聚合酶链式反应的原理简介

DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。 但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶,不仅操作烦琐,而且价格昂贵,制约了PCR技术的应用和发展。 耐热DNA聚合酶--Taq酶的发现对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。 PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本......阅读全文

聚合酶链式反应的原理简介

  DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,

聚合酶链式反应的原理

DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DN

聚合酶链式反应检查的简介

  聚合酶链式反应是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法,故又称为基因的体外扩增法。PCR技术类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

递减聚合酶链式反应的简介

  递减PCR,亦称降落PCR(touchdown PCR)是一种PCR(聚合酶链式反应)方法,用来避免非特异性序列的扩增。PCR中引物的黏合温度(annealing temperature)决定了黏合的特异性,温度越高特异性越强,但过高则不能实现引物和模板的结合,而过低会产生大量非特异性产物。因此

聚合酶链式反应(PCR)的原理

PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备

PCR(聚合酶链式反应)的反应原理

  【原理】  PCR(polymerase chain reaction)用于在体外将微量的目标DNA大量扩增,以便进行分析。反应体系:①样品DNA;②引物(primer),是人工合成的一对寡核苷酸链(约15-20个核苷酸),用于扩增夹在双引物与模板DNA互补区之间的区域;③4种dNTP;④Tag

聚合酶链式反应(PCR)的反应原理

PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变

聚合酶链式反应的的基本原理

DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DN

聚合酶链式反应PCR原理是什么?

PCR(聚合酶链式反应)技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性→退火→延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合

聚合酶链式反应(PCR)的原理和具体过程

原理就是DNA半保留复制吧过程只要记住1.DNA变性(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下, 氢键断裂,形成单链DNA2.退火(25℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。3.延伸(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP为原料,从引物

聚合酶链式反应

实验方法原理实验材料热稳定 DNA 聚合酶旁观者 DNA正向引物反向引物模板 DNA试剂、试剂盒扩增缓冲液氯仿dNTP 贮存液仪器、耗材聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶屏蔽型枪头离心管正向排液式移液器PCR仪实验步骤一、材料1. 缓冲液与溶液10X 扩增缓冲液氯仿4 种 dNTP 贮存液(20 mmol/

聚合酶链式反应

一、材料1. 缓冲液与溶液10X 扩增缓冲液氯仿4 种 dNTP 贮存液(20 mmol/L,pH 8.0)2. 酶与缓冲液热稳定 DNA 聚合酶3. 凝胶聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶4. 核苷酸与寡聚核苷酸旁观者 DNA正向引物(20 μmol/L)及

聚合酶链式反应

实验方法原理 实验材料 热稳定 DNA 聚合酶旁观者 DNA正向引物反向引物模板 DNA试剂、试剂盒 扩增缓冲液氯仿dNTP 贮存液仪器、耗材 聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶屏蔽型枪头离心管正向排液式移液器PCR仪实验步骤 一、材料1. 缓冲液与溶液10X 扩增缓冲液氯仿4 种 dNTP 贮存液(20

质谱法的原理简介

  使试样中各组分电离生成不同荷质比的离子,经加速电场的作用,形成离子束,进入质量分析器,利用电场和磁场使发生相反的速度色散——离子束中速度较慢的离子通过电场后偏转大,速度快的偏转小;在磁场中离子发生角速度矢量相反的偏转,即速度慢的离子依然偏转大,速度快的偏转小;当两个场的偏转作用彼此补偿时,它们的

电桥的原理简介

  如图,假设四个电阻固定,当s闭合时,若满足:“R3*R2=R1*R4”,即对角的电阻乘积相等,则此时Uad等于0,就是ad间没有电压。利用这个原理,当等式两边四个量中的一个为未知量的时候,如果调节其余三个电阻的值能使得等式成立,那么用公式就可以得到未知量。但是实际上只要等式两边各有一个可以调节的

简介热像仪的原理

  红外热像仪是利用红外探测器、光学成像物镜和光机扫描系统(先进的焦平面技术则省去了光机扫描系统)接受被测目标的红外辐射能量分布图形反映到红外探测器的光敏元上,在光学系统和红外探测器之间,有一个光机扫描机构(焦平面热像仪无此机构)对被测物体的红外热像进行扫描,并聚焦在单元或分光探测器上,由探测器将红

