 Southern在1975年首先提出了分子印渍的概念。他将琼脂糖凝胶电泳分离的 DNA片段在凝胶中进行变性使其成为单链,然后将一张硝酸纤维素(nitrocellulose, NC)膜放在凝胶上,上面放上吸水纸巾
基本原理 当模板分子(印迹分子)与聚合物单体接触时会形成多重作用点,通过聚合过程这种作用就会被记忆下来,当模板分子除去后,聚合物中就形成了与模板分子空间构型相匹配的具有多重作用点的空穴,这样的空穴将对模板分子及其类似物具有选择识别特性。 基本步骤 1.在一定溶剂(也称致孔剂)中,模板分子与
目前,根据模板分子和聚合物单体之间形成多重作用点方式的不同,分子印迹技术可以分为两类: 1.共价键法(预组装方式) 聚合前印迹分子与功能单体反应形成硼酸酷、西夫碱、亚胺、缩醛等衍生物,通过交联剂聚合产生高分子聚合物,用水解等方法除去印迹分子即得到共价结合型分子印迹聚合物。 2.非共价键法(
1.用于化学仿生传感器 由于MIPS对于印迹分子的高选择性,故可以作为仿生传感器的分子识别元件;这种分子识别作用可以通过信号转化器(压电晶体、电极、电阻等)输出,然后通过各种电、热、光等手段转换成可测信号,可定量分析各种小分子有机化合物。 2.色谱分离 MIPS最广泛的应用之一是利用其特异
分子印迹分离技术是指获得在空间结构和结合位点上与某一分子(印迹分子)完全匹配的聚合物的过程。1、分子印迹分离技术的原理: 当印迹分子与聚合物单体接触时会形成多重结合位点,通过聚合过程这种作用被记忆下来,当除去印迹分子后,聚合物中形成了与印迹分子空间结构完全匹配的具有多重结合位点
分子印迹分离技术是指获得在空间结构和结合位点上与某一分子(印迹分子)完全匹配的聚合物的过程。1、分子印迹分离技术的原理:当印迹分子与聚合物单体接触时会形成多重结合位点,通过聚合过程这种作用被记忆下来,当除去印迹分子后,聚合物中形成了与印迹分子空间结构完全匹配的具有多重结合位点的空穴,这样的空穴将对印
1.预定性,即它可以根据不同的目的制备不同的MIPs,以满足各种不同的需要。 2.识别性,即MIPS是按照模板分子定做的,可专一地识别印迹分子。 3.实用性,即它可以与天然的生物分子识别系统如酶与底物、抗原与抗体、受体与激素相比拟,但由于它是由化学合成的方法制备的,因此又有天然分子识别系统所
SDS-PAGE和免疫印迹 一:蛋白质的提取 1、取出细胞,倒去培养液,用PBS洗涤细胞一次,充分除去PBS液体,把细胞置于冰上。配置细胞裂解液,细胞裂解液用灭菌水配置,然后按照1:100比例加入PMSF混匀,然后按照细胞的多少加入裂解液于培养瓶中,在冰上放置20min。在此期间每隔3-5m
免疫印迹法分三个阶段进行.第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE):抗原等蛋白样品经SDS处理后带阴电荷,在聚丙烯酰胺凝胶中从阴极向阳极泳动,分子量越小,泳动速度就越快.此阶段分离效果肉眼不可见(只有在染色后才显出电泳区带).第二阶段为电转移:将在凝胶中已经分离的条带转移至硝酸纤维素
印迹法(blotting)即转移电泳,是20世纪70年代发展起来的一种新方法。Southern于1975年建立了检测特异DNA片段的DNA- RNA杂交法,称作Southern印迹法。1977年Alwine等把此方法应用到RNA的研究方面,称作Nouthern印迹法。1979年Towbin等则把