醛固酮的原理简介

  醛固酮进入远曲小管和集合管上皮细胞后,与胞浆内受体结合,形成激素-受体复合体,后者通过核膜,与核中DNA特异性结合位点相互作用,调节特异性mRNA转录,最终合成多种醛固酮诱导蛋白,进而使管腔膜对Na+的通透性增大,线粒体内ATP合成和管周膜上钠泵的活动性增加。从而导致对Na+的重吸收增强,对水的

抗凝剂的原理简介

  不同的抗凝剂其抗凝原理略有不同。  乙二胺四乙酸(EDTA)与枸橼酸盐的抗凝原理相同:是与血液中Ca离子结合成螯合物,使Ca失去活性,中断凝血过程,从而达到抗凝的目的。  肝素是通过加强抗凝血酶Ⅲ,灭活丝氨酸蛋白酶,阻止凝血酶的形成来达到抗凝的目的。  草酸盐是通过其草酸根与血液中的Ca离子形成

PCR)聚合酶链式反应

 PCR技术可用于:(1)检验感染性疾病是否处于隐性或亚临床状态;(2)有效检测癌基因的突变,准确检测癌基因的表达量;(3)临床应用于检测地中海贫血的基因突变。  实验方法原理 PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。  PCR由变性--退火--

聚合酶链式反应(PCR)

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是

聚合酶链式反应(PCR)

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是

聚合酶链式反应(PCR)

实验概要聚合酶链式反应(Polymerase  Chain  Reaction,PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。

聚合酶链式反应(PCR)

PCR技术可用于:(1)检验感染性疾病是否处于隐性或亚临床状态;(2)有效检测癌基因的突变,准确检测癌基因的表达量;(3)临床应用于检测地中海贫血的基因突变。实验方法原理基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成

简介脂肪测定仪的原理简介

  脂肪测定仪是主要用来测定粮食(包括玉米、稻谷)品质判定指标----脂肪酸值的专用设备,同时适用于其他粮食及粮食制品脂肪酸值测定。  脂肪测定仪依据索氏抽提原理,按照国标GB/T1472-2008设计的全自动粗脂肪测定仪。与其他同类产品相比,本仪器操作简单,可自动实现抽提、冲洗、预干燥等功能,用户

原位聚合酶链式反应和原位反转录聚合酶链式反应操作

(一)、仪器设备    英国Thermo Hybaid原位PCR仪。    (二)、操作流程      1、原位PCR步骤     1)预处理:     (1)切片常规脱蜡;     (2)0.2mol/L HCl处理10min;     (3)5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10min;    

dna聚合酶链式反应的概述

  这项技术有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题,被广泛地应用于遗传疾病的诊断、刑侦破案、基因克隆和DNA序列测定等各方面。  DNA聚合酶(DNA polymerase I)最早于1955年发现 ,而较具有实验价值及实用性的Klenow fragment of E.

聚合酶链式反应模板的制备

  PCR的模板可以是DNA,也可以是RNA。  模板的取材主要依据PCR的扩增对象,可以是病原体标本如病毒、细菌、真菌等。也可以是病理生理标本如细胞、血液、羊水细胞等。法医学标本有血斑、精斑、毛发等。  标本处理的基本要求是除去杂质,并部分纯化标本中的核酸。多数样品需要经过SDS和蛋白酶K处理。难

聚合酶链式反应的特点介绍

  特异性强  PCR反应的特异性决定因素为:  ①引物与模板DNA特异正确的结合;  ②碱基配对原则;  ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;  ④靶基因的特异性与保守性。  其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及TaqDN

聚合酶链式反应的发展背景

Khorana (1971)等最早提出核酸体外扩增的设想:“经DNA变性,与合适的引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可合成tRNA基因。”但由于当时基因序列分析方法尚未成熟,热稳定DNA聚合酶尚未报道以及引物合成的困难,这种想法似乎没有实际意义。加上分子克隆技术的出现提供了一种克隆

DNA聚合酶链式反应的概述

这项技术有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题,被广泛地应用于遗传疾病的诊断、刑侦破案、基因克隆和DNA序列测定等各方面。DNA聚合酶(DNA polymerase I)最早于1955年发现 ,而较具有实验价值及实用性的Klenow fragment of E. Coli